铜绿假单胞菌弹性蛋白酶LasB作用机制及其抑制剂的研究进展

铜绿假单胞菌(PA)广泛存在于自然界中,且易产生抗菌药物耐药性,致病性强,致死率高,其临床感染的管理和治疗存在极大的困难。弹性蛋白酶LasB是PA分泌的最丰富的蛋白酶,被认为是造成PA强致病性的毒力因子之一,具有造成宿主组织损伤、炎症反应、颠覆宿主免疫防御并建立持久定植的能力。本文就LasB的生物学特性和致病机制进行阐述,并对LasB及其抑制剂的研究近况展开综述,以期为PA临床治疗提供思路和方法。

Observation of Temperature Induced Plasma Frequency Shift in an Extremely Large Magnetoresistance Compound LaSb

We report an optical spectroscopy study on LaSb, a compound recently identified to exhibit extremely large magnetoresistance. Our optieal measurement indicates that the material has a low carrier density. More inter- estingly, the study reveals that the plasma frequency increases with decreasing temperature. This phenomenon suggests either an increase of the conducting carrier density or/and a decrease of the effective mass of carriers with decreasing temperature. We attribute it primarily to the latter effect. Two possible scenarios on its physical origin are examined and discussed. The study offers new insight into the electronic structure of this compound.

1364例恶性肿瘤p53蛋白表达的检测及其临床病理学意义

目的：探讨ｐ５３基因异常表达在人癌发生过程的病理生物学作用和临床病理学意义。方法：对人体１３６４例不同类型恶性肿瘤（其中６１５例鳞癌，３８２例腺癌及３６７例其它恶性肿瘤）及相应良性病变组织进行ｐ５３蛋白表达的免疫组化（ＬＡＳＢ法）检测。结果：恶性肿瘤组织ｐ５３蛋白表达的阳性检出率５６．７％（７７３／１３６４）明显高于良性病变组织 ６． ７％（４２／６２８）（Ｐ＜ ０． ００１）。结论：ｐ５３基因的异常表达（基因突变或／及蛋白积累）是人体多种恶性肿瘤病的普遍现象，可能是人癌发生发展过程中关键的变化之一。免疫组化检测ｐ５３蛋白过度表达可以作为区别良恶性病变有参考价值的指标之一。

重组酶介导等温扩增法检测食品中铜绿假单胞菌

目的建立重组酶介导等温扩增(recombinase-aided amplification,RAA)法快速、灵敏、特异检测食品中铜绿假单胞菌的分析方法。方法针对铜绿假单胞菌lasB基因的特异性保守区域,设计RAA特异性引物和exo探针,筛选出最优组合;对提取的目标基因组DNA进行检测,确定方法的特异性和灵敏度,并通过人工污染实验,比对不同检测方法对食品样品的检出限。结果建立的铜绿假单胞菌lasB基因RAA检测方法特异性良好,仅对铜绿假单胞菌有扩增曲线,对其他致病菌无交叉反应;方法对纯菌液的灵敏度为1.7 pg/μL。人工污染实验表明,方法对肉类样品中铜绿假单胞菌的检出限与传统方法一致,达1.0×103CFU/mL;RAA方法检测时间仅需20min。结论本研究建立的铜绿假单胞菌实时荧光RAA检测方法特异性强、灵敏度高、反应时间短,可用于食品中铜绿假单胞菌的快速检测。

来源于铜绿假单胞杆菌(Pseudomon asaeruginosa)所产蛋白酶PT121克隆表达及其在小肽合成上的应用

【目的】基于前期筛选到的P.aeruginosa PT121所产有机溶剂耐受性蛋白酶,本研究对该蛋白酶进行克隆表达,研究了重组蛋白的酶学性质及小肽合成上的应用。【方法】参考文献中报道的相似蛋白酶pseudolysin设计引物从菌株PT121基因组中克隆到耐有机溶剂蛋白酶PT121基因las B。构建诱导表达重组质粒p ET22b-las B,于大肠杆菌中进行表达。考察蛋白酶PT121酶学性质及小肽合成上的应用。【结果】序列分析表明las B基因编码信号肽、前肽及成熟肽3个部分,成熟肽部分含有301个氨基酸,分子量约33 k Da,属于金属蛋白酶M4家族。通过破碎条件优化,一步法制备得到较为纯净的重组蛋白酶PT121,其比活力达7700 U/mg,该酶呈现了较高的热稳定性,p H稳定性及溶剂耐受性,与野生菌P.aeruginosa PT121所产蛋白酶性质一致。在50%DMSO体系中高效催化合成了多种小肽,其中阿斯巴甜前体(Cbz-Asp-Phe-NH2)产率高达91%。【结论】蛋白酶PT121基因在大肠杆菌中克隆表达为进一步研究相关催化机理及分子改造奠定了基础。