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Human antibodies from a single-chain Fv fusion phage library
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作者 Yan, XY Tian, B 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1997年第15期1300-1303,共4页
THAT the bacteriophages can display human antibody fragments on their surfaces equivalent tothe mammalian immune repertoire provides a new and powerful means of making human anti-bodies for immunotherapy. This techniq... THAT the bacteriophages can display human antibody fragments on their surfaces equivalent tothe mammalian immune repertoire provides a new and powerful means of making human anti-bodies for immunotherapy. This technique combines production, selection and affinity matura-tion in numerous imaginative ways. The phage antibody display systems have an advantageover the conventional hybridoma technique in the generation of human antibody and the development of an affinity maturation process that mimics the immune system. Since the first 展开更多
关键词 human scfv phage ANTIBODY library specificity.
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从半合成抗体库克隆抗TNF-α人单链抗体 被引量:10
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作者 王琰 刘群英 +3 位作者 化冰 陈宇萍 朱迎春 陈晓穗 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期87-89,共3页
通过噬菌体抗体库技术,不经免疫克隆抗TNF-α人单链抗体,用固相化的人重组TNF-α抗原对半合成噬菌体抗体库进行了4轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选,可见到明显富集,从第3轮和第4轮洗脱下来的克隆中获得两株可特异结合TN... 通过噬菌体抗体库技术,不经免疫克隆抗TNF-α人单链抗体,用固相化的人重组TNF-α抗原对半合成噬菌体抗体库进行了4轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选,可见到明显富集,从第3轮和第4轮洗脱下来的克隆中获得两株可特异结合TNF-α的克隆,其可变区分别属于VH1、VH3和Vλ1亚群。 展开更多
关键词 噬菌体抗体库 TNFΑ 人单链抗体
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与肝癌细胞系HepG2特异性结合单链抗体的筛选与序列分析 被引量:3
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作者 余冰 倪明 +6 位作者 雷萍 李文涵 朱慧芬 张悦 唐珍洁 程欣 沈关心 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期179-182,共4页
