血管生成素样蛋白4通过调节成纤维细胞和内皮细胞功能影响糖尿病足进程

背景:研究表明,血管因素对糖尿病足的发生具有重要影响。目的:探讨血管生成素样蛋白4在糖尿病足形成中的重要作用。方法:①对糖尿病足患者的基因表达谱数据进行生物信息学分析,找到关键基因。收集糖尿病足患者以及无糖尿病健康人的皮肤标本进行苏木精-伊红染色、免疫组化染色以及qRT-PCR实验,检测血管生成素样蛋白4表达情况。②培养人永生化皮肤成纤维细胞系和原代人脐静脉内皮细胞,将2种细胞分别分为对照组和外源性补充血管生成素样蛋白4组,通过划痕实验以及CCK-8实验分别检测成纤维细胞的迁移能力和增殖能力,通过Ki67实验检测内皮细胞的增殖能力。结果与结论:①生信分析发现,血管生成素样蛋白4基因的下调可能是导致糖尿病足形成的关键基因。②苏木精-伊红染色结果显示,与正常皮肤相比,血管生成素样蛋白在糖尿病足皮肤内弱表达,且其mRNA水平相对表达量降低(P<0.01)。③划痕实验结果显示,与对照组相比,血管生成素样蛋白4组成纤维细胞迁移能力明显增强;CCK-8细胞增殖实验显示,血管生成素样蛋白4组成纤维细胞的吸光度值在24,48 h均高于对照组(P<0.01,P<0.001);提示血管生成素样蛋白4可增强高糖处理的成纤维细胞迁移及增殖能力。④Ki67实验结果显示,与对照组相比,血管生成素样蛋白4组内皮细胞Ki67阳性细胞数目明显多于对照组;CCK-8细胞增殖实验显示,血管生成素样蛋白4组内皮细胞的吸光度值在24,48 h均高于对照组(P<0.05,P<0.001)。(5)以上结果均提示血管生成素样蛋白4可增强高糖处理内皮细胞的增殖能力。

基于NOD样受体3炎性小体通路对利拉鲁肽在氧化低密度脂蛋白诱导内皮细胞损伤的作用机制研究

背景动脉粥样硬化是世界范围内引起心脑血管疾病最主要的原因,炎症是目前研究热点,其中NOD样受体3(NLRP3)是研究最为深入的炎症小体。胰高糖素样肽1(GLP-1)受体激动剂有抗动脉粥样硬化作用,具体机制尚不明确。目的研究利拉鲁肽通过拮抗氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的内皮细胞损伤的作用机制。方法2022-03-25—05-19培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),取HUVEC加空白血清作为对照组,100μg/mL的ox-LDL干预HUVEC 48 h作为模型组,100μg/mL的ox-LDL干预HUVEC 24 h后分别加入100、200、400 nmol/L利拉鲁肽处理24 h作为利拉鲁肽低浓度组、利拉鲁肽中浓度组、利拉鲁肽高浓度组。CCK-8法计算细胞增殖率。通过扫描电镜观察焦亡细胞形态。检测乳酸脱氢酶(LDH)活力。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白介素(IL)-1β、IL-18表达水平。蛋白质免疫印迹试验(Western blot)检测NLRP3、接头蛋白凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)、焦亡执行蛋白(GSDMD)、N端结构域的焦亡执行蛋白(N-GSDMD)表达水平。结果模型组、利拉鲁肽低浓度组和利拉鲁肽中浓度组细胞增殖率低于对照组,利拉鲁肽低浓度组、利拉鲁肽中浓度组、利拉鲁肽高浓度组细胞增殖率高于模型组(P<0.05)。细胞扫描电镜结果示模型组细胞焦亡明显,利拉鲁肽低浓度组、利拉鲁肽中浓度组、利拉鲁肽高浓度组细胞焦亡情况明显改善。模型组、利拉鲁肽低浓度组LDH活力高于对照组,利拉鲁肽低浓度组、利拉鲁肽中浓度组、利拉鲁肽高浓度组低于模型组(P<0.05)。模型组、利拉鲁肽低浓度组IL-1β表达水平高于对照组,利拉鲁肽中浓度组、利拉鲁肽高浓度组IL-1β表达水平低于模型组(P<0.05);模型组IL-18表达水平高于对照组,利拉鲁肽低浓度组、利拉鲁肽中浓度组、利拉鲁肽高浓度组IL-18表达水平低于模型组(P<0.05)。模型组NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、N-GSDMD表达水平高于对照组,利拉鲁肽低浓度组ASC、Caspase-1表达水平高于对照组,利拉鲁肽中浓度组NLRP3、ASC表达水平低于模型组,利拉鲁肽高浓度组NLRP3、ASC、Caspase-1表达水平低于模型组(P<0.05)。结论利拉鲁肽显著抑制ox-LDL诱导的内皮细胞NLRP3炎性小体活化,并且能够抑制内皮细胞的焦亡,具有抗动脉粥样硬化作用。

