SYBR Green实时定量PCR检测人脑原发胶质瘤中LATS1和LATS2基因的表达

目的:运用实时定量PCR检测肿瘤抑制基因LATS1和LATS2的mRNA在人脑原发胶质瘤组织中的表达情况,并进一步分析其表达变化与临床资料之间的关系。方法:建立SYBR Green实时定量PCR的检测方法;通过标准曲线法对肿瘤抑制基因LATS1和LATS2的mRNA在30例原发胶质瘤(WHO分级:Ⅱ级10例,Ⅲ级10例,Ⅳ级10例)和10例正常脑组织中的表达进行定量检测;统计学分析不同级别胶质瘤及正常脑组织间的表达差异,并进一步结合临床资料分析不同性别和不同年龄组的表达差异。结果:与正常脑组织相比,在各病理级别胶质瘤中LATS1和LATS2的mRNA表达均下调(P<0.05),但胶质瘤不同级别组之间的差异均无统计学意义(P>0.05)。LATS1和LATS2在不同性别组和年龄组胶质瘤中的表达差异也无统计学意义(P>0.05)。结论:①成功地建立了SYBR Green实时定量PCR检测LATS1和LATS2基因表达的方法;②胶质瘤中LATS1和LATS2的mRNA表达水平均低于正常脑组织,但不同病理分级间的表达无明显差异。

过表达LATS2基因诱导口腔鳞癌细胞自噬的初步研究

目的:探讨大肿瘤抑制因子2(LATS2)基因过表达诱导口腔鳞癌细胞(OSCC)发生自噬性的现象的机制。方法:构建慢病毒载体LATS2稳定转染SCC-25细胞,并设空载体为对照组。转染72 h后提取细胞总蛋白,Western印迹方法检测LATS2、自噬标志物(LC3)、Beclin-1蛋白表达的变化,双荧光自噬流以及透射电子电镜检测细胞自噬水平。结果:与对照组相比,实验组细胞LC3、Beclin-1蛋白的表达明显增多(P<0.05);透射电子显微镜观察到OSCC细胞SCC-25细胞质内有大量自噬体和自噬溶酶体。结论:LATS2基因可诱导OSCC细胞SCC-25发生自噬。

口腔鳞状细胞癌组织miR-31-5p、LATS2表达变化及其临床意义

目的探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织微小RNA-31-5p(miR-31-5p)、大肿瘤抑制激酶2(LATS2)表达变化及其临床意义。方法选择OSCC患者97例,取术中切除的OSCC组织及其配对的癌旁正常组织,采用RT-qPCR法检测miR-31-5p、LATS2 mRNA表达。比较OSCC组织与癌旁正常组织miR-31-5p、LATS2 mRNA表达,通过在线网站预测miR-31-5p与LATS2的靶向结合位点,并分析二者表达的关系及其与患者临床病理特征的关系。分析不同miR-31-5p、LATS2 mRNA表达与OSCC患者预后的关系。采用多因素Cox回归模型分析OSCC患者预后的影响因素。结果OSCC组织miR-31-5p相对表达量高于癌旁正常组织,LATS2 mRNA相对表达量低于癌旁正常组织(t分别为35.314、40.900,P均<0.01)。经在线网站预测,miR-31-5p与LATS2存在靶向结合位点。Pearson相关分析显示,OSCC组织miR-31-5p表达与LATS2 mRNA表达呈负相关关系(r=-0.688,P<0.01)。OSCC组织miR-31-5p、LATS2 mRNA表达与肿瘤组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),而与性别、年龄、肿瘤直径无关(P均>0.05)。97例OSCC患者中,miR-31-5p表达≥3.258者55例、miR-31-5p表达<3.258者42例,LATS2 mRNA表达≥1.216者40例、LATS2 mRNA表达<1.216者57例。miR-31-5p表达≥3.258者3年累积生存率低于miR-31-5p表达<3.258者,LATS2 mRNA表达≥1.216者3年累积生存率高于LATS2 mRNA表达<1.216者(χ^(2)分别为5.829、6.616,P均<0.05)。所有患者术后随访4~36个月,中位随访时间26个月,随访期间死亡31例。多因素Cox比例风险回归分析显示,TNM分期Ⅲ、Ⅳ期及有淋巴结转移、miR-31-5p表达≥3.258为OSCC患者死亡的独立危险因素,而LATS2 mRNA表达≥1.216则为其独立保护因素(P均<0.05)。结论OSCC组织miR-31-5p高表达、LATS2低表达,二者表达变化与肿瘤组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移以及患者预后有关。