目的从人源噬菌体抗体库中筛选与肝癌细胞系HepG2特异性结合的单链抗体,为寻找肝癌细胞表面特异性标志及靶向研究奠定基础。方法以正常肝细胞系L02为阴性筛选细胞,以肝癌细胞系HepG2为阳性筛选靶细胞,从人源噬菌体抗体库(Griffin.1Libra... 目的从人源噬菌体抗体库中筛选与肝癌细胞系HepG2特异性结合的单链抗体,为寻找肝癌细胞表面特异性标志及靶向研究奠定基础。方法以正常肝细胞系L02为阴性筛选细胞,以肝癌细胞系HepG2为阳性筛选靶细胞,从人源噬菌体抗体库(Griffin.1Library)经三轮筛选后,阳性菌质粒PCR确定其中含有单链抗体基因的克隆,通过细胞ELISA及FCM筛选特异性的单链抗体噬菌体,通过ABI3730全自动荧光测序仪测序,并通过GeneBank比对进行同源性分析,IPTG诱导可溶性单链抗体表达,并检测其与肝癌细胞株结合的特异性。结果获得了2个特异性较高的阳性噬菌体单个克隆。经DNA测序后,在Genebank中与人的免疫球蛋白库进行比对,并用IMGTVQuest软件进行分析,确定为2个插入序列不同的单链抗体片段。经细胞ELISA证明其阳性克隆菌培养上清可与肝癌细胞株特异性结合。获得的序列成功登陆Genebank,序列号为AY686498AY686499。结论从人源噬菌体抗体库中筛选到与肝癌细胞系HepG2特异性结合的具有功能活性的单链抗体,为进一步寻找肝癌细胞表面特异性抗原及靶向研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人源噬菌体抗体库 单链抗体 阴性筛选 阳性筛选 生物淘洗
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人源抗狂犬病毒免疫型抗体库的构建及特异性抗体筛选与鉴定 被引量:8
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作者 李琛 林红 +5 位作者 刘新建 王忠灿 周镇先 陈乐如 管晓虹 朱进 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期575-578,616,共5页
目的:利用噬菌体展示技术,构建人源抗狂犬病毒单链抗体库,筛选特异性的抗狂犬病毒糖蛋白人源单链抗体(scFv)并对其进行初步鉴定。方法:从接种狂犬疫苗的志愿者外周血中提取总RNA,RT-PCR扩增VH和VL基因,并利用重叠扩增PCR将VH和VL拼接为s... 目的:利用噬菌体展示技术,构建人源抗狂犬病毒单链抗体库,筛选特异性的抗狂犬病毒糖蛋白人源单链抗体(scFv)并对其进行初步鉴定。方法:从接种狂犬疫苗的志愿者外周血中提取总RNA,RT-PCR扩增VH和VL基因,并利用重叠扩增PCR将VH和VL拼接为scFv。将纯化后的scFv克隆至噬菌体载体pComb3XSS构建人源抗狂犬病毒单链抗体库,以狂犬病毒糖蛋白(RABVG)为抗原,从抗体库中筛选抗RABVG的scFv。通过phage-ELISA验证噬菌体单链抗体的结合特异性,将阳性克隆转化E.coliTOP10F′进行表达。结果:构建了人源抗狂犬病毒抗体库,抗体库的库容为3.29×109。经过5轮筛选,获得43株与RABVG特异结合的噬菌体单链抗体,其中15个A450值较高的克隆序列分析结果显示,有3个正确的单链抗体基因。单链抗体基因转化TOP10F′构建工程菌,表达纯化后的单链抗体,经ELISA检测能够与RABVG特异性结合。结论:从构建的人源免疫型抗狂犬病毒单链抗体库筛选出的能与RABVG特异性结合的scFv,为进一步制备抗RABVG的治疗性人源化抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 噬菌体展示 狂犬病毒 人源scfv抗体库
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从大容量噬菌体抗体库中筛选抗DNA-PKcs人源单链抗体 被引量:5
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作者 杜丽 周丽君 +7 位作者 潘秀颉 王豫 王欲晓 杨陟华 徐勤枝 张士猛 朱茂祥 周平坤 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期20-26,共7页
