响应面法优化葫芦多糖提取条件

【目的】采用响应面法优化葫芦多糖提取工艺,为葫芦多糖的深入研究提供参考依据。【方法】以葫芦为原材料,在单因素试验的基础上,以提取温度、水料比及提取时间为自变量,采用响应面法进行3因素3水平的中心组合试验,分析3个因素及其交互作用对多糖提取率的影响,确定最佳提取工艺条件。【结果】二次元回归方程为:Y=5.54+0.14A+0.43B+0.36C十0.016AB-0.081AC-0.13BC-0.34A^2-0.23B^2-0.21C^2(R^2=0.9956;A为提取温度,B为水料比,C为提取时间,Y为葫芦多糖提取率)。葫芦多糖提取率影响因素排序为:水料比>提取时间>提取温度,3个因素及水料比与提取时间的交互作用对多糖提取率影响极显著(P<0.01),提取温度与提取时间的交互作用影响显著(P<0.05)。葫芦多糖最佳提取工艺条件为:提取温度82℃、水料比24:1(mL/g)、提取时间2.3 h、提取次数2次,在此条件下,多糖提取率可达(5.810±0.240)%,与模型预测值5.820%接近。【结论】通过响应面法优化的葫芦多糖提取工艺模型具有可行性,优化后的工艺条件可提高葫芦多糖提取率。

葫芦粗多糖对小鼠红细胞及细胞因子免疫功能的影响

为了观察维吾尔药源性多糖[4种分级葫芦粗多糖(LSP)]对正常小鼠红细胞免疫功能及血清中白细胞介素-2(IL-2)和小鼠转化生长因子beta1(TGF-β1)含量的影响,试验采用红细胞花环形成法和ELISA法测定了LSP对正常小鼠红细胞免疫功能和血清中IL-2和TGF-β1含量的影响。结果表明:LPS能剂量依赖性地提高小鼠红细胞C3b受体花环形成率,提高小鼠血清中IL-2水平,同时降低血清中TGF-β1含量。在4种分级LSP中,LSP80%高剂量组和LSP30%高剂量组的免疫作用显著高于空白对照组(P<0.05)。说明LSP可通过调节小鼠红细胞免疫功能和细胞因子免疫而发挥对机体的免疫调节作用。

葫芦多糖体外抗鸡新城疫病毒作用的研究

为研究葫芦多糖抗新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)活性,本试验采用水提醇沉法提取葫芦总多糖及4种分级多糖,通过苯酚—硫酸法及红外光谱对葫芦多糖进行检测,MTT法测定各级多糖对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度,多糖的安全浓度统一定为78.125μg/mL,以3种加药方式(先加多糖后接种病毒、先接种病毒后加多糖、多糖和病毒感作后加药),检测葫芦多糖对NDV的阻断、抑制及直接杀灭作用。结果表明,葫芦总多糖及4种分级多糖均具有抗NDV活性,其中对NDV的抑制作用及直接杀灭作用强于对NDV的阻断作用。70%、80%梯度醇沉的葫芦多糖(LSP70、LSP80)及总多糖(LSPt),抑制作用下的病毒抑制率分别为40.41%、44.54%、61.85%,杀灭作用下的病毒抑制率分别为44.74%、58.76%和59.38%,阻断作用下对NDV的抑制率,其中LSP80组最高达37.14%,其余各组均低于25%。综上可知,70%、80%梯度醇沉的葫芦多糖及葫芦总多糖的抗NDV活性较好,可作为进一步研究的材料。

蒲种壳免疫活性多糖

自蒲种壳水提液醇析得到的总多糖(LSCP)中分离出酸性多糖LSC-Ⅰ和LSC-Ⅱ。经醋酸纤维素薄膜电泳和凝胶柱层析证明为均一组分,分子量分别为58 000和26 000。LSC-Ⅰ和LSC-Ⅱ均系蛋白多糖,其蛋白质含量为11％和9％,总糖含量为87％和90％。经TLC和GC-MS测定,LSC-Ⅰ和LSC-Ⅱ均由鼠李糖、岩藻糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖和已糖醛酸组成,其分子比分别为1.34:0.61;0.20:0.53:1.00:1.12:1.20:和0.76:0.56:0.20:0.97:1.00:0.92:1.47。体外实验发现LSCP具有明显的免疫增强活性。

葫芦多糖及其硫酸化修饰物抗新城疫病毒活性

为了探究硫酸化修饰对葫芦多糖(LSP)抗新城疫病毒(NDV)活性的影响,本试验利用Sephadex G-100方法纯化得到LSP,通过氯磺酸-吡啶法得到硫酸化修饰的sLSP_(1.3),用苯酚硫酸法对LSP及sLSP_(1.3)进行多糖含量、蛋白含量及硫酸根取代度测定,经红外光谱测定LSP及sLSP_(1.3)的官能团变化,结果显示,氯磺酸-吡啶法能够对LSP进行硫酸化修饰。利用MTT法测定LSP及sLSP_(1.3)对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全质量浓度,结果LSP及sLSP_(1.3)的安全质量浓度分别为50,10 mg/L,LSP经硫酸化修饰后对CEF的安全质量浓度下降。在安全质量浓度范围内以3种不同的加药方式(先添加LSP后接种病毒、先接种病毒后添加LSP、LSP和病毒混合后同时加入)检测LSP与sLSP_(1.3)体外对NDV活性的影响,结果显示,LSP经硫酸化修饰后其抗NDV活性明显增强,其中sLSP_(1.3)在5 mg/L时抗NDV感染能力和杀灭NDV的作用显著高于40 mg/L时(P<0.05)。检测LSP与sLSP_(1.3)对新城疫模型鸡血清HI抗体效价及攻毒后的死亡率、保护率和痊愈率,结果显示,攻毒后各治疗组及病毒对照组抗体都逐渐升高,sLSP_(1.3)组效价显著高于病毒对照组(P<0.05),但LSP和sLSP_(1.3)之间无显著性差异(P>0.05)。攻毒后病毒对照组死亡率高达86.7%,而sLSP_(1.3)组死亡率降低为66.7%(P<0.05);治疗组中sLSP_(1.3)组的保护率显著高于LSP组,痊愈率达16.7%,保护率达33.3%。上述结果表明,LSP经硫酸化修饰后抗NDV活性显著增强且LSP使用的有效质量浓度显著降低。