天花粉蛋白对小鼠黑色素移植瘤血管生成拟态及Ln-5γ2表达的影响

目的:研究天花粉蛋白对小鼠黑色素移植瘤血管生成拟态、Ln-5γ2mRNA及蛋白表达的影响。方法:小鼠接种B16细胞复制模型,接种结束后小鼠随机分为天花粉蛋白高、中、低剂量组和空白对照组接受治疗。观察肿瘤一般状况,CD31与过碘酸-雪夫双重染色法检测血管生成拟态形态学,RT-PCR检测Ln-5γ2mRNA的表达,免疫组织化学染色检测Ln-5γ2蛋白的表达。结果:与空白对照组相比,天花粉蛋白高剂量组瘤组织体积、重量、VM密度、Ln-5γ2mRNA与蛋白的表达均明显降低(P<0.05)。结论:天花粉蛋白能够抑制小鼠黑色素移植瘤的血管生成拟态,推测可能与调控Ln-5γ2的表达有关。

siRNA干扰降低ARK5或Gab2表达对LN-229细胞侵袭的影响及作用机制

目的探讨siRNA干扰降低ARK5或Gab2表达对LN-229细胞侵袭的影响及作用机制。方法采用小RNA干扰技术转染LN-229细胞株,并用Western blot分别检测转染前和瞬时转染后ARK5和Gab2蛋白表达。通过体外侵袭实验检测转染后侵袭能力的变化。ARK5或Gab2下降后明胶酶谱分别检测MMP-2和MMP-9蛋白表达。结果 转染ARK5,Gab2及SCR质粒的LN-229细胞分别称SiARK5/LN-229,SiGab2/LN-229和SCR/LN-229。转染后,与SCR/LN-229及LN-229相比,SiARK5/LN-229中ARK5蛋白表达降低,SiGab2/LN-229中Gab2蛋白表达降低。ARK5或Gab2降低的LN-229细胞侵袭并穿透Matrigel膜基质的细胞数量均比SCR/LN-229少(P<0.01)。与SCR/LN-229细胞相比,SiARK5/LN-229和SiGab2/LN-229中MMP-2,MMP-9蛋白表达均降低。结论 应用小RNA干扰技术降低ARK5或Gab2的表达使LN-229细胞侵袭力降低,同时MMP-2和MMP-9表达降低,提示ARK5和Gab2表达降低可通过调节MMP-2和MMP-9的表达影响LN-229细胞的侵袭。

Laminin-5对前列腺癌细胞侵袭能力的影响

背景与目的:目前对前列腺原位癌进展到浸润性癌的机制知之甚少。在前列腺癌中,间质细胞能分泌一定的因子,促进肿瘤细胞的生长和浸润,但是正常的上皮分泌细胞/原位癌细胞和间质细胞被完整的基底细胞层所隔离。本研究探讨前列腺基底上皮细胞分泌的Laminin-5因子对前列腺原位癌细胞侵袭能力的影响。方法:以BPH-1细胞作为前列腺原位癌的体外模型,研究细胞在基底上皮细胞条件培养基(PEC-CM)作用下的粘附、侵袭能力和细胞极性改变情况,并应用免疫沉淀反应和Western blot等技术分析PEC-CM的主要成分。结果:PEC-CM含有粘着蛋白等因子,能促进细胞粘附、极化、侵袭和Akt磷酸化。LY294002和Wortmannin能够部分抑制PEC-CM所激发的细胞侵袭作用,Laminin-5正是PEC-CM中刺激BPH-1细胞侵袭的有效蛋白成分,两者抑制效果比较差异有显著性(P<0.01)。用抗体耗竭PEC-CM内的Laminin-5也能有效降低BPH-1细胞的侵袭能力(P<0.01)。结论:由前列腺基底细胞分泌的Laminin-5通过PI3K依赖的传导通路,对前列腺癌细胞侵袭能力有促进作用,提示基底细胞在前列腺原位癌向浸润性癌的演变过程中可能具有重要作用。