目的:从单链大容量噬菌体抗体库中筛选特异性的抗DNA-PKcs的人源抗体,用于肿瘤治疗或诊断目的。方法:经抗原性分析及BLAST比对,选定人DNA-PKcs蛋白中抗原性高且与其他蛋白没有同源性的片段,进行原核表达及纯化后将其固定在抗原管上,通过... 目的:从单链大容量噬菌体抗体库中筛选特异性的抗DNA-PKcs的人源抗体,用于肿瘤治疗或诊断目的。方法:经抗原性分析及BLAST比对,选定人DNA-PKcs蛋白中抗原性高且与其他蛋白没有同源性的片段,进行原核表达及纯化后将其固定在抗原管上,通过4轮"吸附-洗脱-扩增"过程从大容量抗体库中筛选特异性抗体,转化HB2151菌,制备抗DNA-PKcs的可溶性单链抗体;ELISA检测抗原-抗体结合活性。结果:经生物信息学分析,确定抗原性高且与其他蛋白没有同源性的DNA-PKcs片段DPK3(250个AA)、DPK4(257个AA)。经过4轮筛选,获得26个特异性结合DPK3及31个特异结合DPK4的克隆,指纹分析分别有5种和21种不同的可变区片段;成功制备了可溶性抗体。并做了抗原结合活性鉴定。结论:利用单链大容量抗体库获得抗DNA-PKcs的噬菌体抗体基因并且成功制备成可溶性抗体,为今后的研究和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 大容量噬菌体抗体库 DNA依赖蛋白激酶催化亚单位 单链抗体
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多样性人源天然噬菌体抗体库的构建及初步应用 被引量:5
6
作者 王晋 罗文新 +4 位作者 李利峰 陈瑛炜 王明桥 张军 夏宁邵 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期786-789,793,共5页
目的:构建多样性良好的人源天然噬菌体抗体库。方法:从正常人外周血中分离淋巴细胞,以RT-PCR和半巢式PCR扩增重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因,以重叠延伸PCR将VH、VL组装成scFv基因,并将其克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中。以pCANTAB... 目的:构建多样性良好的人源天然噬菌体抗体库。方法:从正常人外周血中分离淋巴细胞,以RT-PCR和半巢式PCR扩增重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因,以重叠延伸PCR将VH、VL组装成scFv基因,并将其克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中。以pCANTAB-5E电转化大肠杆菌TG1,构建人源天然噬菌体抗体库,测序分析抗体基因的家族信息和多样性,并用多种抗原对其进行筛选。结果:获得了库容为2×108的人源天然噬菌体抗体库。分别用5种抗原对其进行筛选,均可获得特异性噬菌体抗体的富集。结论:成功地构建了一个多样性良好的人源天然噬菌体抗体库,可用于制备具有应用前景的人源抗体。 展开更多
关键词 人源天然噬菌体抗体库 单链抗体 多样性
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具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的含硒人源单链抗体的制备 被引量:4
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作者 霍锐 石毅 +10 位作者 魏景艳 徐俊杰 吕绍武 闫飞 苏家明 段玉晶 王诗雯 丛登立 李唯 闫岗林 罗贵民 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1379-1383,共5页
以谷胱甘肽(GSH)为靶抗原,从噬菌体展示人源单链抗体库中筛选人源单链抗体(scFv).经3轮筛选后,用ELISA方法检测出5个(2,11,16,24,32)可以和GSH结合的克隆.PCR产物的电泳和测序结果表明,只有3个克隆(11,16,24)具有完整的scFv编码基因.选... 以谷胱甘肽(GSH)为靶抗原,从噬菌体展示人源单链抗体库中筛选人源单链抗体(scFv).经3轮筛选后,用ELISA方法检测出5个(2,11,16,24,32)可以和GSH结合的克隆.PCR产物的电泳和测序结果表明,只有3个克隆(11,16,24)具有完整的scFv编码基因.选取和GSH结合力高的克隆11的scFv编码基因组装到表达载体pPELB上,在大肠杆菌Rosetta中进行可溶性表达,用Ni2+螯合亲和层析纯化scFv-11,免疫点印迹结果证实该抗体能与GSH特异结合.通过化学突变将scFv-11的丝氨酸转变成硒代半胱氨酸(Sec)后,获得了具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活力的含硒(Se)人源单链抗体(Se-scFv-11),其活力为351U/μmol. 展开更多