法舒地尔缓解β-淀粉样蛋白1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡

背景:法舒地尔对阿尔茨海默病小鼠脑内的线粒体动力学有调节作用,并且可以抑制神经炎症,但能否调节线粒体自噬和NLRP3炎症小体进而减轻β-淀粉样蛋白毒性尚不清楚。目的:探究法舒地尔对β-淀粉样蛋白1-42诱导的人源神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y凋亡和线粒体自噬以及NLRP3炎症小体的调节作用。方法:将SH-SY5Y细胞接种于孔板内,细胞贴壁后分3组干预:对照组不加入任何药物,模型组加入20μmol/L β-淀粉样蛋白1-42,法舒地尔组同时加入20μmol/L β-淀粉样蛋白1-42与15 mg/L法舒地尔,干预24 h后,采用MTT法检测细胞活性,TUNEL染色检测细胞凋亡,qRT-PCR和Western blot检测凋亡相关蛋白表达,免疫荧光染色和Western blot检测线粒体自噬相关蛋白表达,免疫荧光染色和Western blot检测NLRP3炎症小体相关蛋白表达。结果与结论:(1)与对照组比较,模型组细胞活性降低、凋亡率升高(P<0.05);与模型组比较,法舒地尔组细胞活性升高、凋亡率降低(P<0.05);(2)qRT-PCR和Western blot检测结果显示,与对照组比较,模型组细胞Bax mRNA与蛋白表达升高(P<0.05),Bcl-2 mRNA与蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,法舒地尔组细胞Bax mRNA与蛋白表达降低(P<0.05),Bcl-2 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05);(3)免疫荧光染色和Western blot检测结果显示,与对照组相比,模型组细胞PINK1、帕金森病蛋白和LC3蛋白表达降低(P<0.05),p62蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,法舒地尔组细胞PINK1、帕金森病蛋白和LC3蛋白表达升高(P<0.05),p62蛋白表达降低(P<0.05);(4)免疫荧光染色和Western blot检测结果显示,与对照组相比,模型组细胞NLRP3、ASC、Caspase-1和白细胞介素1β蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,法舒地尔组细胞NLRP3、ASC、Caspase-1和白细胞介素1β蛋白表达降低(P<0.05);(5)结果表明,法舒地尔可以减轻β-淀粉样蛋白1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其机制可能与激活线粒体自噬且抑制NLRP3炎症小体激活有关。

Toll样受体对成骨及破骨细胞功能的调节

背景:Toll样受体是一类重要的模式识别受体,通过识别特定的分子模式在病原体免疫、细胞因子合成等方面具有重要功能。既往的研究发现,不同种类的骨组织细胞同样表达Toll样受体。激活或抑制Toll样受体可通过多种途径对成骨与破骨细胞功能造成显著影响。目的:总结Toll样受体在成骨及破骨细胞中的表达及作用途径,以进一步阐明生理及病理状态下Toll样受体参与调控的生物学机制。方法:检索截至2022年12月的PubMed、中国知网等文献数据库中的相关文献,中文检索词为“Toll样受体,成骨细胞,破骨细胞,间充质干细胞,巨噬细胞,细胞因子,信号通路”,英文检索词为“toll-like receptor,osteoblast,osteoclast,mesenchymal stem cells,macrophage,cytokine,signaling pathway”,并根据研究需要确立相应的标准,对最终所得文献进行筛选。结果与结论:①Toll样受体可通过激活相关信号通路直接调节成骨、破骨细胞分化;②Toll样受体的激活诱导细胞因子的产生,发挥调节效应;③Toll样受体的激活能够对成骨、破骨细胞的生存及迁移能力产生影响;④在某些疾病及病理环境中,成骨及破骨细胞中的Toll样受体被激活,参与细胞间的相互作用。

