益生菌制品中植物乳杆菌ST-Ⅲ快速定性、定量检测方法的建立

【目的】建立快速定性、定量检测益生菌产品中植物乳杆菌菌株ST-Ⅲ的方法,为其实际应用提供参考。【方法】根据植物乳杆菌菌株ST-Ⅲ与NCBI库中3株已知序列的植物乳杆菌全基因组序列差异,设计菌株特异性引物,进行菌株特异性PCR验证和定性检测;然后建立荧光定量PCR,并检测益生菌制品中菌株ST-Ⅲ含量。【结果】设计的引物具有良好的菌株特异性;经PCR扩增,含有ST-Ⅲ的检验样本出现预期特征条带,与预期目的片段(242bp)相近。建立的荧光定量PCR标准曲线方程为y=-3.369lgx+39.84,R2为0.9990,符合Real-time PCR定量的要求,其检测限为2.85×103CFU/mL。经检测,样品中植物乳杆菌ST-Ⅲ的数量分别为3.25×105、1.28×106、4.55×106CFU/mL。【结论】建立的植物乳杆菌菌株ST-Ⅲ定性、定量检测方法快速灵敏、测定时间短,可以在实际生产中应用。

植物乳酸菌ST-Ⅲ产α-糖苷酶抑制剂作用的研究

以改良的体外模型为测定手段,评价了植物乳杆菌ST-Ⅲ(Lactobacillus plantarum ST-Ⅲ)以蒸煮大豆为培养基料时,其接种量、发酵温度对发酵产物抑制麦芽糖酶的影响,同时,通过对植物乳杆菌ST-Ⅲ在最优条件下发酵大豆豆浆和蒸煮大豆的产物对麦芽糖酶的抑制效果及其相应粗提物对麦芽糖酶的半数抑制浓度IC50的比较,评价了植物乳杆菌ST-Ⅲ在不同形式的大豆基料中产-葡萄糖苷酶抑制剂的能力,结果表明:植物乳杆菌ST-Ⅲ发酵蒸煮大豆产生麦芽糖酶抑制物的最适条件分别为接种量2%(v/w)、发酵温度37℃。在优化条件下,植物乳杆菌ST-Ⅲ发酵大豆豆浆10 h的产物对麦芽糖酶的抑制效果可达80%左右,而发酵蒸煮大豆时达到相同抑制效果需发酵10 d以上。发酵两种不同形式大豆基料制得的粗提物对麦芽糖酶的半数抑制浓度IC50分别为2.989 mg/mL和2.597 mg/mL。因此,液体状态的大豆豆浆是植物乳杆菌ST-Ⅲ发酵产-葡萄糖苷酶抑制剂的优选基料形式。

植物乳杆菌ST-Ⅲ发酵苦荞面团中蛋白质降解变化的研究

选用植物乳杆菌ST-Ⅲ(Lactobacillus plantarum ST-Ⅲ)对小麦、苦荞、小麦-苦荞混合粉进行不同基质谷物粉的酸面团发酵,通过比较小麦发酵面团(WS)、苦荞发酵面团(BS)和混合发酵面团(WBS)发酵过程中面团的理化性质及蛋白降解情况、氨基酸含量的变化发现:植物乳杆菌ST-Ⅲ在BS发酵过程中菌落密度始终较大且明显高于WS和WBS中植物乳杆菌ST-Ⅲ的菌落密度,且BS的pH为6.58,接近植物乳杆菌ST-Ⅲ的最适pH;随后综合比较3组酸面团的各类蛋白含量及变化、游离氨基酸含量可知,发酵12~18 h面团中各类蛋白降解效果最好,18 h后由于环境中有机酸含量较高而导致酸面团蛋白降解过度,且相对小麦而言,BS中的游离氨基酸含量随着发酵时间的延长呈上升趋势,说明发酵有利于苦荞蛋白适度降解为营养价值高的多种游离氨基酸。