关键词 人源单链抗体 噬菌体展示抗体库 谷胱甘肽过氧化物酶 化学突变
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人源性抗乳腺癌单链抗体库的筛选与初步鉴定 被引量:4
8
作者 王净 王慧 +4 位作者 王超 袁媛 崔岩 叶菁 李青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期837-840,共4页
目的:本研究旨在已构建的大容量人源性抗乳腺癌噬菌体单链抗体库的基础上,筛选出高亲和力的特异性单链抗体(scFv)并对抗体基本特性进行初步鉴定。方法:以人乳腺癌细胞系MCF-7为靶标,经过4轮淘洗,筛选出高亲和力的特异性抗乳腺癌scFv,并... 目的:本研究旨在已构建的大容量人源性抗乳腺癌噬菌体单链抗体库的基础上,筛选出高亲和力的特异性单链抗体(scFv)并对抗体基本特性进行初步鉴定。方法:以人乳腺癌细胞系MCF-7为靶标,经过4轮淘洗,筛选出高亲和力的特异性抗乳腺癌scFv,并对其结构序列进行分析;通过ELISA和Western blot方法,鉴定scFv的亲和力和特异性,以及其蛋白的基本表达情况。结果:成功构建具有高亲和力的抗乳腺癌单链抗体库,获得scFv的长度约为750 bp,ELISA证实所得抗体对乳腺癌细胞具有良好的亲和力和高度的特异性,IPTG诱导表达及Western blot结果显示,scFv为相对分子质量(Mr)30 000的可溶性蛋白。结论:本研究在已构建的大容量抗乳腺癌单链抗体库的基础上,筛选获得了高亲和力的抗乳腺癌单链抗体库。研究结果为进一步获得可应用于临床诊断和治疗的乳腺癌靶向性抗体奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 单链抗体 乳腺癌 人源性 噬菌体抗体库 筛选 表达
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特异性抗人cyclin D1人源单链抗体的筛选 被引量:4
9
作者 李桂英 朱迅 +4 位作者 周立宏 邹德生 郝东云 田宇 杜柏榕 《中国实验诊断学》 2006年第11期1248-1251,共4页
目的从噬菌体抗体库中筛选人源性抗人cyclinD1蛋白的单链抗体并进行鉴定。方法以原核表达并用Ni-NTA Agarose纯化的重组人cyclinD1蛋白为抗原,通过“吸附-洗脱-扩增”淘选过程从噬菌体抗体库中筛选特异性抗人cyclinD1蛋白的单链抗体,通... 目的从噬菌体抗体库中筛选人源性抗人cyclinD1蛋白的单链抗体并进行鉴定。方法以原核表达并用Ni-NTA Agarose纯化的重组人cyclinD1蛋白为抗原,通过“吸附-洗脱-扩增”淘选过程从噬菌体抗体库中筛选特异性抗人cyclinD1蛋白的单链抗体,通过ELISA方法对获得抗体的特异性和结合活性进行分析鉴定。结果经过4轮筛选,获得7株能与人cyclinD1蛋白结合的阳性克隆,其中3株噬菌体的可溶性表达单链抗体能与人cyclinD1蛋白有特异性结合活性。结论利用噬菌体抗体库技术可以不经免疫过程制备出特异性的人源性抗人cyclinD1抗体。 展开更多
关键词 人cyclinD1蛋白 噬菌体抗体库 单链抗体 淘选
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从人源大容量天然抗体库中筛选到抗禽流感病毒H5N1单链抗体 被引量:2
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作者 孙丽娜 于礼 +3 位作者 张黎 李川 李德新 梁米芳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期86-90,共5页