miR-let-7d-HMGA2通路调控缺氧诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞增殖

目的 研究缺氧在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜成纤维样细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)增殖中的作用及机制。方法 采用HE染色法检测RA和对照骨关节炎(osteoarthritis,OA)滑膜组织FLS增生情况。分离原代RA-FLS并采用流式细胞术鉴定;将RA-FLS置于常氧(21%O_(2))或缺氧环境(3%O_(2))中培养,CCK-8法检测细胞增殖水平的变化,RT-PCR检测miR-let-7d表达的变化。通过类似物或抑制物改变miR-let-7d的表达,观察其对RA-FLS增殖、凋亡的影响;探究miR-let-7d靶基因在缺氧诱导的RA-FLS增殖中的作用。结果 FLS在RA滑膜中增生明显,在缺氧环境下RA-FLS增殖加快,miR-let-7d表达水平降低;过表达miR-let-7d抑制RA-FLS增殖,但对细胞凋亡水平无明显影响;进一步的研究证实miR-let-7d靶基因HMGA2参与缺氧诱导的RA-FLS增殖。结论 miR-let-7d-HMGA2通路调控缺氧诱导的RA-FLS增殖。

淋巴结Langerhans细胞组织细胞增生症临床病理及免疫组化研究

目的：研究以淋巴结首发的ＬＣＨ形态结构特征、免疫表型、临床表现及鉴别诊断。方法：应用ＨＥ染色和免疫组化ＡＢＣ法标记Ｏ１０和Ｓ－１００阳性以确定诊断。结果：１４例淋巴结ＬＣＨ有４种组合类型：（１）肾形及卵圆形细胞４例；（２）咖啡豆样细胞３例；（３）咖啡豆样及大圆形细胞５例；（４）大圆形细胞２例。结论：咖啡豆样细胞是ＬＣＨ的特征细胞，具有重要诊断价值，嗜酸性粒细胞是ＬＣＨ重要的组成成分之一。根据细胞形态、分化程度和不同组合，ＬＣＨ分为：①反应性，②交界性，③低度恶性，④高度恶性（肉瘤型）。

宫颈癌浸润淋巴细胞和Langerhans细胞免疫组织化学研究

目的：研究宫颈癌浸润淋巴细胞（ＴｉＬ）、Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ细胞（ＬＣ）分布及与淋巴细胞活性标记物ＨＬＡ－ＤＲ和转铁蛋白受体（ＴｆＲ）的关系。方法：应用ＣＤ４，ＣＤ８，ＯＫＴ１１，ＯＫＴ９，ＨＬＡ－ＤＲ和Ｓ－１００抗体及ＡＢＣ免疫组化法。结果：ＣＤ４，ＣＤ８，ＯＫＴ１１阳性细胞随肿瘤发展而增多，并和转铁蛋白受体（ＴｆＲ）及ＨＬＡ－ＤＲ阳性表达密切关联。ＬＣ细胞数目随肿瘤分期增高和ＴｉＬ密度增加而增多。结论：ＴｉＬ和ＬＣ在宫颈癌中数量增多和活性增高的作用尚不清楚，它可能是宫颈癌局部的免疫反应表现。

高梯度磁场免疫磁珠法分离人表皮Langerhans细胞

采用鼠抗人 OKT6单克隆抗体与包被羊抗鼠 Ig G免疫磁珠的特异性结合 ,利用钢毛产生高梯度磁场 ,进行免疫磁珠法分离纯化人表皮 L C。结果表明 LC纯化率超过 99% ,细胞活性超过 95%。该方法简单、快速、价廉、纯化率高 ,不受样本量的限制 ,易在无菌下分离纯化 。