肺腺癌中LN-5蛋白表达及其与EGFR突变关系的临床研究

目的探讨肺腺癌组织中层粘连蛋白-5(LN-5)表达及其与人表皮生长因子受体(EGFR)基因突变关系。方法收集2015年1月至2015年12月57例肺腺癌及其配对癌旁组织标本,采用免疫组化SP法检测LN-5蛋白表达,同时通过液相芯片技术检测EGFR基因突变状态,分析LN-5表达与肺腺癌临床病理特征的关系以及与EGFR基因突变的相关性。结果肺腺癌组织中LN-5蛋白阳性表达率为21.1%(12/57),癌旁组织中为1.7%(1/57),差异有统计学意义(P<0.05)。EGFR敏感突变(E19+E21)的发生率为43.9%(25/57),EGFR非敏感突变(野生型+E20)的发生率为56.1%(32/57)。LN-5蛋白表达与淋巴结转移和EGFR突变有关(P<0.05),与TNM分期无关(P>0.05)。LN-5表达与EGFR突变呈负相关(r=-0.283,P<0.05)。结论 LN-5在肺腺癌组织中的表达升高,且其表达与EGFR突变状态具有相关性。

Gab2-Akt-ARK5通路在胶质瘤侵袭中的研究

目的:探讨Gab2-Akt-ARK5通路在胶质瘤侵袭中的意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测90例胶质瘤组织中ARK5及Gab2表达。采用小RNA干扰转染LN-229细胞株,Western Blot检测瞬时转染后ARK5及Gab2表达。体外侵袭实验检测转染后侵袭能力变化及Western Blot检测Gab2下降后Akt和ARK5的磷酸化。结果:胶质瘤组织中ARK5和Gab2免疫组织化学阳性结果呈正相关且在高级别胶质瘤(WHO分级为Ⅲ、Ⅳ级)中表达明显高于低级别胶质瘤(WHO分级为Ⅰ、Ⅱ级)。转染ARK5、Gab2、ARK5-Gab2及SCR质粒的LN-229细胞分别称siARK5/LN-229、siGab2/LN-229、siARK5-siGab2/LN-229和SCR/LN-229。其中siARK5干扰效率为70%,siGab2的干扰效率为75%。转染后,与SCR/LN-229相比,siARK5/LN-229中ARK5表达降低,siGab2/LN-229中Gab2表达降低,siARK5-siGab2/LN-229中ARK5和Gab2表达均降低。siARK5/LN-229和siGab2/LN-229侵袭并穿透Matrigel膜基质的细胞数均比对照组少(P<0.01),且siARK5-siGab2/LN-229细胞数减少更显著(P<0.01)。在IGF-1刺激下,siGab2/LN-229中Akt和ARK5的磷酸化减弱。结论:应用小RNA干扰技术降低ARK5或Gab2表达使LN-229细胞侵袭转移能力降低,同时Gab2表达降低抑制ARK5和Akt磷酸化,提示Gab2-Akt-ARK5通路参与胶质瘤细胞的侵袭。

过表达KLF17对结直肠癌细胞SW480血管生成拟态以及体外侵袭能力的影响

目的:探讨转染KLF17基因对人结直肠癌血管生成拟态及体外侵袭能力的影响。方法:将KLF17表达质粒PIRES-EGFP-KLF17转染至SW480细胞中,以未转染质粒的细胞作为对照;荧光定量PCR和Western blotting法检测转染前后KLF17和血管生成拟态相关基因血管上皮钙黏附素(VE-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和粘连蛋白5γ2链(LN-5γ2)的mRNA和蛋白表达水平; Transwell实验检测KLF17基因转染对SW480细胞体外侵袭能力的影响。结果:转染KLF17表达质粒后SW480细胞中的KLF17基因和蛋白表达水平均显著高于正常细胞(P <0. 01)。过表达KLF17后SW480细胞中VE-cadherin、MMP-2和LN-5γ2的表达量以及细胞侵袭能力显著降低。结论:转染KLF17可以抑制结直肠癌细胞血管生成拟态相关基因的表达,抑制其血管拟态的形成,降低其体外侵袭能力。

