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穿膜肽-LacI HPM载体的构建及其DNA结合活性测定
被引量:
1
1
作者
绳纪坡
张宏达
+2 位作者
于芳
黄君健
胡宝成
《生物技术通讯》
CAS
2013年第6期778-781,共4页
目的:借助穿膜肽TAT高效跨膜的特性和LacI前头肽突变体(LacI HPM)高亲和力结合DNA的特性,构建新型基因转导载体。方法:PCR扩增LacI、LacI基因前头肽序列、前头肽序列突变体、TAT序列的编码基因,构建前头肽序列突变体和TAT的原核表达载体...
目的:借助穿膜肽TAT高效跨膜的特性和LacI前头肽突变体(LacI HPM)高亲和力结合DNA的特性,构建新型基因转导载体。方法:PCR扩增LacI、LacI基因前头肽序列、前头肽序列突变体、TAT序列的编码基因,构建前头肽序列突变体和TAT的原核表达载体,可溶性表达TAT-LacI HPM融合蛋白并纯化,在缓冲液中氧化获得TATLacI HPM二聚体并浓缩,PCR检测二聚体融合蛋白与质粒的体外结合能力。结果:获得了pET-28a(+)-LacI HPM及pET-28a(+)-TAT-LacI HPM表达质粒,表达纯化并获得二聚化融合蛋白,体外结合实验确定TAT-LacI HPM二聚体融合蛋白与检测质粒DNA具有特异的高亲和力结合活性。结论:构建了穿膜肽TAT-LacI HPM,为进一步研究其作为新型DNA转运载体的可行性奠定了基础。
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关键词
穿膜
肽
laci
laci前头肽突变体
DNA结合活性
下载PDF
职称材料
穿膜肽介导的新型基因转运载体的功能研究
2
作者
张宏达
绳纪坡
+2 位作者
于芳
黄君健
胡宝成
《生物技术通讯》
CAS
2013年第6期782-786,共5页
目的:借助穿膜肽TAT高效跨膜的特性和LacI前头肽突变体(LacI HPM)高亲和力结合DNA的特性,建立一种安全高效、无基因插入片段大小限制的基因转导系统。方法:在TAT-LacI HPM片段C端和N端分别添加GST标签,构建pET-28a(+)-TAT-LacI HPM-GST...
目的:借助穿膜肽TAT高效跨膜的特性和LacI前头肽突变体(LacI HPM)高亲和力结合DNA的特性,建立一种安全高效、无基因插入片段大小限制的基因转导系统。方法:在TAT-LacI HPM片段C端和N端分别添加GST标签,构建pET-28a(+)-TAT-LacI HPM-GST和pGEX-GST-TAT-LacI HPM重组表达载体,可溶性表达TAT-LacI HPM-GST及GST-TAT-LacI HPM融合蛋白并纯化,获得TAT-LacI HPM二聚体,免疫荧光检测TAT-LacI HPM融合蛋白穿过HeLa细胞膜的情况,观察EGFP的表达,用免疫印迹检测TAT-LacI HPM融合蛋白介导质粒DNA进入细胞的能力。结果:表达、纯化并获得二聚体融合蛋白,体内实验表明其具有跨膜能力,能介导带有LacI结合序列的DNA质粒进入细胞,并在转染细胞里检测到了目的蛋白。结论:初步证实TAT-LacI HPM融合蛋白作为一种新型通用性非病毒DNA转运载体的可行性,为评价这种新型DNA疫苗载体在提高免疫效果方面的可行性奠定了前期实验基础。
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关键词
穿膜
肽
laci前头肽突变体
二聚体
DNA转运
下载PDF
职称材料
题名
穿膜肽-LacI HPM载体的构建及其DNA结合活性测定
被引量:
1
1
作者
绳纪坡
张宏达
于芳
黄君健
胡宝成
机构
军事医学科学院生物工程研究所
出处
《生物技术通讯》
CAS
2013年第6期778-781,共4页
基金
国家自然科学基金(31070760
30770651
30670616)
文摘
目的:借助穿膜肽TAT高效跨膜的特性和LacI前头肽突变体(LacI HPM)高亲和力结合DNA的特性,构建新型基因转导载体。方法:PCR扩增LacI、LacI基因前头肽序列、前头肽序列突变体、TAT序列的编码基因,构建前头肽序列突变体和TAT的原核表达载体,可溶性表达TAT-LacI HPM融合蛋白并纯化,在缓冲液中氧化获得TATLacI HPM二聚体并浓缩,PCR检测二聚体融合蛋白与质粒的体外结合能力。结果:获得了pET-28a(+)-LacI HPM及pET-28a(+)-TAT-LacI HPM表达质粒,表达纯化并获得二聚化融合蛋白,体外结合实验确定TAT-LacI HPM二聚体融合蛋白与检测质粒DNA具有特异的高亲和力结合活性。结论:构建了穿膜肽TAT-LacI HPM,为进一步研究其作为新型DNA转运载体的可行性奠定了基础。
关键词
穿膜
肽
laci
laci前头肽突变体
DNA结合活性
Keywords
cell-penetrating peptides
laci
laci
headpiece mutant
DNA binding activities
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
穿膜肽介导的新型基因转运载体的功能研究
2
作者
张宏达
绳纪坡
于芳
黄君健
胡宝成
机构
军事医学科学院生物工程研究所
出处
《生物技术通讯》
CAS
2013年第6期782-786,共5页
基金
国家自然科学基金(31070760
30770651
30670616)
文摘
目的:借助穿膜肽TAT高效跨膜的特性和LacI前头肽突变体(LacI HPM)高亲和力结合DNA的特性,建立一种安全高效、无基因插入片段大小限制的基因转导系统。方法:在TAT-LacI HPM片段C端和N端分别添加GST标签,构建pET-28a(+)-TAT-LacI HPM-GST和pGEX-GST-TAT-LacI HPM重组表达载体,可溶性表达TAT-LacI HPM-GST及GST-TAT-LacI HPM融合蛋白并纯化,获得TAT-LacI HPM二聚体,免疫荧光检测TAT-LacI HPM融合蛋白穿过HeLa细胞膜的情况,观察EGFP的表达,用免疫印迹检测TAT-LacI HPM融合蛋白介导质粒DNA进入细胞的能力。结果:表达、纯化并获得二聚体融合蛋白,体内实验表明其具有跨膜能力,能介导带有LacI结合序列的DNA质粒进入细胞,并在转染细胞里检测到了目的蛋白。结论:初步证实TAT-LacI HPM融合蛋白作为一种新型通用性非病毒DNA转运载体的可行性,为评价这种新型DNA疫苗载体在提高免疫效果方面的可行性奠定了前期实验基础。
关键词
穿膜
肽
laci前头肽突变体
二聚体
DNA转运
Keywords
cell-penetrating peptides
laci
headpiece mutant
dimer
DNA delivery
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
穿膜肽-LacI HPM载体的构建及其DNA结合活性测定
绳纪坡
张宏达
于芳
黄君健
胡宝成
《生物技术通讯》
CAS
2013
1
下载PDF
职称材料
2
穿膜肽介导的新型基因转运载体的功能研究
张宏达
绳纪坡
于芳
黄君健
胡宝成
《生物技术通讯》
CAS
2013
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
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引证文献
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