黄芪增免散对围手术期食管癌组织Langerhans细胞的影响

目的观察黄芪增免散对围手术期食管癌组织Langerhans细胞(LC)的影响。方法采用黄芪增免散治疗围手术期食管癌患者36例,观察手术切除食管组织内LC的变化及形态特征。结果与对照组比较,服药组食管癌组织内LC显著增多(P<0.05),且与癌细胞密切接触,反映对癌细胞杀伤作用增强。随着肿瘤分化程度降低,浸润深度增加,LC及间质淋巴细胞数量明显减少(P<0.01),显示肿瘤对机体免疫功能的损害。结论围手术期食管癌患者免疫调节治疗可改善细胞功能。

食管癌发生过程中Langerhans细胞立体结构的观察

目的 :观察食管癌发生过程中Langerhans细胞 (Langerhanscell,LC)的三维立体结构变化。方法 :采用免疫荧光技术对 2 2例正常食管粘膜、2 0例癌旁组织和 2 3例癌组织中LC进行标记 ,通过激光共聚焦扫描显微镜对LC进行断层扫描和三维立体结构重建。结果 :断层扫描和图象分析显示正常食管粘膜中LC相对面积大 ,形状因子相对值小。癌旁粘膜和癌组织中LC相比面积明显缩小 ,形状因子相对值大 ,正常食管粘膜、癌旁组织和癌组织中LC数量减少 ,胞浆突起逐渐减少 ,立体结构趋向圆形。结论 :食管癌发生过程中LC体积缩小 ,数量减少 ,胞浆突起逐渐减少 ,提示其抗原递呈的功能减退 。

瘢痕疙瘩中Langerhans细胞的电镜观察

目的:观察瘢痕疙瘩组织中Langerhans细胞的超微结构,探讨其与瘢痕疙瘩形成的关系。方法:应用电镜技术观察瘢痕疙瘩及增生性瘢痕切除标本各6例及4例正常皮肤组织中Langerhans细胞的形态,观察其分布特征。结果:电镜下表皮细胞层中朗格罕细胞核形多不规则,胞质中等电子密度,有较多线粒体和溶酶体,扁平囊泡较多。结论:Langerhans细胞在瘢痕疙瘩组织中功能活跃,Langerhans细胞与瘢痕疙瘩的形成关系密切。

母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤临床和病理特征分析

目的:归纳并分析母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(BPDCN)的临床资料,为进一步认识该类疾病提供依据。方法:回顾性分析11例BPDCN患者的临床表现、免疫表型及病理特点、治疗与预后。结果:11例明确诊断BPDCN的患者中,男性8例、女性3例,中位年龄44(6-81)岁。临床主要以皮疹、包块等为首发症状,并伴有淋巴结、骨髓受累。肿瘤性母细胞性浆细胞样树突状细胞(pDC)表达HLA-DR、CD4、CD56、CD123,不表达cCD3、cMPO、cCD79a,部分病例可表达CD38、CD99、CD36。临床上手术切除、多次化疗失败的患者复发快,患者生存期短。首次化疗达到完全缓解的患者pDC细胞不表达CD56,且经骨髓移植后具有较长的生存期。结论:BPDCN免疫表型具有异质性,CD56是区分肿瘤性和正常pDC细胞的良好标志物;化疗缓解后进行造血干细胞移植的BPDCN患者预后较好。

食管鳞癌组织中Langerhans细胞水平及意义

采用免疫组化SP法检测39例正常食管上皮、23例不典型增生及39例食管鳞癌组织中S-100蛋白的表达,以观察其中Langerhans细胞(LC)的水平。结果正常食管上皮、癌旁不典型增生和鳞癌组织中LC阳性率分别为64.10%、30.43%、41.03%,P<0.05。高、中、低分化鳞癌中LC阳性率分别为77.78%、45.45%、21.05%,P<0.01;侵犯浅肌层、深肌层和纤维膜的鳞癌中LC阳性率分别为33.33%、40.00%、42.86%,P<0.05;无和有淋巴转移的鳞癌中LC阳性率分别为53.85%、15.38%,P<0.01。认为鳞癌中LC数量减少;LC数量减少程度与食管鳞癌的分化程度及是否发生淋巴转移有关,而与浸润深度无关。

