卷曲乳杆菌类细菌素的分离纯化及表征

目的初步分离纯化并鉴定卷曲乳杆菌类细菌素,为研发针对念珠菌性阴道炎(VVC)的药物奠定基础。方法以氟康唑作为标准药物,测定卷曲乳杆菌发酵上清液(CFS)对于白假丝酵母菌的抑菌活性,研究温度、pH值和酶解处理对于CFS抑菌活性的影响;采用硫酸铵沉淀法、疏水柱层析法及透析法对CFS中的抑菌活性物质进行初步分离纯化;采用苯酚-硫酸法、双缩脲反应、UV、FTIR、HPLC和SDS-PAGE对抑菌活性物质进行初步鉴定。结果卷曲乳杆菌CFS中存在耐酸碱、热稳定性好的糖蛋白或糖肽类抑菌物质,初步纯化之后CFS比活力从218.6 U·mg^(-1)提升到700.7 U·mg^(-1),提高了3.2倍,初步鉴定为分子量均为55 kD左右的两种糖蛋白或糖肽。结论卷曲乳杆菌CFS中含有糖蛋白或糖肽类细菌素,对白假丝酵母菌具有抑制作用,有望将其开发成药物。

戊糖乳杆菌素pentocin LPEM818的初步纯化及特性研究

对戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)LPEM818所产戊糖乳杆菌素(pentocin)LPEM818进行了初步纯化,并对其生物学特性进行了研究。结果表明,采用80%硫酸铵沉淀和Sephadex G-25凝胶层析分离纯化后,细菌素的纯化倍数为11.09倍,回收率为6.4%;该细菌素在pH 2.0～8.0条件下稳定,121℃加热15 min保留84.52%的抑菌活性;对胰蛋白酶和蛋白酶K敏感;该细菌素的作用方式为杀菌;对供试的部分革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)具有较强抑制作用,因其抑菌谱较广,对多数致病菌和食品腐败菌有较好抑菌作用,所以具有作为食品生物防腐剂的潜在应用价值。

戊糖乳杆菌31-1菌株所产细菌素的理化及生物学特性

研究了本组纯化的戊糖乳杆菌31～1菌株所产细菌素的理化和生物学特性及其对敏感菌株的抑菌作用，发现该细菌素在80℃热处理15min后活性基本不变，121℃处理15min仍保持一定活性；在pH2～8范围内37℃处理4h保持稳定。当pHi9时活性逐渐降低。胃蛋白酶、胰蛋白酶、蛋白酶K、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶均可使该细菌素完全失活；α-淀粉酶可使其部分失活；酸性蛋白酶、溶菌酶不能使其失活。该细菌素抑菌效果明显，在3～5h内可减少敏感菌细胞数10^2～10^3个。测定了其抑菌谱，该细菌素可抑制乳杆菌属、链球菌属、片球菌属中的大部分菌株，还可抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、芽抱杆菌中的部分菌株。该细菌素是一种具有良好热、酸稳定性的蛋白活性物质，用于食品防腐将具有较高的安全性。

戊糖乳杆菌素C50-6的纯化及特性研究

对分离自四川传统肉制品的戊糖乳杆菌C50-6产生的戊糖乳杆菌素进行了纯化,研究其理化性质和生物学活性,结果表明:发酵液经(NH4)2SO4盐析和Toyopearl SP-650M阳离子交换层析纯化后,细菌素的回收率为21.76%,纯化倍数为39.15倍;经Tricine-SDS-PAGE和电泳条带抑菌试验测得该乳杆菌素分子质量约2 500u;该细菌素对酸和热稳定,对木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和蛋白酶K敏感;对供试的革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和少数真菌具有较强抑制作用,对多数乳酸菌无抑制作用。

产乳酸菌素菌株的筛选鉴定及其特性分析

本实验对广西巴马村天然发酵米粉中的乳酸菌进行分离鉴定,筛选出一株具有抑菌活性的植物乳杆菌M44,并研究了其所产乳酸菌素的基本性质。采用微生物形态学和16S r DNA序列分析法鉴定菌株M44为植物乳杆菌,其发酵上清液具有抑菌活性,抑菌物质确定为蛋白类。采用盐析法粗提所产乳酸菌素,确定最佳硫酸铵沉淀浓度为60%。由乳酸菌素产量与菌株生长的关系实验得出乳酸菌素的最佳收获时间为发酵培养12 h。管碟法抑菌实验表明,该乳酸菌素在p H范围2~8时有良好的抑菌活性;121℃处理15 min后仍具有抑菌活性;胃蛋白酶、胰蛋白酶处理后抑菌性消失;对单核增生李斯特细菌、大肠杆菌、沙门氏菌,金黄色葡萄球菌均有抑制作用。该乳酸菌素为天然生物防腐剂的开发与应用提供了研究基础。

