La核糖核蛋白6对人血管内皮细胞增殖与凋亡的作用

目的 研究La核糖核蛋白6（Achn）在人血管内皮细胞增殖和凋亡中的调节作用.方法 （1）DMEM无血清培养基培养人血管内皮细胞株Eahy926细胞,按随机数字表法（下同）分为Achn抑制组（转染Achn抑制表达载体psi-Achn）、psi4.1空载体组（转染psi4.1）、Achn诱导组（转染Achn诱导表达载体pcDNA-Achn）、pcDNA3.1空载体组（转染pcDNA3.1）、Achn与钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶（CASK）共转染组（转染pcDNA-Achn与CASK抑制表达载体psi-CASK）、空白对照组（PBS处理）,分别于转染后1、24、48、72 h用噻唑蓝法测定各组细胞570 nm波长下的吸光度值.（2）取Eahy926细胞,裂解细胞总蛋白,二辛丁酸法定量后分为蛋白质印迹组（总蛋白量为20μg）、Achn蛋白沉淀组、CASK蛋白沉淀组、IgG对照组,后3组细胞蛋白总量各为100μg,免疫共沉淀法检测各组Achn、CASK蛋白水平.（3）取Eahy926细胞分为LPS组（5 mol/L LPS处理）、氯化钾组（5 mol/L氯化钾处理）、空白对照组（5 mol/L PBS处理）、Achn诱导转染组（转染pcDNA-Achn）、Achn与CASK共转染组（转染pcDNA-Achn与psi-CASK）,转染组转染24 h后加入LPS刺激12 h,免疫组织化学法检测各组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）蛋白表达.（4）取Eahy926细胞分为Achn诱导组（转染pcDNA-Achn）、Achn抑制组（转染psi-Achn）、对照组（PBS处理）,24 h后加入烧伤患者血清处理12 h,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率.对实验数据行t检验和单因素方差分析.结果 （1）Achn抑制组细胞增殖水平从24 h开始低于psi4.1空载体组,48、72 h时差异均有统计学意义（t值分别为10.777、6.112,P值均小于0.05）;转染后24、48、72 h Achn诱导组细胞增殖水平均显著高于pcDNA3.1空载体组（t值分别为5.367、6.053、9.831,P值均小于0.05）;Achn与CASK共转染组细胞增殖水平48、72 h均显著低于Achn诱导组（t值分别为5.481、9.517,P值均小于0.05）.（2）CASK蛋白沉淀组CASK抗体沉淀物中可同时检测到CASK蛋白和Achn蛋白,而Achn蛋白沉淀组Achn抗体沉淀物中可同时检测到Achn蛋白和CASK蛋白.（3）Achn诱导转染组血管内皮细胞caspase-3阳性表达率为（15.6±0.5）%,低于LPS组[（32.8±2.6）%,t=10.083,P＜0.05];Achn与CASK共转染组caspase-3阳性细胞表达率[（7.0±2.0）%]进一步降低,显著低于LPS组（t=9.827,P＜0.01）.（4）Achn抑制组细胞凋亡率为（45.6±10.9）%,显著高于对照组的（13.2±4.3）%,t=7.043,P＜0.05;Achn诱导组的细胞凋亡率为（5.3±2.9）%,显著低于对照组（t=6.499,P＜0.05）.结论Achn能促进入血管内皮细胞增殖,抑制LPS或烧伤血清诱导细胞凋亡并与CASK的作用相关联.