肠炎沙门菌fimA、flhD基因启动子克隆及其LacZ报告质粒的构建

肠炎沙门菌是引起人食源性疾病的主要人兽共患病原菌之一,其感染机制与细菌染色体上特定的毒力岛以及毒力质粒上的某些毒力基因有关。基于对肠炎沙门菌毒力基因的前期研究,以毒力因子SEF21菌毛编码基因fim A和鞭毛调控基因flh D为研究对象,通过PCR从肠炎沙门菌50336中扩增靶基因的上游启动子序列Pfim A和Pflh D,克隆到质粒p RS551中构建lac Z报告质粒,并将其转化入肠炎沙门菌50336中,再通过β-半乳糖苷酶试验检测其活性,为进一步利用Lac Z报告系统定量研究肠炎沙门菌内SEF21菌毛和鞭毛的毒力表达奠定基础平台。

尾静脉高压注射质粒DNA后体内表达的规律

目的研究小鼠尾静脉高压注射质粒DNA后，目的基因在体内分布表达的规律，以及该方法的转基因效率。方法将LacZ质粒按小鼠体重比稀释到一定的PBS中，经尾静脉快速高压注射导入小鼠体内，通过X-gal染色的方法在不同时间点观察目的基因在肝脏和其他脏器中的分布规律。结果含有CMV启动子的LaeZ裸质粒经小鼠尾静脉高压注射途径导入体内，24h后即开始表达，第3天出现表达高峰，1周后表达消失，基因转染率达5％-6％；用脂质体包裹质粒DNA后，再进行尾静脉高压注射，质粒在肝脏的表达效率可达18％-20％。结论应用尾静脉高压注射脂质体／质粒DNA复合物途径，目的基因在小鼠肝脏获得高效表达，该方法可以广泛应用于基因治疗的实验研究。

猪源产肠毒素大肠杆菌eltA、flhD、fimA、faeG基因启动子的预测、克隆和鉴定

猪源产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是引起仔猪腹泻的主要病原菌之一,其致病机制与染色体上特定的毒力岛以及毒力质粒上的某些毒力基因相关。基于对ETEC毒力因子的前期研究,本研究初步预测并鉴定了eltA基因(编码LT毒素A亚单位)、flhD基因(编码鞭毛系统一级调控子)、fimA基因(编码I型菌毛主要结构亚基)和faeG基因(编码K88菌毛主要结构亚基)的启动子位置。通过构建含eltA、flhD、fimA、faeG基因启动子的LacZ报告质粒,利用β-半乳糖苷酶试验检测其活性,为进一步定位启动子、确定启动子序列,探索猪源ETEC毒力调控关系,了解细菌感染过程中各毒力因子的表达规律奠定试验基础。