口腔鳞癌组织LATS2基因启动子甲基化水平及其意义

目的探讨大肿瘤抑制因子2(LATS2)基因启动子甲基化在口腔鳞状细胞癌(口腔鳞癌)发生、发展中的作用。方法选取108例口腔鳞癌患者手术切除的肿瘤组织,其中45例留取癌旁正常组织。采用RT-PCR法检测口腔鳞癌组织及癌旁正常组织LATS2 mRNA表达;采用特异性PCR法检测口腔鳞癌组织LATS2基因启动子甲基化情况,采用Spearman相关分析法分析口腔鳞癌组织LATS2启动子甲基化与患者临床病理参数的关系及其与LATS2 mRNA表达的关系。结果口腔鳞癌组织及癌旁正常组织LATS2 mRNA阳性表达率分别为47. 22%(51/108)、100%(45/45),LATS2 mRNA相对表达量分别为0. 32±0. 04、1. 01±0. 08,二者比较P均<0. 05。口腔鳞癌组织LATS2基因启动子完全甲基化率高于癌旁正常组织,完全非甲基化率低于癌旁正常组织,二者比较P均<0. 05。口腔鳞癌组织LATS2基因启动子甲基化与肿瘤临床分期、组织分级及淋巴结转移有关,并与LATS2 mRNA表达呈负相关关系(P均<0. 05)。结论 LATS2基因启动子甲基化可能通过导致LATS2基因表达下调,促进口腔鳞癌的发生、发展。

LATS2基因通过Wnt信号通路对H9C2心肌细胞保护的作用机制研究

目的探讨大肿瘤抑制因子2(LATS2)基因对缺氧复氧(H/R)诱导的H9C2心肌细胞凋亡及Wnt信号通路的影响。方法 LATS2 siRNA或LATS2过表达质粒转染H9C2心肌细胞,并分别转染阴性对照siRNA及空载体(vector),转染48 h后,通过Western blotting检测转染后的各组细胞中LATS2的蛋白表达;建立H/R模型,细胞分为正常对照组(Control组)、单纯缺氧复氧组(H/R组)、H/R+LATS2-siRNA组和H/R+pcDNA3.1-LATS2组,流式细胞术检测各组细胞凋亡率及活性氧(ROS)含量;Western blotting检测凋亡蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)及Wnt信号通路β-连环蛋白(β-catenin)和c-myc的蛋白表达。结果 siRNA组和PcDNA3.1组的LATS2蛋白表达与Control组差异无统计学意义(P>0.05),而LATS2-siRNA组LATS2的蛋白表达显著低于Control组(P<0.05),pcDNA3.1-LATS2组LATS2的蛋白表达显著高于Control组(P<0.05);与Control组比较,H/R组细胞凋亡率、ROS含量及cleaved caspase3、β-catenin和c-myc的蛋白表达均显著升高(P<0.05),与H/R组比较,H/R+LATS2-siRNA组细胞凋亡率、ROS含量及cleaved caspase3、β-catenin和c-myc的蛋白表达均显著升高,H/R+pcDNA3.1-LATS2组细胞凋亡率、ROS含量及cleaved caspase3、β-catenin和c-myc的蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论抑制LATS2基因表达可诱导心肌细胞凋亡及上调Wnt信号通路,而抑制LATS2基因表达反之。

