孤雌生殖海带对氯霉素和潮霉素的敏感性研究

于1997年1－4月，以本所培养的孤雌生殖海带为材料，运用统计学方法研究其对氯霉素、潮霉素的敏感性，以期得出氯霉素、潮霉素对不同长度孤雌生殖海带的半致死剂量。结果表明，孤雌生殖海带长度（全长）在0．5－1．5cm时，氯霉素的半致死剂量与海带的长度相关，而潮霉素的半致死剂量与长度不相关。孤雌生殖海带对潮霉素比对氯霉素更敏感，提示潮霉素磷酸转移酶基因有可能成为海带基因工程的另一个选择标记。

海带基因工程选择标记的研究

海带幼孢子体对抗生素的敏感性实验证明，氯霉素可以作为海带基因工 程中较理想的选择压力。本文得出了氯霉素对海带的半致死剂量，提示 ＣＡＴ（氯霉 素乙酸转移酶）基因可以用作海带基因工程的阳性选择标记基因。

氯霉素乙酰转移酶(CAT)基因在海带中的表达

于1994年12月-1995年4月，在山东荣城海带育苗场采集海带幼孢子体，用基因枪法将氯霉素乙酰转移酶基因（CATgene，cat）导入海带幼池子体中，48h后检测到瞬间表达。转化后恢复培养一周，以致死剂量氯霉素筛选。两周后对照组全部死亡，转化组万株海带中有11株存活。转化三个月后经CAT酶联免疫（CATELISA分析，在11株存活海带中有2株检测到CAT基因的表达。结果初步证明了CAT基因是海带基因工程的有效选择标记；同时也证明SV40启动于是适用于大型褐藻的启动子元件。

孤雌生殖海带对草丁膦的敏感性

于1999年4—7月，以孤雌生殖海带为材料，运用统计学方法研究其对草丁膦的敏感性，以期得到一定剂量和时间范围内草丁膦对不同长度孤雌生殖海带的半数致死剂量(LD50)。结果表明，孤雌海带在0.5—1.6cm长度范围内，草丁膦的半数致死剂量与海带的长度不相关，而与草丁膦的剂量和作用时间相关。孤雌生殖海带对草丁膦比对氯霉素和潮霉素更为敏感，提示 bar 基因有可能成为海带基因工程更为理想的选择标记基因。

草丁膦抗性基因（bar）在海带配子体中的稳定表达

为把海带配子体作为转基因海洋生物反应器,研究了其对除草剂草丁膦的敏感性以及温度对草丁膦处理效果的影响.结果表明：海带配子体对草丁膦敏感;统计学分析得出了草丁膦在不同温度条件下处理海带配子体的半致死浓度（LD50）及95%可信限;温差达到10℃时,相同处理时间各组内不同处理温度样品的LD50之间呈现显著差异.构建了SV40启动子驱动草丁膦抗性基因bar的表达载体pSVB,应用基因枪法转化海带配子体细胞,经40mg/L草丁膦液体培养基筛选出抗性转化子,Southern blotting结果表明bar基因已经整合到海带配子体基因组中.结论：以草丁膦作为筛选压力可以实现外源基因在海带配子体中的稳定表达.