目的从人源大容量天然抗体库中筛选到抗禽流感病毒H5N1单链抗体。方法运用噬菌体表面呈现技术,用纯化的H5N1禽流感血凝素蛋白HA(A/Anhui/1/2005)对人源大容量天然抗体库进行富集筛选,对获得的阳性克隆进行序列分析,并将其克隆入携带人... 目的从人源大容量天然抗体库中筛选到抗禽流感病毒H5N1单链抗体。方法运用噬菌体表面呈现技术,用纯化的H5N1禽流感血凝素蛋白HA(A/Anhui/1/2005)对人源大容量天然抗体库进行富集筛选,对获得的阳性克隆进行序列分析,并将其克隆入携带人源Fc段的表达载体,实现scFv-Fc融合抗体的分泌型表达。用ELISA、IFA对所获人源单抗的功能特性进行鉴定。结果经过3轮富集筛选,共获得了82株特异性结合H5N1禽流感病毒HA的人源scFv单链抗体,分别属于5个不同的抗体序列,ELISA、IFA表明从抗体库筛选获得的5株人源单抗与禽流感病毒H5N1及其HA具有较好的特异性,而与甲1型和甲3型人流感病毒无交叉反应。结论从人源大容量天然抗体库中利用高通量的筛选策略在短时间内获得抗禽流感病毒H5N1人源单抗,对于禽流感的紧急预防和治疗具有重要意义。 展开更多
关键词 禽流感病毒 噬菌体表面呈现 人源大容量天然抗体库 单链抗体
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全人源抗乳腺癌噬菌体单链抗体库的构建 被引量:2
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作者 王净 王慧 +1 位作者 袁媛 李青 《现代肿瘤医学》 CAS 2011年第11期2139-2142,共4页
目的:利用噬菌体展示技术构建全人源性抗乳腺癌单链抗体库。方法:从临床获取未化疗乳腺癌病人外周血样30份,分离出单个核细胞(PBMC),提取总RNA,用RT-PCR技术逆转录获得cDNA,并扩增出全套人抗体重链(VH)和轻链(VL)基因,经重叠延伸PCR(SOE... 目的:利用噬菌体展示技术构建全人源性抗乳腺癌单链抗体库。方法:从临床获取未化疗乳腺癌病人外周血样30份,分离出单个核细胞(PBMC),提取总RNA,用RT-PCR技术逆转录获得cDNA,并扩增出全套人抗体重链(VH)和轻链(VL)基因,经重叠延伸PCR(SOE-PCR),在体外将两者连接成单链抗体(scFv)基因片段,将该片段用Sfi I和Not I酶切后克隆至pCantab5E噬菌体载体,电转化TG1感受态菌,收集培养后平板上的菌落,即构建初级噬菌体单链抗体库。结果:得到长度约为360bp和340bp的VH和VL,拼接后得到的scFv长度约为750bp;经PCR初步鉴定插入率约为80%,BstN 1多样性酶切检验,酶切图谱呈多样性。经测序验证,最终获得库容约为2.4×106pfu/ml初级单链抗体库。结论:本研究获得了全人源抗乳腺癌噬菌体单链抗体库,为下一步筛选抗人乳腺癌细胞特异性单链抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 全人源抗体库 乳腺癌 单链抗体(scfv) 噬菌体抗体库
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应用全合成噬菌体抗体展示库技术实现抗膀胱癌单链抗体的定向进化 被引量:1
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作者 张明生 何丹 +4 位作者 任永明 刘晶 林晴 晁开 黄华樑 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2002年第8期32-37,共6页
单链抗体在肿瘤治疗的临床应用中常会遇到两方面的问题 ,即低亲和力和鼠源性导致的免疫原性。为此 ,我们对鼠源抗膀胱癌单链抗体进行人源化改造 ,并从噬菌体抗体库中筛选具有高亲和力的人源化的单链抗体分子。运用噬菌体展示技术 ,成功... 单链抗体在肿瘤治疗的临床应用中常会遇到两方面的问题 ,即低亲和力和鼠源性导致的免疫原性。为此 ,我们对鼠源抗膀胱癌单链抗体进行人源化改造 ,并从噬菌体抗体库中筛选具有高亲和力的人源化的单链抗体分子。运用噬菌体展示技术 ,成功构建了库容为 10 6人源化的噬菌体抗体库 ,用膀胱癌细胞系膜抗原进行三轮筛选 ,得到了 展开更多
关键词 全合成噬菌体抗体展示库 抗体库 膀胱癌 单链抗体 定向进化 人源化 肿瘤治疗
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人源抗A型肉毒毒素单链抗体的体外亲和筛选 被引量:2
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作者 王慧 荫俊 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期22-25,共4页
