植酸酶基因在嗜酸乳杆菌中的表达

植酸酶和嗜酸乳杆菌是重要的饲料添加剂,为获得产植酸酶的嗜酸乳杆菌菌株,克隆了大肠杆菌植酸酶基因,构建表达载体并转化嗜酸乳杆菌,对重组嗜酸乳杆菌进行发酵产酶并测定所产酶液的酶学性质,进一步研究重组嗜酸乳杆菌的耐酸性及植酸酶液的抗蛋白酶活性。结果表明:重组嗜酸乳杆菌发酵24 h植酸酶活性为984 U/mL,植酸酶的最适催化pH为4.5,最适催化温度为60℃。重组嗜酸乳杆菌在pH 2.0~4.5有一定的耐酸性,在pH 2.0条件下2 h的存活率为76.4%。植酸酶液用胃蛋白酶处理160 min后植酸酶液剩余85%的相对酶活,用胰蛋白酶处理160 min后剩余29%的相对酶活。上述研究结果为重组嗜酸乳杆菌后续应用研究提供了重要依据。

基于杂合肽H5LL活性的生物信息学分析和重组乳酸菌表达载体的构建

目的:以人源性抗菌肽(AMPs)富组蛋白5 (Hst5)和LL-37为亲本,设计新型杂合肽H5LL,并通过基因工程技术构建重组乳酸菌表达载体,实现AMPs的高效和安全表达。方法:采用生物信息学方法对H5LL进行理化参数、亲/疏水性、剪切位点、磷酸化位点、信号肽、跨膜区域、亚细胞定位和二级结构预测;将目的序列和空载质粒pMG36e经HindⅢ及KpnⅠ双酶切后,构建乳酸菌重组表达载体pMG36e-H5LL,克隆转化获得含目的基因的重组质粒。结果:H5LL成为AMPs的可能性较高,含36个氨基酸,相对分子质量为4 625 380,总电荷数为+10,具有亲水性;有3个磷酸化位点,无糖基化位点;属于膜内蛋白,无跨膜区域,无信号肽;亚细胞定位预测,线粒体靶向肽的可能性为0.333。二级结构中α-螺旋结构和β-转角占比分别52.78%及22.22%,三级结构中α-螺旋数量较多。含目的基因的重组质粒PCR电泳,于138 bp处有单一特异性条带;双酶切电泳,重组质粒在136和3 500 bp处有清晰条带。结论:设计并合成的新型杂合肽H5LL具有较高稳定性、抑菌活性和低毒性;成功构建重组乳酸菌表达载体pMG36e-H5LL。

乳酸菌活载体疫苗研究进展

乳酸菌以其益生性、佐剂效应、制备简单及生产成本低等优点被广泛用于各种病原抗原的传递载体研究。乳酸菌活载体疫苗能同时激发机体的体液免疫、黏膜免疫和细胞免疫反应,是目前疫苗研究领域的一个热点。作者分别对乳酸菌活载体疫苗的作用机理、传递外源抗原的形式进行概括,对其在预防各种病毒性、细菌性和寄生虫性等疾病的研究进行综述,并对其存在的问题、应用前景进行分析和展望。

乳酸菌作为口服疫苗载体的研究进展

乳酸菌是一类重要的工业菌株,是食品级安全菌。利用乳酸菌作为表达载体制成的口服疫苗安全无毒,乳酸菌口服疫苗通过胃肠粘膜进行抗原呈递,能诱导机体产生有效的免疫应答和免疫耐受。近年来对于乳酸菌口服疫苗的研究成为热点,并在此方面取得了突破性成果。

乳酸菌用作口服疫苗传递载体的研究

乳酸菌是食品级安全菌,利用乳酸菌为表达载体制成的口服疫苗安全无毒,能诱导机体产生有效的免疫应答和免疫耐受。乳酸菌口服疫苗通过胃肠粘膜进行抗原呈递,使用方便,而且较传统注射途径的免疫效果和依从性好,是理想的疫苗,有广阔的发展前景。

