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鼠李糖乳杆菌LS8基因组文库的构建
1
作者
辛红鸿
张瑜
+1 位作者
刘景
吕欣
《中国食品学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期64-70,共7页
为通过构建基因组文库方法,探究鼠李糖乳杆菌LS8菌株的细菌素编码基因,采用质粒消除方法证明LS8菌株细菌素编码基因位于基因组DNA。在此基础上,提取LS8菌株基因组DNA,采用同尾酶Sau3A1和Bam H1分别酶切基因组DNA,回收250~1 000 bp的片段...
为通过构建基因组文库方法,探究鼠李糖乳杆菌LS8菌株的细菌素编码基因,采用质粒消除方法证明LS8菌株细菌素编码基因位于基因组DNA。在此基础上,提取LS8菌株基因组DNA,采用同尾酶Sau3A1和Bam H1分别酶切基因组DNA,回收250~1 000 bp的片段,然后采用T4 DNA连接酶将回收片段与已酶切并去磷酸化后的载体(p Bluescript SK)进行连接,采用Ca Cl2处理法转化大肠杆菌(TOP10)。通过蓝白斑和氨苄抗性筛选,得到阳性克隆1 480个,采用菌液PCR对克隆进行检测。将测序并拼接后所得101条序列在NCBI上比对,发现5个可能的细菌素编码基因。分别设计引物对上述序列进行PCR扩增和测序,为细菌素基因的异源表达奠定基础。
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关键词
鼠李糖乳杆菌LS
8
基因组文库
细菌素
原文传递
题名
鼠李糖乳杆菌LS8基因组文库的构建
1
作者
辛红鸿
张瑜
刘景
吕欣
机构
西北农林科技大学食品科学与工程学院
出处
《中国食品学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期64-70,共7页
基金
国家自然科学基金-青年基金项目(31000819)
文摘
为通过构建基因组文库方法,探究鼠李糖乳杆菌LS8菌株的细菌素编码基因,采用质粒消除方法证明LS8菌株细菌素编码基因位于基因组DNA。在此基础上,提取LS8菌株基因组DNA,采用同尾酶Sau3A1和Bam H1分别酶切基因组DNA,回收250~1 000 bp的片段,然后采用T4 DNA连接酶将回收片段与已酶切并去磷酸化后的载体(p Bluescript SK)进行连接,采用Ca Cl2处理法转化大肠杆菌(TOP10)。通过蓝白斑和氨苄抗性筛选,得到阳性克隆1 480个,采用菌液PCR对克隆进行检测。将测序并拼接后所得101条序列在NCBI上比对,发现5个可能的细菌素编码基因。分别设计引物对上述序列进行PCR扩增和测序,为细菌素基因的异源表达奠定基础。
关键词
鼠李糖乳杆菌LS
8
基因组文库
细菌素
Keywords
lactobacillus rhamnosus ls-8
Genomic Library
bacteriocin
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
TS201.3 [轻工技术与工程—食品科学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鼠李糖乳杆菌LS8基因组文库的构建
辛红鸿
张瑜
刘景
吕欣
《中国食品学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2016
0
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