pNZ8149-IL21基因乳酸菌表达载体的构建与表达特性

构建重组质粒pNZ8149-IL21,并将其转到乳酸球菌中,利用Nisin诱导基因表达系统分析重组质粒在乳酸球菌中的表达。采用基于聚合酶链式反应的精确合成(PCR-based accurate synthesis,PAS)的方法,合成目的基因IL21,连入载体pUC57,获得重组质粒pUC57-IL21;对含有目的基因的pUC57-IL21和pNZ8149质粒进行双酶切后,构建pNZ8149-IL21质粒;采用电转化方法将连接产物转化进NZ3900,涂板挑取12个单菌落培养后,进行PCR验证,筛选出阳性克隆,从诱导剂Nisin的浓度(30,50和100 ng/m L)和诱导时间(12和24 h)进行诱导条件优化分析IL21在乳酸菌中表达。目的蛋白在乳酸菌NZ3900中得到表达,在50 ng/m L的Nisin诱导24 h可见目的蛋白在相对分子质量15 k左右有条带表达,Nisin诱导24 h的效果优于12 h。结果说明选择乳酸菌作为载体表达系统,构建IL21高表达的重组乳酸菌是可行的。