肺癌根治术后联用奥希替尼对Ⅰ~Ⅱ期肺癌患者生存时间及LATS2和Ki-67表达的影响

目的:研究肺癌根治术后联用奥希替尼对Ⅰ~Ⅱ期肺癌患者生存时间及大肿瘤抑制因子2(LATS2)和Ki-67表达的影响。方法:选取2017年2月-2018年10月于朝阳市中心医院接受肺癌根治术治疗的Ⅰ~Ⅱ期肺癌患者82例纳入研究,采用电脑随机数字表法分为联合组和常规组,每组41例。常规组术后予以常规抗感染、止痛以及补液等对症治疗,联合组则于常规组的基础上增用奥希替尼治疗。分析两组治疗前后生活质量和血清VEGF、CEA水平及LATS2、Ki-67表达,比较两组1、2年无瘤生存率。结果:治疗后,联合组及常规组FACT-G评分分别为(80.42±7.35)、(71.65±6.23)分,均明显高于治疗前,且联合组高于常规组(P<0.05)。治疗后,联合组血清VEGF、CEA水平均低于常规组(P<0.05)。治疗后,联合组LATS2阳性率高于常规组,而Ki-67阳性率低于常规组(P<0.05)。联合组1、2年无瘤生存率分别为90.24%、75.61%,均高于常规组的73.17%、53.66%(P<0.05)。结论:肺癌根治术后联用奥希替尼可有效提高Ⅰ~Ⅱ期肺癌患者生命质量,延长生存时间,且有效改善LATS2和Ki-67表达。

大肿瘤抑制激酶2在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:检测大肿瘤抑制激酶2(large tumor suppressor kinase 2,LATS2)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织和细胞中的表达水平,对NSCLC细胞增殖、侵袭和患者临床特征的影响。方法:收集2017年6月-2019年6月在我院接受手术治疗的NSCLC患者260例,免疫组化实验检测NSCLC和癌旁组织中LATS2的表达水平;卡方检验分析LATS2的表达与患者临床特征的关系;qRT-PCR检测NSCLC组织和癌旁组织中LATS2 mRNA的相对表达水平;转染实验将LATS2质粒转染至A549细胞中;MTT实验检测LATS2对A549细胞增殖的影响;Transwell实验检测LATS2对A549细胞侵袭的影响。结果:LATS2在癌组织中的表达低于癌旁组织;LATS2的高表达率为72.3%(188/260),低表达率为27.7%(72/260);LATS2高表达组与低表达组患者在性别、肿瘤类型、胸膜侵犯、血管侵犯、淋巴管侵犯和T分期之间无统计学差异,在年龄、肿瘤直径、淋巴转移和病理分级之间有统计学差异(P<0.05);NSCLC组织和细胞中LATS2 mRNA的相对表达水平显著低于癌旁组织和人正常肺上皮细胞HPAEpiC;LATS2质粒转染至A549细胞中使其表达水平升高,LATS2高表达组细胞的OD值和发生侵袭的细胞数显著降低。结论:LATS2与患者的年龄、肿瘤直径、淋巴结转移和病理分级有关,其表达水平增加后可显著抑制NSCLC细胞的增殖和侵袭,有可能成为NSCLC治疗的新作用靶点。

过表达大肿瘤抑制因子2对口腔鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨过表达大肿瘤抑制因子2(LATS2)基因对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖和凋亡的影响。方法应用慢病毒介导的基因过表达技术,使用LATS2过表达慢病毒感染SCC-25细胞株。通过CCK-8检测过表达LATS2对细胞增殖的影响;流式细胞术检测LATS2基因过表达后细胞凋亡情况;Westernblot检测LATS2过表达后对凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的变化。结果转染p EGFP-LATS2细胞的LATS2基因表达明显上调;p EGFP-LATS2组细胞增殖明显受到抑制;流式细胞术检测pEGFP-LATS2组凋亡率明显高于空白对照组(control)和空载体组(pEGFP-control)(P<0.05)。与control和pEGFP-control组相比,pEGFP-LATS2组Bax蛋白上调,而Bcl-2蛋白下调。结论过表达LATS2基因可明显抑制SCC-25细胞增殖并促进细胞凋亡。

弥漫型大B细胞淋巴瘤EZH2、XIAP和Survivin蛋白表达水平及意义

目的探讨弥漫型大B细胞淋巴瘤Zeste同源物增强子2(EZH2)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和生存素(Survivin)蛋白表达水平及意义。方法选取弥漫型大B细胞淋巴瘤组织92例作为观察组,同时选取反应性增生淋巴结组织50例作为对照组,采用免疫组化染色法检测EZH2、XIAP和Survivin蛋白表达。结果观察组EZH2、XIAP和Survivin蛋白阳性表达率分别为77.17%、55.43%和60.87%,明显高于对照组(P<0.05)。观察组临床分期Ⅲ~Ⅳ期EZH2、XIAP和Survivin蛋白表达阳性率分别为90.70%、86.05%和81.40%,明显高于临床分期Ⅰ~Ⅱ期(P<0.05);EZH2与XIAP、Survivin蛋白表达呈正相关(γ=0.547、0.360,P均<0.05),XIAP与Survivin蛋白表达呈正相关(γ=0.581,P<0.05)。结论弥漫型大B细胞淋巴瘤EZH2、XIAP和Survivin蛋白表达水平上调,与临床分期有一定关系,三者间存在相关关系。

