霍乱毒素B亚单位工程菌MM2的表达与lac启动子的关系

研究了不同碳源(葡萄糖、乳酸和乙酸)以及IPTG诱导对工程菌MM2表达霍乱毒素B亚单位(CTB)的影响,ctb基因位于lac启动子的下游。在YC培养基中分别加入0.048mol/L的葡萄糖、0.102mol/L的乳酸和0.167mol/L的乙酸,它们在完全氧化后可产生相同的能量。结果表明,加入葡萄糖会大幅度降低ctb基因的表达水平,其原因和培养过程中pH值下降有关;加入乳酸可提高ctb基因表达水平1.15倍,且不抑制菌体生长;加入乙酸可提高ctb基因的表达水平0.9倍,但对菌体生长有抑制作用。不同时间及不同浓度的IPTG诱导未能提高ctb基因的表达水平,说明lac启动子对ctb基因的表达没有影响或影响很小。

Lac启动子在可溶性抗体Fab表达中的作用

目的 :探讨Lac启动子在可溶性抗体Fab表达中的作用。方法 :利用DNA重组的方法对P3 -3G9噬菌体抗体表达载体[1 ] 进行改建 ,通过免疫印迹试验鉴定新的载体P3G9-L是否有可溶性Fab的表达。结果 :1.P3G9-L为单Lac启动子同时驱动Fd段及K链的双顺反子的可溶性Fab段表达载体。 2 .P3G9-L中的Lac启动子的作用是缓和的 ,可溶性Fab表达量较低。结论 :1 Lac启动于可以用于可溶性抗体Fab的表达体系。 2

cAMP对lac基因启动子体外转录影响的研究

目的：研究ｃＡＭＰ对ｌａｃ基因启动子体外转录的影响作用。方法：以含ｌａｃ基因启动子及其Ｚ结构基因的线性ｐＵＲ２２２ＤＮＡ为模板，观察Ｅ．ｃｏｌｉＲＮＡ聚合酶受ｃＡＭＰ作用后的转录强度。结果：０．１０～０．８０ｍｍｏｌ／Ｌ的ｃＡＭＰ对ｌａｃ基因启动子体外转录有明显的促进作用，低于０．１０ｍｍｏｌ／Ｌ对体外非特异性转录有促进作用；浓度进一步增高对转录起抑制作用。ｃＡＭＰ作用下特异性与非特异性转录产物放射活性间无相关性。结论：ｃＡＭＰ对转录有双重作用，这种作用可能与启动子区的构象特点及ＲＮＡ聚合酶与启动子的特异结合有关。

启动子控制严密性对抗体库多样性影响的研究

目的：比较阿拉伯糖（ａｒａｂｉｎｏｓｅ，Ａｒａ）启动子和Ｌａｃ启动子的控制严密性，探讨启动子控制严密性对抗体库多样性的影响，寻找适合构建抗体库的启动子。方法：（１）以Ａｒａ启动子和Ｌａｃ启动子驱动抗ＨＢＳ、ＴＮＦ－α及角蛋白的人Ｆａｂ段，比较其本底表达。（２）比较两种启动子表达载体对宿主菌生长的影响。（３）观察两种启动子在抗体库扩增过程中对含有抗体基因的克隆重组率的影响。结果；证实（１）本底表达在Ｌａｃ启动子载体远高于Ａｒａ启动子载体；（２）经相应诱导物诱导后二者表达水平相似；（３）相同条件下，含有Ｌａｃ启动子的抗体表达载体的细菌与Ａｒａ启动子相比处于生长劣势。（４）在抗体库扩增过程中，含Ｌａｃ启动子的抗体库中抗体基因克隆的重组率逐步下降．而使用Ａｒａ启动子基本无变化。结论：启动子控制严密性差会导致抗体克隆重组率下降而影响抗体库的多样性，Ａｒａ启动子更适合于构建噬菌体抗体库。

乳糖诱导pET载体表达重组蛋白的研究

以重组人B淋巴细胞刺激因子 (hBLyS)蛋白表达宿主菌株BL2 1(DE3) (pET30 (a) /hBLyS)作为研究对象 ,借助SDS PAGE分析方法 ,对于用乳糖诱导由T7lac启动子控制的重组目的产物的表达规律进行了优化研究 .分析比较了诱导的起始阶段、所需的乳糖浓度和诱导持续时间等参数对重组产物表达的影响 .实验结果表明 ,对于T7lac启动子控制的重组目的产物 ,乳糖可以作为诱导剂 ;在对诱导条件进行优化控制的前提下 ,乳糖诱导目的产物的绝对表达量虽然不及IPTG ,但相对成本却比IPTG低得多 ,且没有毒性 .研究结果为乳糖作为诱导剂应用于重组基因工程药物工业化生产提供了一定的参考 .

启动子控制严密性对抗体库多样性影响的研究

目的 比较阿拉伯糖 (arabinose,Ara)启动子和Lac启动子的控制严密性 ,探讨启动子控制严密性对抗体库多样性的影响 ,寻找适合构建抗体库的启动子。方法 1 以Ara启动子和Lac启动子驱动抗HBs、TNF α及角蛋白的人Fab段 ,比较其本底表达。 2 比较 2种启动子表达载体对宿主菌生长的影响。 3 观察 2种启动子在抗体库扩增过程中对含有抗体基因的克隆重组率的影响。结果1 本底表达在Lac启动子载体远高于Ara启动子载体 ;2 经相应诱导物诱导后二者表达水平相似 ;3 相同条件下 ,含有Lac启动子的抗体表达载体的细菌与Ara启动子相比处于生长劣势。 4 在抗体库扩增过程中 ,含Lac启动子的抗体库中抗体基因克隆的重组率逐渐下降 ,而使用Ara启动子基本无变化。结论 启动子控制严密性差会导致抗体克隆重组率下降而影响抗体库的多样性 ,Ara启动子更适合于构建噬菌体抗体库。