LZ-8基因在大肠杆菌中的表达

根据Murasugi等人发表的LZ 8基因的DNA序列 ,设计了两条引物 ,从灵芝孢子粉的基因组DNA中扩增到LZ 8基因 (3 5 6bp)。利用此基因及pET 3d质粒 ,构建了该基因的原核表达载体质粒 ,进一步将其转化进大肠杆菌HB10 1菌株中获得了表达该基因的基因工程菌株 ,并对IPTG诱导后的LZ 8蛋白进行了初步的SDS

灵芝LZ-8在烟草中的表达及产物特性的初步研究

将从灵芝中克隆的LZ-8基因构建成原核表达质粒pET-30a-lz8,在大肠杆菌BL21中表达。SDS-PAGE表明其分子量约为14kD,与推算出的氨基酸分子量相似。经金属镍离子螯合柱纯化后的原核表达产物为单一条带,纯化产物免疫兔子获得了高效价的抗血清。将该基因亚克隆到植物双元表达载体中,用农杆菌介导的方法转化烟草。经ELISA实验定量测定,重组LZ-8达到了烟草可溶性蛋白的0.18%(每克新鲜叶片约含149.82μgLZ-8重组蛋白)。体外活性检测表明,重组蛋白能有效地提高VeroE6细胞中肿瘤坏死因子(TNF-α)基因的mRNA转录水平,具有免疫调节相关功能。

灵芝lz-8基因乳酸菌表达载体的构建与表达及免疫特性

克隆灵芝lz-8基因并进行原核表达,通过动物试验检测其生理活性。根据GenBank公布的lz-8基因的DNA序列设计引物,从灵芝菌丝中提取灵芝总DNA,PCR扩增lz-8基因并连接到乳酸菌食品级表达载体pNZ8149,转化乳酸乳球菌NZ3900,于30℃Nisin诱导3 h,SDS-PAGE进行蛋白表达分析。将工程菌菌悬液给小鼠灌胃,对其碳廓清试验等免疫指标进行检测。结果表明:扩增到的lz-8基因序列全长330 bp,构建了原核表达载体pNZ8149-lz-8,LZ-8蛋白在NZ3900中得到表达。NZ3900/pNZ8149-lz-8菌悬液对小鼠各项免疫指标有明显的调节作用。

LZ-8基因的克隆及其在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达

用 PCR 从灵芝(Gamoderma lucidum)基因组扩增免疫蛋白 LZ-8基因,将其构建到酵母表达质粒 pPICZaA 中,采用电激转化法转化毕赤酵母,获得转化子。对其 Sourthern 杂交分析,结果表明 LZ-8基因整合到毕赤酵母基因组。对转化酵母作发酵培养,SDS—聚炳烯酰胺凝胶电泳检测到 LZ-8蛋白的表达。

真菌免疫调节蛋白基因LZ-8过表达载体的构建及转化灵芝原生质体的研究

灵芝Ganoderma lingzhi是我国著名的药用真菌。但是,作为一种营养和保健价值都非常高的大型担子菌,灵芝还缺乏完善的转基因方法和安全转基因体系。本研究建立了免疫调节蛋白基因的过表达系统,并利用真菌特异性启动子GPD、终止子NOS和目的基因LZ-8构建真菌特异性双T-DNA表达载体p SB130NG-LZ8;利用溶壁酶提取灵芝原生质体,并用FDA染色法检测灵芝原生质体活性,原生质体成活率约为80%。通过PEG转化法对灵芝原生质体成功进行了转化,转化得到的原生质体在带有潮霉素抗性平板上长出,转化率为3–4/μgpSB130NG-LZ8+107个原生质体。转化子通过PCR检测和荧光定量PCR检测,获得LZ-8在灵芝中的过表达。