以重组制备的A型肉毒毒素保护性抗原为配体,对人源噬菌体免疫抗体文库进行体外定向亲和筛选,获得特异结合子,其中与抗原高亲和力结合的抗体克隆B17基因全长750bp,可编码250个氨基酸,抗体可变区基因同源分析表明,分属VH4和κchainⅡ家族... 以重组制备的A型肉毒毒素保护性抗原为配体,对人源噬菌体免疫抗体文库进行体外定向亲和筛选,获得特异结合子,其中与抗原高亲和力结合的抗体克隆B17基因全长750bp,可编码250个氨基酸,抗体可变区基因同源分析表明,分属VH4和κchainⅡ家族,是一株人源特异单链抗体基因。人源单链抗体B17在大肠杆菌中获得了重组表达,表达产物可以竞争特异肉毒抗毒素马血清与抗原的结合,是国内首次获得的抗A型肉毒毒素保护性抗原的人源单链抗体,可以在肉毒毒素检测和治疗研究中发挥作用。 展开更多
关键词 A型肉毒毒素 噬菌体文库 人源单链抗体 表达
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A型肉毒毒素表位多肽免疫和人源噬菌体单链抗体文库的构建 被引量:1
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作者 王慧 荫俊 +1 位作者 侯晓军 邢洪光 《生物技术通讯》 CAS 2004年第5期441-443,共3页
采用表位合成多肽免疫获得编码人源抗体的基因材料,抗体轻重链可变区基因通过剪接重叠延伸(SOE)技术进行组装后,亚克隆入噬菌体粒中构建免疫文库。以重组制备的A型肉毒毒素保护性抗原为配体筛选结合子,ELISA鉴定,获得具有较高抗原结合... 采用表位合成多肽免疫获得编码人源抗体的基因材料,抗体轻重链可变区基因通过剪接重叠延伸(SOE)技术进行组装后,亚克隆入噬菌体粒中构建免疫文库。以重组制备的A型肉毒毒素保护性抗原为配体筛选结合子,ELISA鉴定,获得具有较高抗原结合力的噬菌体克隆,进行基因测序和家族定位分析。结果显示,表位合成多肽免疫,成功构建了库容大于108的重组抗体文库。体外3轮免疫淘筛,筛选到人源A型肉毒抗毒素克隆,基因结构分析表明,其中ScFvB17全长750bp,可编码250个氨基酸残基:VH属于VH4家族,369bp,编码123个氨基酸残基;Vκ属于κ链Ⅱ家族,336bp,编码112个氨基酸残基。基因的同源分析表明,这是一株特异的单链抗体新基因。 展开更多
关键词 表位 免疫 A型肉毒毒素 单链抗体 噬菌体 合成多肽 基因 文库 剪接 克隆
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从半合成噬菌体抗体库中克隆抗地高辛人单链抗体 被引量:3
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作者 刘德新 李小鹰 +2 位作者 化冰 王刚 王琰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期575-578,共4页
目的 :从半合成噬菌体抗体库中克隆抗地高辛 (Dig)人单链抗体 (ADAScFv) ,为Dig中毒的诊断和治疗提供人源性抗体。方法 :①以改良法制备Dig BSA偶联物 ;②以固相化的Dig BSA偶联物对人噬菌体ScFv抗体库进行了 4轮筛选 ,通过ELISA筛选出... 目的 :从半合成噬菌体抗体库中克隆抗地高辛 (Dig)人单链抗体 (ADAScFv) ,为Dig中毒的诊断和治疗提供人源性抗体。方法 :①以改良法制备Dig BSA偶联物 ;②以固相化的Dig BSA偶联物对人噬菌体ScFv抗体库进行了 4轮筛选 ,通过ELISA筛选出能结合Dig的抗体克隆并鉴定其活性 ,通过ELISA竞争抑制实验分析其特异性 ,对阳性克隆的DNA进行测序分析。结果 :①在对抗体库的筛选过程中可见有明显的富集 ;②获得一株可结合Dig及其类似物的阳性克隆 ;③阳性克隆的可变区分别属于VH5和Vλ1亚群。结论 :利用噬菌体抗体库技术获得了能与Dig及其它洋地黄类药物结合的人ADAScFv ,经进一步分析及抗体工程改造后 ,有可能为临床上诊断及治疗洋地黄类药物中毒提供具有实用价值的人源性抗体。 展开更多
关键词 噬菌体抗体库 人单链抗体 地高辛中毒 克隆
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从噬菌体抗体库中淘选人绒毛膜促性腺激素的单链抗体 被引量:1