大肿瘤抑制激酶2基因多态性与原发性结直肠癌的关联性

目的探讨大肿瘤抑制激酶2(LATS2)基因单核苷酸多态性(SNP)rs558614、rs9552315、rs7317471和rs9509492与大肠癌发病风险的关联性。方法采用Taqman法将390例大肠癌患者和同期收集的413例正常对照进行基因分型,用非条件性Logistic回归计算比值比(OR)及其95%可信区间(CI),在共显性、显性、隐性、超显性和附加5种遗传模型下分别分析LATS2基因SNP rs558614、rs9552315、rs7317471和rs9509492与大肠癌、直肠癌和结肠癌发病风险的关联性;采用Haploview 4.2软件构建单体型。结果在共显性、显性、隐性、超显性和附加5种遗传模型下,SNP rs558614、rs9552315、rs7317471和rs9509492与大肠癌、直肠癌和结肠癌发病没有关联。4个SNP位点未能形成单体型块。结论LATS2基因SNP rs558614、rs9552315、rs7317471和rs9509492可能在大肠癌、直肠癌和结肠癌发病过程中不起主要作用。

CRISPR/Cas9介导的LATS1/2敲除抑制卵巢癌细胞ES-2增殖

Hippo信号通路在哺乳动物肝脏发育、动态平衡、再生和疾病中发挥非常重要的作用。大肿瘤抑制基因1/2(large tumor suppressor 1/2,LATS1/2)激酶是Hippo信号通路的关键激酶,可以磷酸化YES相关蛋白(yes-associated protein,YAP),从而调节YAP的核质定位和降解。本文采用CRISPR/Cas9方法构建慢病毒介导的Last1/2基因敲除的载体,通过包装、感染和嘌呤霉素筛选,获得LATS1/2部分敲除的人卵巢癌ES-2和H08910细胞,免疫印迹方法检测LATS1/2表达明显减少。细胞增殖实验检测LATS1/2缺失明显抑制ES-2和HO8910细胞增殖。软琼脂克隆形成实验表明,LATS1/2缺失抑制卵巢癌ES-2细胞的克隆形成能力。细胞划痕和Transwell实验证明,LATS1/2缺失明显抑制卵巢癌ES-2细胞迁移。流式细胞检测发现,LATS1/2敲除促进卵巢癌ES-2细胞凋亡并影响细胞周期。裸鼠成瘤实验表明,LATS1/2缺失明显抑制体内肿瘤组织增殖。分子机制研究表明,LATS1/2敲除促进卵巢癌ES-2细胞中胶原I型α1(collagen type Iα1,ColIα1)基因表达量增加,在卵巢癌ES-2细胞中同时敲除LATS1/2和COL1A1,可以促进细胞克隆形成。综上结果,人卵巢癌ES-2细胞中LATS1/2缺失能促进COL1A1表达增加,从而抑制细胞增殖、转移和克隆形成,并影响细胞周期和促进细胞凋亡。