乳酸菌Nisin诱导表达载体的构建和鉴定

为构建乳酸菌Nisin诱导表达载体,实现外源目的基因在乳酸菌中的可控表达,本研究以产Nisin乳酸乳球菌染色体DNA为模板,采用PCR技术扩增双组份调控元件nisRK基因和诱导型启动子nisA基因,并克隆至乳酸菌-大肠杆菌穿梭质粒pW425et中,以nisA基因替换原组成型启动子P32,构建乳酸菌Nisin诱导表达载体pW425N。为检测载体的诱导表达功能,以gfp基因作为报告基因,构建重组表达载体pW425N-gfp,以分离自仔猪肠道内嗜酸乳杆菌为受体菌,电转化法制备重组乳酸菌pW425N-gfp/L.acidophilus。结果表明,重组载体能够在Nisin诱导下表达目的荧光蛋白,并且最佳Nisin有效浓度为30 ng/mL,最佳诱导时间为3 h。该表达载体的构建为外源功能性蛋白在乳酸菌中的诱导表达奠定基础。

乳酸菌质粒的研究进展

乳酸菌是一种公认的食品级微生物,它广泛存在于自然界中。很多编码其独特性状的基因位于游离于基因组DNA之外的质粒上。本文就乳酸菌质粒的提取方法、复制模式与特点以及改造和应用等方面进行概述,旨在揭示乳酸菌质粒的最新研究进展,为今后改造乳酸菌质粒,构建合适的基因工程载体提供参考与借鉴。

食品级乳酸工程菌的研究进展

简要概述了乳酸菌控制表达体系的研究现状,总结了食品级乳酸工程菌的研究进展,提出了今后的研究方向及其应用前景。

重组基因工程乳酸菌的研究进展

乳酸菌作为人和动物体内的正常菌群,具有诸多益生功能。随着分子生物学研究的不断深入,重组基因工程乳酸菌研究取得了较快进展。在构建表达外源功能性基因的重组基因工程乳酸菌、表达保护性抗原蛋白质用以递呈黏膜免疫抗原的过程中,乳酸菌质粒载体起到了至关重要的作用。电转化技术的应用,简化了操作过程,推动了重组基因工程乳酸菌的研究与应用。

乳酸菌作为基因表达载体的研究概况

就乳酸菌表达载体进行综述,包括乳酸菌的应用与安全性,乳酸菌表达载体的质粒、乳酸菌表达系统的筛选标记、乳酸菌作为表达载体的不足与未来的发展前景。

乳酸菌用作口服疫苗表达载体的应用研究进展

乳酸菌是人和大多数动物肠道内的常见细菌,被公认为绿色安全级微生物,可以在机体内粘附、定植和复制,益生作用和免疫原性使其成为最有前景的活菌载体。利用基因工程手段插入外源基因制备重组乳酸菌口服疫苗,能够持续刺激机体分泌特异性抗原蛋白,多个基因的插入甚至能达到一免治多病的目的。口服免疫效果优于注射免疫,治疗成本也大大降低。该文论述了乳酸菌活载体疫苗的优势,对乳酸菌表达载体在动物疫病防控及代谢产物调控上的应用等方面的研究进行综述,并对其应用前景进行分析和展望。

乳酸菌基因表达载体及其应用研究进展

近年来随着乳酸菌的功能特性和应用研究的深入,利用分子手段研究乳酸菌的功能基因已经成为最新研究热点。研究者构建众多不同特性的基因表达载体,本文从载体使用的安全性角度对已经报道的载体进行总结,并介绍各类基因表达载体在发酵产胞外多糖、酶制剂、疫苗制备等方面的应用。