戊糖乳杆菌细菌素31-1的纯化

为了研究戊糖乳杆菌31-1菌株产生的细菌素的性质,采用SPSepharoseFastFlow阳离子交换树脂纯化细菌素,结果发现选用含0.1MNaCl的0.02M醋酸盐缓冲液即可洗脱下细菌素峰,比活力达到1259.84(AU/mg),是原发酵液的17倍,并且采用Tricine-SDS-PAGE法估测出细菌素的分子量大小在14.2kDa以下。

戊糖乳杆菌LS1细菌素的分离纯化及性质鉴定

由酸菜水分离出的菌株LS1经16S rRNA鉴定为戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)。其细菌素首先通过硫酸铵沉淀取上清液经Sephadex G-10柱色谱脱盐并纯化,然后SP Sepharose Fast Flow中度纯化,最后Superdex 30 Increase精细纯化。纯化后比活力为1238.1 AU/mg,是原始细菌素活性的110.5倍。根据液相色谱-串联质谱仪测定细菌素分子质量为1123.8 Da,氨基酸序列为ACDFCFCGMK。戊糖乳杆菌素Pentocin LS1显示出对部分革兰氏阴性和阳性食品腐败菌的抑菌活性。此外,100℃加热15 min仍保留80.2%的抑菌活性,在pH 2.0~8.0范围内具有较强活性,对蛋白水解酶敏感,对淀粉酶、脂肪酶及过氧化氢酶不敏感,部分化学试剂也对其活性无明显影响。结果表明,戊糖乳杆菌素LS1在食品防腐方面具有潜在应用价值。

抗猪链球菌戊糖乳杆菌素的纯化及特性研究

对分离自健康未断奶仔猪粪便的抗猪链球菌的戊糖乳杆菌LPL1—5所产细菌素进行提取、纯化，以及理化和生物学特性研究。戊糖乳杆菌LPL15所产细菌素经饱和度为80％的硫酸铵盐析、葡聚糖凝胶树脂G-10层析和SPSepharoseFastFlow阳离子树脂交换层析可得到纯化的细菌素，其比活力为1732．16AU／mg，纯度较发酵液提高了26．37倍；Tricine—SDS-PAGE凝胶电泳及活性检测试验结果显示，3313～5856u范围内存在1条活性蛋白带；纯化后细菌素特性分析发现，该细菌素具有良好的热稳定性、酸耐受性及溶解性，并基本确定其等电点为8．7；胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶和蛋白酶K处理可使细菌素完全失活；该细菌素抑菌谱较广，不仅对猪链球菌（Sreptococcussuis）、单核细胞增生李斯特氏菌（Listeriamonocytogenes）、金黄色葡萄球菌（sfnphylococcus aereu）等革兰氏阳性菌有明显抑制作用，同时对大肠杆菌（Escherichiacoli）及假单胞菌（Pseudomonasspp．）等革兰氏阴性菌也表现出抑菌活性，具有作为食品防腐剂良好的应用前景。

戊糖乳杆菌群体感应信号肽AIP的纯化及鉴定

目的:对戊糖乳杆菌31-1的群体感应信号肽进行提取、纯化和鉴定。方法:经硫酸铵盐析、超滤、疏水层析、凝胶层析和RP-HPLC步骤纯化戊糖乳杆菌31-1的群体感应信号肽。用MALDI-TOF质谱测定纯化后的小肽AIP的分子质量,并用EDMAN降解法对其N端氨基酸测序。用组氨酸蛋白激酶抑制剂——氯氰碘柳胺验证其群体感应信号肽分子功能。结果:纯化的信号肽AIP的比活力达160 000 IU/m L,纯度提高了800倍。该小肽的分子质量为2 985.16 u。其N端前15个氨基酸序列为NH2-KSSAYSLQMGATAIK。氯氰碘柳胺所造成的戊糖乳杆菌31-1细菌素合成功能的缺失,不能通过添加小肽AIP而得以恢复,证实了小肽AIP的群体感应信号肽分子功能。结论:群体感应信号肽AIP的获得为戊糖乳杆菌31-1细菌素的发酵调控奠定了基础。