外泌体miR-574-5P通过下调大肿瘤抑制基因2促进胶质瘤增殖、侵袭和迁移

外泌体可参与肿瘤细胞侵袭、迁移和血管生成等生物学过程,而侵袭是胶质瘤患者死亡的主要原因。研究表明,肿瘤细胞分泌的外泌体能够携带miRNA到受体细胞中,调控受体细胞增殖、迁移和侵袭等生物学功能。miR-574-5P在多种肿瘤发生发展中发挥关键作用,但胶质瘤细胞来源的外泌体是否表达miR-574-5P,以及其在胶质瘤细胞生长和侵袭迁移中的作用未见报道。本研究将探讨胶质瘤细胞来源的外泌体miR-574-5P在细胞增殖、迁移和侵袭过程中的作用机制。运用电镜、纳米粒径跟踪和Western印迹表征外泌体。结果显示,所提取的圆形颗粒是外泌体,直径为30~100 nm;经免疫荧光检测外泌体的内化,结果显示,外泌体内化到LN229细胞中;运用生物信息学和网上数据找出胶质瘤细胞来源的外泌体差异miRNA,结果显示,外泌体差异miRNA为miR-574-5P,并预测大肿瘤抑制基因2(LATS2)可能是miR-574-5P的靶基因;双荧光素酶报告基因结果证实,miR-574-5P与LATS2的3′UTR区互补结合;转染实验、qRT-PCR和Western印迹检测miR-574-5P与LATS2的关系,结果显示,过表达miR-574-5P后,LATS2 mRNA的含量与对照组无显著差异(P>0.05),表明miR-574-5P对LATS2的调控作用通过抑制其翻译实现(P<0.05)。转染实验、CCK-8法、Transwell迁移和侵袭实验,检测miR-574-5P对LN229细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果显示,过表达miR-574-5P可显著促进LN229细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。此外,Western印迹检测信号通路LATS2/YAP关键激酶蛋白质的表达情况,观察外泌体对此信号通路的影响。结果显示,外泌体下调LATS2表达,减少p-YAP磷酸化。综上所述,外泌体miR-574-5P通过靶向下调LATS2,激活LATS2/YAP信号通路,从而促进胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,这可为胶质瘤的诊断和治疗提供一个科学可靠的靶点。

CDX2在十二指肠癌中的表达及生物学功能研究

目的探讨尾侧型同源转录因子2(CDX2)在十二指肠癌中的表达情况及生物学功能。方法收集40例十二指肠癌手术切除石蜡样本,构建组织芯片后通过免疫组织化学法检测CDX2的表达。构建CDX2过表达质粒和靶向CDX2小分子干扰RNA(CDX2-siRNA),转染结肠癌CaCO_(2)细胞和十二指肠癌HuTu-80细胞,实时定量PCR和Western blotting检测转染效率,CCK-8实验检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果CDX2阳性染色主要定位于细胞核,十二指肠癌组织中CDX2的阳性率为65%,低于癌旁非肿瘤组织的84%(P<0.05)。CDX2表达下降后CaCO_(2)和HuTu-80细胞的增殖能力明显增强(P<0.05),CDX2的外源性过表达显著抑制了肠癌细胞的增殖能力(P<0.05)。敲减CDX2后肠癌细胞的迁移能力明显上升,而上调CDX2后肠癌细胞的迁移能力明显下降(P<0.05)。过表达CDX2后G_(0)/G_(1)期细胞比例增加(P<0.05),S期细胞比例减少(P<0.05);而敲减CDX2后G_(0)/G_(1)期细胞比例减少(P<0.05),G_(2)/M期细胞比例增加(P<0.05)。与对照组相比,过表达CDX2后凋亡细胞比例增加(P<0.05),而敲减CDX2后凋亡细胞比例减少(P<0.05)。结论CDX2在十二指肠癌发生发展过程中表达下降或者缺失,发挥了抑癌基因的功能。CDX2或可成为预测十二指肠癌发生、发展和治疗方案选择的重要标志物。