人诺如病毒重组乳酸菌疫苗的制备及免疫效果评价

目的诺如病毒(norovirus,NoV)是导致人类急性胃肠炎的主要病原体之一,目前仍没有获批上市的NoV疫苗,开发安全有效且便于推广的NoV疫苗具有重要意义.本研究基于乳酸菌表达系统构建在体外表达GⅡ.2型人诺如病毒(human norovirus,HuNoV)主要衣壳蛋白(viral protein 1,VP1)的重组乳酸乳球菌,并评价其诱导机体产生黏膜免疫和体液免疫的能力.方法将HuNoV GⅡ.2型VP1基因片段无缝克隆至乳酸菌表达系统中,体外诱导表达目的蛋白VP1,并通过正交试验优化蛋白表达条件.对小鼠进行口服免疫后通过ELISA方法测定其血清和组织中的免疫因子水平.结果构建了一株针对HuNoV GⅡ.2型的新型重组乳酸乳球菌疫苗,口服免疫后可诱导小鼠产生NoV特异性IgG和IgA,并诱导产生黏膜免疫系统的主要效应分子sIgA.结论本研究构建的口服乳酸菌疫苗能够诱导小鼠产生针对NoV的先天性和获得性免疫,并产生对应的免疫分子.与被广泛用于研究的病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗相比,此口服疫苗还具有制备快捷、成本更低、运输方便的优势.

PEDV乳酸菌工程菌株对小鼠的免疫效果研究

本研究以引起猪流行性腹泻的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)为研究目标,利用含有PEDV S基因的植物乳杆菌活载体菌株LP1522-PEDS口服免疫小鼠,应用ELISA试验检测免疫小鼠粪便中SIgA含量、血清中IgG、IL-4、IL-2和IFN-γ含量,评价乳酸菌重组菌株LP1522-PEDS对小鼠的免疫效果。结果表明,首次免疫后,商品灭活疫苗组和工程菌株免疫组粪便中的SIgA、血清中的IgG、IL-4、IL-2和IFN-γ含量较对照组显著升高(P<0.05)。在免疫42~56 d,灭活疫苗组和重组菌株组抗体水平均达到最大值,抗体和免疫因子水平依次为:商品灭活疫苗组>LP1522-PEDS组>空载组≈对照组。随后商品灭活疫苗组、LP1522-PEDS组抗体和免疫因子水平逐渐下降。免疫70 d,商品灭活疫苗组抗体水平降幅度相对较小,工程菌株免疫组降幅较大。结果表明,小鼠口服携带PEDV S基因的基因工程植物乳杆菌LP1522-PEDS后能够诱导机体产生PEDV免疫应答。

乳酸菌载体pMG36e的应用现状

乳酸乳球菌通用表达质粒pMG36e是一个经典的人工构建的组成型表达载体,是以乳酸乳球菌乳脂亚种蛋白酶基因的转录和翻译信号为基础构建而成的。它包含一个强启动子,能够在多种细菌中表达外源蛋白。已用于研究细菌素作用机制,乳酸菌基因工程菌株的改造以及口服疫苗的开发等,应用领域十分广泛,已成为乳酸菌基因工程研究的重要工具质粒之一。现主要从载体构成、基因表达与食品级载体改造等三方面的应用对其进行综述,旨在为该质粒今后研究提供资料。

口服重组乳酸菌的药用研究与应用

目的围绕重组乳酸菌的药用优势、发挥药用效应的免疫学机制、影响因素、主要应用及其发展中面临的问题进行综述。方法分析和整理近年来国内外关于口服重组乳酸菌药用研究与应用的相关文献。结果与结论多种乳酸菌以其安全性、遗传可操作性及良好的定植能力成为口服药用蛋白在胃肠道发挥局部作用的潜在运载工具。近10年的动物试验表明,口服重组乳酸菌具有明显的药用价值,目前该项研究已进入人类临床实践阶段。虽然重组乳酸菌口服剂型的研发仍存在技术瓶颈,但其应用前景和潜在的商业价值不可估量。

