移液器使用不当导致DNA分型Ladder污染原因初探

在法医DNA分型检验中,如出现与等位基因标准对照物（Ladder）一样的等位基因,应注意Ladder污染[1]。本文对由于移液器使用不当,造成其头部或管道内壁DNA蓄积而导致Ladder污染原因进行分析,希望为相关检验提供借鉴。1材料与方法1.1样本 收集本实验室扩增区生物安全柜内5支日常使用的移液器（量程分别为200μL、100μL、20μL、10μL和2μL），分别用超纯水清洗，取其清洗液为样本（共5份），取用日常使用的移液器分装的PowerPlex 18D System试剂盒（简称PP18D）内的扩增混合物、引物和试剂盒内扩增用超纯水为样本（共3份），以上共计8份样本为待测DNA模板。

坦布苏病毒诱导昆明鼠脾细胞凋亡

为探讨坦布苏病毒(TMUV)能否诱导昆明鼠脾细胞凋亡,采用体内和体外2种途径、不同检测方法进行验证。体内试验:TMUV脑内接种3周龄昆明鼠,分别取病毒感染3,5,7d后昆明鼠的脾脏,采用琼脂糖凝胶法观察其DNA Ladder。结果显示,攻毒3d后,脾脏没有出现明显的梯状DNA Ladder,攻毒5,7d后,脾脏出现了明显的特异性梯状DNA Ladder图谱。通过无菌研磨脾脏获得游离脾细胞,AnnexinV-FITC/PI双染色后采用流式细胞仪检测脾细胞的细胞凋亡情况。结果显示,攻毒后3d,脾细胞中凋亡细胞比例与对照组相比差异显著(P<0.05);攻毒后5,7d,脾细胞中凋亡细胞比例与对照组细胞相比差异极显著(P<0.01)。体外试验:无菌取3周龄昆明鼠脾细胞,接种不同剂量TMUV,将分别感染病毒24,48h的脾细胞AnnexinV-FITC/PI双染色,通过流式细胞仪和荧光显微镜检测脾细胞的细胞凋亡情况。结果显示,病毒感染后24,48h的脾细胞中,凋亡细胞比例与对照组相比差异显著(P<0.05)。病毒感染后24,48h脾细胞在荧光显微镜下均出现了数量较多呈现绿色荧光的细胞,且感染后48h更多。由此可见,TMUV可诱导昆明鼠发生显著的脾细胞凋亡,感染病毒时间较长,脾细胞凋亡越明显。本研究通过体内和体外2种途径、采用不同检测方法明确了TMUV能诱导昆明鼠脾细胞发生显著细胞凋亡,为进一步了解TMUV的致病机制提供理论支撑。