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作者 路小龙 张凤英 +2 位作者 郭振泉 黄仪秀 朱圣庚 《北京大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期283-285,共3页
由鼠源噬菌体抗体库淘选到展示有人绒毛膜促性腺激素单链抗体的噬菌体克隆。用ELISA方法进行检测 ,从结合力最强的克隆中分离单链抗体基因 ,插入经改造的高效表达载体pET 2 1a(+ )中 ,转化大肠杆菌 ,诱导表达。从培养基中可检测到可溶... 由鼠源噬菌体抗体库淘选到展示有人绒毛膜促性腺激素单链抗体的噬菌体克隆。用ELISA方法进行检测 ,从结合力最强的克隆中分离单链抗体基因 ,插入经改造的高效表达载体pET 2 1a(+ )中 ,转化大肠杆菌 ,诱导表达。从培养基中可检测到可溶性抗人绒毛膜促性腺激素的单链抗体。 展开更多
关键词 噬菌体抗体库 人绒毛膜促性腺激素 单链抗体 ELISA方法 基因工程 抗体克隆
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利用大型天然噬菌体抗体库筛选抗死亡受体5人源抗体 被引量:1
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作者 蒋效 何立东 +5 位作者 王欲晓 丁立 吴成林 熊丽娟 周丽君 王育红 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期833-837,共5页
目的从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗人死亡受体5(DR5)单链抗体(sc Fv)并对其抗原结合活性进行鉴定。方法以前期真核表达纯化的DR5-Fc蛋白包被筛选管,从自主构建的大容量天然噬菌体抗体库中,通过4轮筛选过程获得噬菌体抗体,采用免疫... 目的从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗人死亡受体5(DR5)单链抗体(sc Fv)并对其抗原结合活性进行鉴定。方法以前期真核表达纯化的DR5-Fc蛋白包被筛选管,从自主构建的大容量天然噬菌体抗体库中,通过4轮筛选过程获得噬菌体抗体,采用免疫细胞化学染色、ELISA鉴定其抗原结合活性;DNA指纹图谱分析和序列测定确定其抗体类型。结果经过4轮筛选,获得26株与DR5特异性结合的阳性克隆,DNA指纹分析有4种不同的可变区片段;经过基因测序,分析可变区基因的亚群,并将其制备成可溶性的抗体,进一步用免疫细胞化学技术证实所获得的抗体可特异性结合SW480细胞的DR5蛋白。结论利用噬菌体抗体库技术成功获得了特异性抗DR5的人源性sc Fv。 展开更多
关键词 抗死亡受体5抗体 人源单链抗体 大容量噬菌体抗体库
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抗FKBP52人源单链抗体的筛选及其完整抗体真核表达载体的构建 被引量:1
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作者 丁立 熊丽娟 +3 位作者 王欲晓 吴成林 付凯飞 周丽君 《生物技术通讯》 CAS 2015年第6期786-789,共4页
目的:从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗FKBP52人源单链抗体,并进一步构建其真核表达载体。方法:以FKBP52为抗原,通过吸附、扩增、洗脱等过程,从大容量天然噬菌体抗体库中筛选特异性单链抗体,采用ELISA方法进行特异性测定,采用生物膜干... 目的:从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗FKBP52人源单链抗体,并进一步构建其真核表达载体。方法:以FKBP52为抗原,通过吸附、扩增、洗脱等过程,从大容量天然噬菌体抗体库中筛选特异性单链抗体,采用ELISA方法进行特异性测定,采用生物膜干涉方法测定亲和力,再经同源重组方法构建完整抗体的真核表达载体,通过PCR及序列测定对构建的载体进行验证。结果:经过4轮筛选,获得15种与FKBP52特异结合的噬菌体抗体,其中7种得到可溶性表达;序列分析表明,7种单链抗体重链可变区分属VHⅠ、VHⅢ和VHⅣ亚群,轻链可变区分属VκⅠ、VκⅢ和VλⅠ亚群;特异性结合活性较好的4株抗体的亲和常数分别为9.723×10-8、3.500×10-8、1.203×10-8和5.323×10-8;将亲和力较好的一株单链抗体轻、重链可变区基因分别拼接到含有人κ及Ig G1恒定区基因的p CMV-L和p CMV-H真核表达载体中。结论:筛选获得多株人源抗FKBP52单链抗体,并构建了完整抗体的真核表达载体。 展开更多