LATS2介导Hippo信号途径调控间充质干细胞生物学行为的实验研究

目的探讨通过大肿瘤抑制因子2(LATS2)介导Hippo信号途径对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)生物学行为的调控效应。方法体外培养C57BL/6小鼠BMSCs,传至第6~7代用于实验。采用慢病毒载体转染分别构建高表达或低表达LATS2的BMSCs模型;根据不同转染试剂设置空白对照组(MSC组)、空载体对照组(MSC-eGFP组)、高表达LATS2组(MSC-LATS2组)、空干扰病毒转染组(MSC-shcontrol组)和干扰LATS2病毒转染组(MSC-shLATS2组)。采用流式细胞仪检测慢病毒转染效率;采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测LATS2及其下游共转录因子磷酸化Yes相关蛋白(p-YAP)、14-3-3的mRNA与蛋白表达;采用茜素红、油红O染色观察BMSCs成骨、成脂分化情况;采用CCK-8细胞增殖检测试剂盒检测BMSCs数量;采用划痕实验及Transwell迁移实验评估Hippo信号途径对BMSCs水平和垂直迁移能力的影响。结果慢病毒载体转染效率高达93.1%~97.1%。MSC-LATS2组LATS2、p-YAP、14-3-3表达均较MSC-eGFP组显著增高〔LATS2 mRNA(2-ΔΔCT):2.55±0.13比1.08±0.05,LATS2/GAPDH:2.63±0.11比1.06±0.08,p-YAP/总YAP:1.67±0.11比1.00±0.04,14-3-3/β-actin:2.22±0.20比0.98±0.06,均P<0.05〕,MSC-shLATS2组均较MSC-shcontrol组显著降低〔LATS2 mRNA(2-ΔΔCT):0.10±0.01比1.01±0.05,LATS2/GAPDH:0.09±0.01比1.05±0.06,p-YAP/总YAP:0.10±0.02比1.10±0.09,14-3-3/β-actin:0.05±0.01比0.90±0.08,均P<0.05〕,说明高表达及低表达LATS2可以活化或抑制Hippo信号途径。光镜下观察显示,MSC-LATS2组诱导成骨、成脂分化后,钙质沉积及脂质颗粒沉积较MSC-eGFP组显著减少,MSC-shLATS2组均较MSC-shcontrol组显著增加,说明高表达及低表达LATS2可抑制或促进BMSCs成骨、成脂分化。MSC-LATS2组BMSCs增殖率较MSC-eGFP组显著下降,MSC-shLATS2组BMSCs增殖率较MSC-shcontrol组显著增高,说明高表达及低表达LATS2可抑制或促进BMSCs增殖。划痕实验和Transwell迁移实验显示,MSC-LATS2组划痕弥合程度较MSC-eGFP组显著减小〔(22.11±3.02)%比(45.99±6.58)%〕,迁移至Transwell小室膜下层细胞数显著减少(个/中倍视野:20.82±3.05比111.33±13.28,均P<0.05);MSC-shLATS2组划痕弥合程度较MSC-shcontrol组显著增加〔(70.32±7.17)%比(39.28±2.98)%〕,而迁移至Transwell小室膜下层细胞数显著增加(个/中倍视野:206.19±30.58比120.10±25.10,均P<0.05),说明高表达及低表达LATS2可抑制或促进BMSCs的水平和垂直迁移能力。结论通过LATS2可介导Hippo信号途径调控BMSCs的分化、增殖和迁移能力。

微小RNA-93靶向大型肿瘤抑制因子2对肾癌细胞GRC-1增殖及凋亡的影响

目的观察微小RNA（miRNA，miR）-93靶向大型肿瘤抑制因子2（LATS2）对肾癌细胞GRC-1增殖及凋亡的影响。方法选取人肾癌细胞GRC-1，双荧光素酶报告基因实验验证miR-93与LATS2的靶向关系。分别转染Neg-miR、pre-miR-93、anti-miR-93至肾癌细胞GRC-1，采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测miR-93表达，Western blot检测LATS2蛋白表达，噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞凋亡。结果miR-93与LATS2存在结合位点。与转染Neg-miR比较，共转染pre-miR-93与LATS2-wt可使GRC-1荧光素酶活性降低（P＝0.000）。与Neg-miR组比较，pre-miR-93组miR-93表达上调，LATS2蛋白表达降低（P＝0.000）；anti-miR-93组miR-93表达降低，LATS2蛋白表达增高（P＝0.000）。与Neg-miR组比较，pre-miR-93组细胞增殖活性增高，同时凋亡率降低（P＝0.000）；anti-miR-93组细胞增殖活性降低，同时凋亡率增高（P＝0.000）。结论miR-93可通过靶向LATS2调控肾癌细胞增殖及凋亡。

口腔鳞状细胞癌中大肿瘤抑制因子2基因的表达及启动子甲基化水平分析

目的 探讨口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）及口腔正常黏膜组织中大肿瘤抑制因子2（large tumor suppressor homolog 2,LATS2）基因表达及其启动子甲基化水平.方法收集2013年9月至2016年10月郑州大学第一附属医院口腔科OSCC患者组织标本,采用反转录PCR、焦磷酸测序法检测72例OSCC及28例正常口腔黏膜组织标本中LATS2基因转录及启动子甲基化情况,蛋白质印迹法检测6例出现LATS2 mRNA低表达且高甲基化患者正常口腔黏膜与OSCC组织中LATS2蛋白表达.结果28例正常口腔黏膜组织均出现LATS2 mRNA表达,而OSCC中LATS2基因mRNA表达率为47％（34/72）.OSCC中LATS2基因mRNA表达与患者肿瘤分化程度、淋巴结转移显著相关（P〈0.05）,与年龄、性别无关（P〉0.05）.焦磷酸测序结果示72例OSCC标本中49例（68％）出现LATS2基因启动子甲基化,且与LATS2基因mRNA的表达显著相关（χ^2=16.980,P〈0.01）,出现LATS2 mRNA低表达且高甲基化的6例患者正常口腔黏膜相邻的OSCC中均出现LATS2蛋白的低表达.结论LATS2基因的甲基化与LATS2基因表达显著相关,LATS2基因甲基化可能是OSCC的一个致病机制.