天花粉蛋白对黑色素瘤细胞血管生成拟态及PI3K信号通路的影响

血管生成拟态（vasculogenicmimicry，VM）是对经典的内皮性血管生成之外肿瘤血管生成方式的重要补充，临床上针对VM抑制将可能成为肿瘤治疗的新靶点。天花粉蛋白（trichosanthin，TCS）是从中药栝楼中提取的一种碱性蛋白质，近年来发现对胎盘滋养层的肿瘤及其它多种肿瘤均具有抗肿瘤作用。本研究观察天花粉蛋白对体外三维培养的恶性黑色素瘤细胞血管生成拟态及磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinosit01—3kinase，P13K）信号通路的影响，探讨天花粉蛋白的抗肿瘤作用及机制。

魟鱼软骨多糖对小鼠恶性黑色素瘤的抑制作用及对Laminin5γ2、HIF-α表达的影响

目的:研究魟鱼软骨多糖对小鼠黑色素瘤的抑制作用及对Laminin-5γ2、HIF-α表达的影响。方法:体外培养B16小鼠黑色素瘤细胞,MTT法测定魟鱼软骨多糖不同剂量组对黑色素瘤细胞与基质之间粘附的影响,将培养的B16细胞悬液接种于C57BL/6小鼠右侧腋下部位,建立肿瘤模型。将实验分为空白对照组、魟鱼软骨多糖高、中、低剂量(700mg/kg、300mg/kg、100mg/kg)组、环磷酰胺(60mg/kg)组,观察肿瘤生长情况并计算原发瘤抑制率;采用Western blot方法检测Laminin-5γ2、HIF-α蛋白的表达,采用RT-PCR方法检测Laminin-5γ2mRNA、HIF-αmRNA的表达。结果:应用魟鱼软骨多糖100、20、4、0.8mg/L,黑色素瘤细胞于基质间的粘附受到抑制,分别为16.67%、11.90%、9.52%、7.14%。小鼠原发瘤抑制率与空白对照租比较有显著性差异,魟鱼软骨多糖100、300、700mg/kg和环磷酰胺组抑癌率分别为14.77%,31.48%,44.55%;与空白对照组比较,魟鱼软骨多糖各剂量组随着药物浓度的升高,Laminin-5γ2、HIF-α蛋白表达受到抑制,Laminin-5γ2、HIF-α的基因表达显著降低。结论:魟鱼软骨多糖能够在一定程度上抑制小鼠黑色素瘤移植瘤的生长,可能与其减少肿瘤中Laminin-5γ2、HIF-α蛋白表达有关,Laminin-5γ2、HIF-α有望成为抗癌治疗的新靶点。

层粘连蛋白-5γ2的表达与结直肠腺癌淋巴结转移的关系研究

目的探究层粘连蛋白-5γ2(LN-5γ2)在结直肠腺癌中的表达及其与淋巴结转移的关系。方法选取2014年9月至2016年9月本院收治的180例结直肠腺癌患者为研究对象,分为淋巴结转移72例(转移组)及未发生转移108例(未转移组)。分析两组临床病理参数及癌组织中LN-5γ2的表达水平差异,探讨淋巴结转移与否的影响因素。结果两组年龄、浸润程度、分化程度、TNM分期、LN-5γ2表达差异均有统计学意义(均P<0.05),其中转移组中LN-5γ2高表达率为90.28%,显著高于未转移组的65.74%(P<0.05)。Logistic多因素回归分析显示LN-5γ2高表达、浸润程度深及高TNM分期是结直肠腺癌淋巴结转移的独立危险因素(均P<0.05)。结论 LN-5γ2在结直肠腺癌淋巴结患者病理组织中呈显著的高表达,其高表达状态亦为结直肠腺癌淋巴结转移的独立危险因素。