鼠李糖乳杆菌LS8基因组文库的构建

为通过构建基因组文库方法,探究鼠李糖乳杆菌LS8菌株的细菌素编码基因,采用质粒消除方法证明LS8菌株细菌素编码基因位于基因组DNA。在此基础上,提取LS8菌株基因组DNA,采用同尾酶Sau3A1和Bam H1分别酶切基因组DNA,回收250~1 000 bp的片段,然后采用T4 DNA连接酶将回收片段与已酶切并去磷酸化后的载体（p Bluescript SK）进行连接,采用Ca Cl2处理法转化大肠杆菌（TOP10）。通过蓝白斑和氨苄抗性筛选,得到阳性克隆1 480个,采用菌液PCR对克隆进行检测。将测序并拼接后所得101条序列在NCBI上比对,发现5个可能的细菌素编码基因。分别设计引物对上述序列进行PCR扩增和测序,为细菌素基因的异源表达奠定基础。