乳酸菌红色荧光蛋白融合表达系统的构建

目的:构建以红色荧光蛋白基因(dsred2)为标记的乳酸菌融合表达系统p MG36e-dsred2,并以α-淀粉酶(amy)为报告基因实现融合基因dsred2-amy在乳酸菌内的融合表达。方法 :通过PCR的方法以质粒p PIC9kdsred2为模板扩增得到dsred2基因的全部编码区序列,并将其连接到克隆型载体p MG36e上,得到重组载体p MG36e-dsred2。以地衣芽孢杆菌基因组为模板,扩增只带有起始密码子而不带有终止密码子的α-淀粉酶基因(amy),将其连接到克隆型载体p MG36e-dsred2上,获得融合表达载体p MG36e-dsred2-amy。最后将该载体电转化干酪乳杆菌,利用荧光显微镜观察红色荧光基因表达情况,用淀粉平板检测淀粉酶活性。结果:通过PCR的方法分别扩增到大小为694bp的红色荧光蛋白基因(dsred2)和大小为1 554 bp的淀粉酶基因(amy)。将获得的两个基因片段进行测序,结果与NCBI数据库进行对比,dsred2基因的匹配率为100%,amy基因同源性为99.54%。成功构建了乳酸菌表达系统p MG36e-dsred2及融合表达载体p MG36e-dsred2-amy。在荧光显微镜下观察菌体有荧光且淀粉平板上有明显的透明圈。结论:融合表达载体的构建成功为乳酸菌在生物体内的定植、分布、存活等研究提供了方法,也为研究外源蛋白在乳酸菌内的表达的分泌(细胞内、细胞壁、细胞外表达)、活性检测等奠定了基础。

乳酸菌食品级表达载体的研究与应用

乳酸菌是能够发酵糖类产生大量有机酸的革兰氏阳性菌的通称,在发酵食品中有着悠久的应用历史。乳酸菌通常被认为是安全菌株,这些微生物的基因工程操作在食品、医学等方面具有广阔的应用前景。表达载体是基因工程中常用的工具之一,大多数乳酸菌的表达载体通常以抗生素抗性基因作为选择标记,然而抗性基因具有潜在的转移性,因此需要开发食品级表达载体。食品级表达载体不含有抗生素的抗性基因,仅包含来自同源宿主或通常被认为是安全生物的DNA。本文介绍了乳酸菌食品级表达载体的构成及其常用宿主,同时对乳酸菌食品级表达载体的应用进行了归纳总结。

乳酸菌作为载体的异源蛋白表达及应用研究进展

乳酸菌是公认的食品级安全微生物，利用乳酸菌作为表达载体进行抗原表达，能诱导机体产生有效的免疫应答。经口服和滴鼻免疫还可诱导机体的黏膜免疫应答，且接种方便，免疫效果和依从性均优于传统的注射途径。此文就乳酸菌作为表达载体的优势、表达系统的组成、目前成功表达的异源蛋白以及新型传送系统革兰阳性菌增强基质颗粒的研究进展做一综述。

乳酸菌作为药物分子粘膜投递载体的研究进展

乳酸菌是被公认为安全的食品级微生物,广泛地应用于食品生产、保存以及作为益生菌促进人类健康。鉴于发展有效的投递药物分子策略的需要,乳酸菌成为了极有吸引力的用于口服、鼻饲及阴道进行粘膜投递药物分子的活载体。用乳酸菌作为药物分子的投递载体,安全性好,且可直接合成并投递目标蛋白,显著降低药物生产成本。到目前为止,乳酸菌作为粘膜投递载体,已成功地向粘膜组织投递了一系列功能蛋白用以治疗多种疾病。文中综述了近20年的数据,重点聚焦乳酸菌作为药物分子投递载体的发展和应用,为今后乳酸菌作为活载体的临床研究提供一定参考。