松乳菇组织分离菌株的rDNA ITS序列分子鉴定

对松乳菇子实体和组织分离菌株rDNA ITS区域进行测序分析,通过和GenBank中已知的乳菇属的种进行序列比对,构建系统发育树,通过树图分析,鉴定出分离菌株就是松乳菇的纯菌种。

松乳菇ITS序列比较及其在乳菇属中的系统发育分析

提取江苏、云南、江西、湖南、广西、安徽、湖北地区的松乳菇(Lactarius deliciosus)、红汁乳菇(L.hatsudake)、橙色乳菇(L.akahatsu)和鲑色乳菇(L.salmonicolor)共25个子实体样本的基因组DNA,扩增ITS序列,对GenBank下载和本次及以前测序的松乳菇ITS序列的碱基组成、变异位点及碱基替换类型进行分析,从GenBank下载乳菇属其它8个种,构建乳菇系统发育树。结果显示:松乳菇ITS序列共有20 bp长度的变化,碱基C、T含量大于G、A含量。变异位点ITS共有99个(ITS1 58个、5.8S 4个、ITS2 37个),其中主要是T与C的转换,转换与颠换位点数分别为8和5。ITS1、5.8S、ITS2中转换与颠换的比值R分别为2.34、1.95、1.12。基于ITS序列计算不同地区松乳菇间的遗传距离,江西与意大利、西班牙,法国与西班牙序列间的遗传距离最大为0.012,云南和法国序列间遗传距离为0,是同源序列。系统发育树显示:松乳菇和红汁乳菇、橙色乳菇亲缘关系较近。

野生松乳菇和野生红汁乳菇蛋白多糖的研究

选用合适的溶剂、方法、条件从野生松乳菇和野生红汁乳菇中提取蛋白多糖。粗多糖经Sevage法脱游离蛋白、DEAE-纤维素柱、SephadexG100柱层析分离、纯化,纯化的蛋白多糖进行紫外及红外光谱分析并测定蛋白质、多糖的含量及抗氧化能力。结果表明,松乳菇蛋白多糖中蛋白质和多糖含量分别为24.53%和68.83%;红汁乳菇中分别为15.53%和66.52%,两蛋白多糖均具有体外抗氧化的能力。经鉴定松乳菇蛋白多糖中单糖组成主要是葡萄糖、果糖和甘露糖,红汁乳菇蛋白多糖中单糖组成主要是葡萄糖、果糖和半乳糖。

谷熟菌子实体2个发育时期的转录组比较分析

以未开伞期和开伞期的谷熟菌子实体作为研究的材料,利用Illumina平台测序和生物信息学方法分析,探究谷熟菌子实体生长发育过程中不同基因表达的差异,预测对谷熟菌子实体生长和发育有影响的主要基因和代谢通路.结果显示谷熟菌未开伞期6.66 G和开伞期6.27 G的分析数据.KOG功能注释结果预测,谷熟菌子实体的基因成功注释在26基因功能类别中.GO富集预测结果谷熟菌在不同的生长阶段的生物过程、细胞成分和分子功能存在差异.基因表达水平与聚类分析结果显示,ATP酶和多功能伴侣家族基因是未开伞期和开伞期的主要高表达基因,在能量代谢和调控细胞周期过程中起着重要的作用.差异表达基因KEGG富集通路结果显示,影响谷熟菌2个生长发育过程中能量代谢的关键途径是氧化磷酸化途径.进一步研究结果显示,MAPK信号通路对谷熟菌子实体2个生长发育期起到关键作用,对于促进谷熟菌子实体未开伞期和开伞期有性生殖和调控菌丝体的极性生长过程中有着重要的影响.

松乳菇子实体两个发育时期的转录组分析

以松乳菇子实体为研究材料,采用de novo测序对松乳菇子实体进行测序与生物信息学分析,探究松乳菇子实体生长发育过程中幼菇期(LDG-1)和成熟期(LDG-2)基因表达的差异,并探寻影响松乳菇生长发育相关的主要基因和代谢通路。测序结果显示,共获得7.44G(LDG-1)和7.21G(LDG-2)的分析数据(clean reads)。KOG功能注释结果显示,松乳菇在幼菇期(LDG-1)和成熟期(LDG-2)具有全面而复杂的基因功能类别。GO富集结果提示,松乳菇在不同生长阶段(LDG-1和LDG-2)的生物代谢功能存在一定的差异。基因表达水平与聚类分析显示,ATP酶、多功能伴侣蛋白等家族基因为LDG-1和LDG-2主要高表达基因,在能量代谢与参与调控细胞周期中起重要作用。分析差异表达基因发现,相较于LDG-1期,LDG-2期有16789个差异表达基因,其中7635个基因上调,9154个基因下调。差异表达基因KEGG富集通路分析结果显示,氧化磷酸化途径是松乳菇幼菇期生长发育过程中能量代谢的关键途径。进一步分析显示,MAPK信号通路是影响松乳菇子实体发育的关键信号通路,在促进松乳菇子实体进行有性生殖和调控菌丝体的极性生长中起重要作用。