关键词 FKBP52 噬菌体抗体库 单链抗体 真核表达载体
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从噬菌体单链抗体库中筛选MMP7单链抗体
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作者 孙春燕 《黑龙江医药科学》 2008年第3期1-2,共2页
目的:从人天然噬菌体单链抗体库中筛选与MMP7特异结合的单链抗体(scFv),并对其特异性及活性进行分析。方法:转化MMP7质粒,分离、纯化与鉴定表达的MMP7。以MMP7为靶标对人天然噬菌体单链抗体库进行4轮的筛选富集,初步筛选到能与MMP7结合... 目的:从人天然噬菌体单链抗体库中筛选与MMP7特异结合的单链抗体(scFv),并对其特异性及活性进行分析。方法:转化MMP7质粒,分离、纯化与鉴定表达的MMP7。以MMP7为靶标对人天然噬菌体单链抗体库进行4轮的筛选富集,初步筛选到能与MMP7结合的scFv。通过ELISA和Western对所获scFv的特异性进行分析。结果:分离纯化鉴定了MMP7,筛选获得了结合MMP7的人噬菌体抗体。ELISA和Western表明筛选到的scFv特异性较好。结论:利用噬菌体抗体库技术可直接获得特异人源MMP7抗体,为抗MMP7单抗药物的研发提供了新的可能性。 展开更多
关键词 人天然噬菌体单链抗体库 scfv MMP7 筛选
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特异结合人禽流感病毒H5N1的scFv分子性能鉴定
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作者 武婕 张宏斌 +6 位作者 柯昌文 陈秋霞 李晖 周杰 黄吉城 张欣 邹丽容 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第4期299-303,共5页
目的从人源化噬菌体抗体库(human single fold scFv libraries I+J)中筛选到能高亲和性、特异结合人禽流感病毒H5N1的单链抗体,为建立H5N1快速筛查试剂和人源化治疗单抗奠定基础。方法以H5N1病毒的血凝素(hemagglutitin,HA)蛋白... 目的从人源化噬菌体抗体库(human single fold scFv libraries I+J)中筛选到能高亲和性、特异结合人禽流感病毒H5N1的单链抗体,为建立H5N1快速筛查试剂和人源化治疗单抗奠定基础。方法以H5N1病毒的血凝素(hemagglutitin,HA)蛋白和核蛋白(nucleoprotein,NP)为目的蛋白,对上述单抗噬菌体文库以亲和性为原理进行筛选,经过3轮筛选富集后,随机挑选了96个噬菌体克隆扩增培养,ELISA法挑选能特异性、高亲和性结合目的蛋白的噬菌体克隆,并换用HB2151宿主菌对阳性单链抗体克隆进行可溶性表达,ELISA法鉴定可溶性单链抗体的结合活性,PCR扩增阳性克隆的轻、重链基因片段,并对阳性单链抗体分子测序和序列分析。结果经过3轮筛选,分别从96个噬菌体克隆中挑选到了两株能特异结合NP蛋白、3株能特异结合HA蛋白的单链抗体,PCR扩增都得到了长为300、302和935bp的轻链、重链和轻链-连接片段-重链的基因片段,测序结果分析发现上述5条单链抗体片段在轻链的47、49、50、51、53、54、56、96、97、98和99位的氨基酸组成不同,而特异结合NP蛋白的单链在重链区域氨基酸组成完全相同,而特异结合HA蛋白的单链在重链的44、47、85、86、87、88和89位氨基酸组成不同。结论从噬菌体抗体库中筛选到的特异结合HA和NP蛋白的单链抗体片段,可为进一步研发H5N1快速筛选试剂和人源性治疗抗体奠定基础,也可为鉴定HA和NP蛋白中的抗原决定簇提供结构信息。 展开更多
关键词 人禽流感病毒H5N1 人源化单链抗体 噬菌体文库 构建 筛选
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