微小RNA-25靶向大型肿瘤抑制因子2对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响

目的观察微小RNA（miRNA，miR）-25靶向大型肿瘤抑制因子2（LATS2）对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响。方法选取人结肠癌细胞HT29，转染Neg-miR、pre-miR-25、anti-miR-25，采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测miR-25表达，Western blot检测LATS2蛋白表达，噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞凋亡。双荧光素酶报告基因实验验证miR-25与LATS2的靶向关系。结果与Neg-miR组比较，pre-miR-25组miR-25表达上调（0.37±0.08比0.78±0.14）（t=3.871，P=0.028），LATS2蛋白表达降低（157.32±32.11比56.47±11.35） （t=4.012，P=0.026）；anti-miR-25组miR-25表达降低（0.37±0.08比0.11±0.04）（t=4.275，P=0.025），LATS2蛋白表达增高（157.32±32.11比382.74±55.28）（t=4.663，P=0.021）。与Neg-miR组比较，pre-miR-25组细胞增殖活性增高（0.37±0.04比0.48±0.02，0.62±0.05比0.90±0.02，0.89±0.03比1.10±0.04）（t=2.998、3.372、3.012，P=0.045、0.035、0.041），同时凋亡率降低[（8.52±1.11）%比（2.94±0.81）%，t=4.425，P=0.018]；anti-miR-25组细胞增殖活性降低（0.37±0.04比0.30±0.03，0.62±0.05比0.42±0.04，0.89±0.03比0.50±0.05）（t=2.895、3.237、4.002，P=0.048、0.038、0.021），同时凋亡率降低[（8.52±1.11）%比（15.01±2.53）%，t=4.518，P=0.016]。miRNA靶基因预测软件检测结果显示，miR-25能作用于LATS2 3’端非编码区域（3’UTR）。与转染Neg-miR比较，共转染pre-miR-25与LATS2-wt可使HT29荧光素酶活性降低（t=3.285，P=0.033）。结论miR-25可通过靶向LATS2调控结肠癌细胞增殖及凋亡。

myc/bcl-2及myc/p53共表达与弥漫大B细胞淋巴瘤预后的相关性研究

目的 探讨myc/bcl-2和myc/p53共表达与弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）预后的关系.方法 选择山西省肿瘤医院2010年1月至2014年10月有详尽随访记录的DLBCL 148例.运用免疫组织化学（IHC）技术检测石蜡样本myc、bcl-2、p53蛋白的表达.结果 148例DLBCL患者myc、bcl-2和p53阳性表达率分别为35.1%（52/148）、60.1%（89/148）和24.3%（36/148）.myc/bcl-2共表达37例（25.0%）,与Hans分型（χ2=4.749,P=0.029）、国际预后指数（IPI）评分（χ2=4.894,P=0.027）、骨髓侵犯（χ2=4.751,P=0.029）、疗效评价（χ2=9.140,P=0.003）有关;myc/p53共表达17例（11.5%）,与Hans分型（χ2=5.349,P=0.021）、乳酸脱氢酶（LDH）水平（χ2=11.1,P=0.001）有关.单因素分析结果显示,myc[总生存期（OS）：χ2=6.044,P=0.014;无进展生存期（PFS）：χ2=6.212,P=0.013]、bcl-2（OS：χ2=5.812,P=0.016;PFS：χ2=4.878,P=0.027）、p53（OS：χ2=20.092,P＜0.0001;PFS：χ2=18.492,P＜0.0001）、myc/bcl-2共表达（OS：χ2=11.277,P=0.001;PFS：χ2=9.024,P=0.003）、myc/p53共表达（OS：χ2=21.150,P＜0.0001;PFS：χ2=18.655,P＜0.0001）均是影响预后的不良因素.此外,共表达组的生存率比单表达组的生存率更低,myc/p53共表达组生存率低于myc/bcl-2共表达组.多因素分析示,纳入myc、bcl-2、p53、myc/bcl-2、myc/p53及治疗方案6个独立变量,p53表达是影响患者OS（95%CI0.172~0.763,P=0.008）及PFS（95%CI 0.172~0.773,P=0.009）的独立不良预后因素.结论 myc、bcl-2、p53均为DLBCL的不良因素;myc/bcl-2、myc/p53共表达具有协同作用,提示预后更差.