舌癌中Langerhans细胞的图像分析研究

目的 :探讨Langerhans细胞学与舌癌发生、发展的关系。方法 :采用电子计算机图像分析方法对 30例人类舌癌标本中正常上皮、不典型增生、原位癌及浸润癌ATP酶阳性的Langerhans细胞进行了数量及形态定量研究。结果 :研究发现各期中Langerhans细胞的数量不同 ,不典型增生中最少 (P <0 .0 5 ) ,早期浸润癌数量明显增多 (P <0 .0 5 )。图像分析发现病变各期Langerhans细胞的面密度、体密度、形态因子均较正常上皮中有明显改变 (P <0 .0 5 ) ,但与表面基本相同 (P >0 .0 5 )。结论 :Langerhans细胞数量和形态改变可能与人类舌癌的发生、发展有关。

Langerhans细胞与瘢痕疙瘩形成的相关性

目的探讨Langerhans细胞与瘢痕疙瘩形成的相关性。方法应用免疫组织化学(ABC法)观察S-100蛋白及CD1a在瘢痕疙瘩及增生性瘢痕与正常皮肤组织中的表达。结果瘢痕疙瘩及增生性瘢痕组织中S-100蛋白及CD1a免疫反应阳性的Langer-hans细胞明显增多。瘢痕疙瘩及增生性瘢痕与正常皮肤之间差异非常显著(P<0.01)。瘢痕疙瘩与增生性瘢痕之间差异不显著(P>0.05)。结论Langerhans细胞与瘢痕疙瘩的形成关系密切。

血管瘤样纤维组织细胞瘤14例临床病理学观察

目的探讨血管瘤样纤维组织细胞瘤(angiomatoid fibrous histiocytoma,AFH)的临床病理特征及分子学改变,分析其诊断、鉴别诊断及预后。方法收集14例AFH的临床、病理及随访资料,并文献复习。结果14例AFH患儿中,男童11例,女童3例;年龄11个月~12岁11个月,平均5.9岁。肿瘤位于四肢3例,躯干5例,头颈部5例,颅内1例。镜下肿瘤细胞核呈空泡状,合体样、漩涡状排列,可见纤维性假包膜及淋巴细胞鞘。9例可见假血管腔隙,2例可见钙化,2例核分裂活跃(活跃处11个/10 HPF)。3例镜下见硬化、黏液样间质。免疫表型:desmin(10/14)、EMA(12/14)、CD99(12/14)、SMA(9/12)、ALK(7/8)阳性,Ki67平均增殖指数16%。分子检测EWSR1基因断裂7例、EWSR1-ATF1融合2例、EWSR1-CREB1融合2例。14例患儿平均随访46个月,均无复发、转移。结论AFH是一种交界性或低度恶性肿瘤,儿童患者预后良好,很少复发或转移。诊断及鉴别诊断需要结合临床特点、组织形态、免疫组化及EWSR1、FUS基因检测综合分析。

PD-L1及微血管密度在肉瘤样肾细胞癌中的表达及意义

目的探讨肉瘤样肾细胞癌组织中PD-L1的表达及肿瘤内微血管密度情况,为肉瘤样肾细胞癌免疫治疗及靶向治疗方案的选择提供理论依据。方法通过免疫组化法检测PD-L1、CD31及CD34在16例肉瘤样肾细胞癌(癌成分均为透明细胞肾细胞癌)中的表达,并评估肿瘤微血管密度。结果16例肿瘤中CD31和CD34免疫组化染色显示,肉瘤样肾细胞癌区域微血管密度明显高于不伴肉瘤样分化的区域,微血管密度计数分别为68.6±25.8 vs 38.7±16.0(t=3.931,P=0.0005)和69.5±28.1 vs 40.1±18.4(t=3.506,P=0.0015),差异有统计学意义。肉瘤样区域PD-L1表达水平高于非肉瘤样区域,CPS分别为34.7±26.9和25.9±27.6,但差异无统计学意义。结论在肉瘤样肾细胞癌中,肉瘤样区域微血管密度和PD-L1表达水平明显高于非肉瘤样区域,提示靶向治疗联合免疫治疗可能为此类肿瘤提供一种有效的治疗方法。