大肿瘤抑制激酶1和大肿瘤抑制激酶2蛋白在胃癌中的表达及其意义

目的探讨大肿瘤抑制激酶1 ( LATS1 )和大肿瘤抑制激酶2 ( LATS2 )蛋白在胃癌组织中的表达水平及其与胃癌发生、发展的相关性:方法收集2008年9月至2010年6月包头市肿瘤医院病理科胃癌组织蜡块93例及相应癌旁正常组织,采用免疫组织化学方法分别检测LATS1和LATS2蛋白在胃癌和癌旁正常组织中的表达。采用χ^2检验比较LATS1和LATS2蛋白在胃癌和癌旁正常组织中表达的差异,分析LATS1和LATS2蛋白表达与患者临床病理特征之间的相关性。结果胃癌组织中,LATS1阴性54例(58.1%),弱阳性15例(16.1%),中等阳性16例(17.2%),强阳性8例(8.6%);癌旁正常组织中,LATS1阴性17例(18.3%),弱阳性16例(17.2%),中等阳性31例(33.3%),强阳性29例(31.2%)。LATS1在胃癌组织中的阳性表达率低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(χ^2= 37.460,P<0.01 )。胃癌组织中,LATS2阴性28例(30.1%),弱阳性17例(18.3%),中等阳性33例(35.5%),强阳性15例(16.1%);癌旁正常组织中.LATS2阴性5例(5.4%),弱阳性7例(7.5%),中等阳性32例(34.4%),强阳性49例(52.7%)。LATS2在胃癌组织中的阳性表达率低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(χ^2 = 38.275,P<0.01 )。LATS1和LATS2蛋白表达与患者年龄、性别及肿瘤淋巴结转移、分化程度、肿瘤直径均无关(均P>0.05);结论LATS1和LATS2蛋白可能参与了胃癌的发生,具有抑制胃癌发生、发展的作用。

弥漫大B细胞淋巴瘤患者蛋白表达检测的预后意义

目的探讨TP53、Bcl-2、Bcl-6、Myc蛋白表达对弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBcL）患者预后的影响。方法回顾性分析223例DLBCL患者的临床资料，对有完整病理资料患者的石蜡标本采用免疫组化法进行TP53、Bcl-2、Bcl-6、Myc蛋白表达检查，并结合临床资料进行预后影响因素分析。结果①223例患者中男133例，女90例，中位发病年龄为56（15～83）岁。所有患者均进行TP53、Myc、Bcl-2、Bcl-6蛋白检测，阳性率分别为39．0％、38．6％、69．1％、56．5％，Myc／Bcl-2双表达22．7％（64／223）；按照Hans分型分类，生发中心起源B细胞亚型（GCB型）占27．4％，non-GCB占72．6％。②进一步分析发现TP53蛋白表达组non—GCB亚型居多（81．6％对66．9％,P=0．021），且与Myc表达存在显著正相关（P〈0．001）。③219例患者获得完整随访资料，中位随访时间为38（2～97）个月，3、5年总生存（OS）率分别为70％、66％。单因素分析结果显示Bcl-6蛋白表达为预后良好因素（P=0．034），TP53高表达（P=0．007）、Myc／Bcl-2双表达（P=0．012）为预后不良因素。多因素分析结果显示TP53高表达（HR=1．848，95％CI 1．025-2．968，P=0．010）及Myc／Bcl-2双表达（HR=1．124，95％C11．134～2．256，P=0．032）为独立预后不良因素。④TP53阳性与阴性组患者3年OS率分别为59％和77％，5年OS率分别为57％和71％，差异均有统计学意义（P值均〈0．05）。结论免疫组化法检测Mye／Bcl-2双表达及TP53高表达能够预测DLBCL患者的预后,Myc／Bcl-2双表达及TP53高表达是DLBCL患者的独立预后不良因素。