大黄鱼性早熟问题的研究I.网箱养殖鱼性腺发育状况

用组织学方法研究了网箱养殖大黄鱼性腺发育的状况。结果表明 ,在所研究的 10个网箱 (养殖期 1a)中 ,其中 6个网箱各有少数大黄鱼卵巢进入大生长期 ,卵母细胞胞质出现卵黄颗粒 ,其余网箱大黄鱼处于小生长期。在雄性 ,全部网箱大黄鱼精巢发育进入Ⅲ～Ⅳ期。根据这些结果 ,我们认为 ,在夏季 7、8月间可能有50 %～ 60 %雌性和 60 %～ 70 %雄性提早性腺成熟。

东南沿海几种经济鱼类肌肉组织学比较研究

采用石蜡组织切片的方法,对大黄鱼(Pseudosciaena crocea)5个品系以及斜带髭鲷(Hapalogenys nitens)、牙鲆(Paralichthys olivaceus)、青石斑鱼(Epinephelus awoara)、尼罗罗非鱼(Tilapia nilotica)和条纹斑竹鲨(Chiloscyllium plagiosum)等鱼类肌肉纤维组织学特性的研究表明:野生大黄鱼与野生养殖品系肌肌肉纤维在组织学上没有明显差异,而雌核发育品系及其杂交后代则相对野生品系表现出显著差异,它们的肌肉纤维更细密;不同种鱼之间肌肌肉纤维在组织学表现出巨大的差异,是与各个种类的遗传特征和生存模式相适应的。

大黄鱼性早熟问题的研究Ⅱ.不同药物对性早熟的影响

本文研究了促性腺激素释放激素类似物和紫萁两种药物对大黄鱼性早熟的影响。结果表明 ,在雌性 ,低和高剂量类似物组与低剂量紫萁组大黄鱼早熟率比对照组分别下降 6 6 %和 33% ,而高剂量紫萁组与对照组之间没有差异 ;在雄性 ,低剂量类似物组和低剂量紫萁组早熟率比对照组下降 37% ,高剂量紫萁组与对照组之间则没有差异。这些结果可为药物防止大黄鱼性早熟提供一条有效的途径。

发酵豆粕对大黄鱼生长、肠道结构及肠道微生物菌群的研究

以鱼粉和小麦蛋白粉为蛋白源,配制成6种等氮等脂(粗蛋白45%;粗脂肪10%)的饲料,研究其对大黄鱼(Larimichthys Crocea)幼鱼生长、肠道组织结构及肠道微生物菌群的影响。这6种饲料是以发酵豆粕分别替代基础饲料(含40%鱼粉)中0(FSM0,对照组)、15%(FSM15)、30%(FSM30)、45%(FSM45)、60%(FSM60)和75%(FSM75)的鱼粉制作而成。经过56d的生长实验,结果表明,饲料中随着发酵豆粕替代比例的升高,各处理组大黄鱼幼鱼(10.49±0.03)g的存活率无显著性差异(P>0.05),但FSM60和FSM75组有下降趋势;相比FSM0组,FSM60和FSM75组的特定生长率(SGR)和增重率(WGR)显著降低(P<0.05),饲料系数(FCR)显著升高(P<0.05);摄食率(FI)FSM 60和FSM 75组显著高于FSM0、FSM15、FSM30和FSM45组(P<0.05)。肠道组织结构研究发现,各处理组肠道组织结构后肠黏膜、皱襞高度、固有膜宽度和杯状细胞个数均无显著性差异(P>0.05)。Illumina-Mi Seq高通量测序技术分析发现,FSM0(TC对照组)、FSM45(TB最佳生长组)和FSM75(TW最差生长组)组Chao1、香农指数(Shannon)、辛普森指数(Simpson)和覆盖率(Good coverage)均无显著性差异(P>0.05);基于门水平,TC、TB和TW组大黄鱼幼鱼肠道优势菌群为厚壁菌门(Firmicutes);而在属水平,类芽孢杆菌(Paenibacillus)占绝对优势。从属水平差异菌属研究发现,发酵豆粕对大黄鱼幼鱼肠道菌群有一定的影响:与最差生长组(TW)相比,最佳生长组(TB)和对照组(TC)均显著增加了类芽孢杆菌(Paenibacillus)和嗜碱菌属(Alkaliphilus)的物种丰度(P<0.05);与TW组相比,TB组水栖菌属(Enhydrobacter)和TC组副球菌属(Paracoccus)的物种丰度均显著降低(P<0.05)。结果表明,发酵豆粕替代鱼粉达45%时对大黄鱼幼鱼的生长、肠道组织结构及肠道优势菌群没有负面影响,即发酵豆粕替代饲料(含40%鱼粉)中45%的鱼粉较为适宜。

玉米蛋白粉替代鱼粉对大黄鱼生长、血清生化指标及肝脏组织学的影响

为探讨玉米蛋白粉替代鱼粉对大黄鱼(Larimichthys crocea)幼鱼生长、血清生化指标及肝脏组织形态的影响,进行了为期56d的养殖试验,探索玉米蛋白粉替代大黄鱼幼鱼饲料鱼粉的适当比例。以初始体重为(10.49±0.03)g的大黄鱼幼鱼为研究对象,用玉米蛋白粉替代基础饲料(含40%鱼粉)0、15%、30%、45%、60%和75%的鱼粉来配制6种等氮(粗蛋白含量45%)等脂(粗脂肪含量10%)的实验饲料,分别标记为C0、C15、C30、C45、C60、C75组。除C0以外的替代组分别添加了适量的晶体氨基酸(赖氨酸和蛋氨酸)。结果表明,玉米蛋白粉替代水平对大黄鱼幼鱼存活率、试验鱼特定生长率、饲料系数均无显著性差异(P>0.05)。C45和C60组肌肉粗蛋白含量显著高于C0组(P<0.05),肌肉粗脂肪含量C45组显著高于C0、C15和C75组(P<0.05),C45、C60和C75组肌肉水分显著低于C0组(P<0.05),全鱼粗蛋白、粗脂肪、水分含量无显著差异(P>0.05);灰分含量有上升趋势,C75组显著高于其他组(P<0.05)。各替代组的血清白蛋白、白球比、谷草转氨酶、葡萄糖均无显著性差异(P>0.05);随着替代比例的升高,总胆固醇有降低的趋势,除C15组与C0无显著性差异外(P>0.05),4组均显著低于CO组(P<0.05);实验探讨替代后对鱼的影响,C75组血清总蛋白和球蛋白含量显著低于C0组(P<0.05);C75组血清谷草转氨酶含量显著高于C0(P<0.05)。各处理组总抗氧化能力、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化氢酶均没有显著性影响(P>0.05),但替代组总抗氧化能力含量均高于C0;丙二醛在C75组显著高于C0组(P<0.05)。通过肝组织学观察表明,当替代比例高于45%时,呈现肝细胞核偏位、胞浆内脂肪滴较多、细胞透明空泡化等症状。综上所述,在实验条件下,研究认为玉米蛋白粉替代鱼粉对大黄鱼幼鱼的适宜添加量为45%。

大豆浓缩蛋白替代鱼粉对大黄鱼幼鱼生长、体成分、血清生化指标及肝组织学的影响

为探索大豆浓缩蛋白(SPC)替代鱼粉水平对大黄鱼(Larimichthys crocea)幼鱼生长、体成分和血清生化指标以及肝组织学的影响。以初始体重为(10.50±0.04)g的大黄鱼幼鱼为研究对象,用SPC替代基础饲料(含40%鱼粉)0%(FM)、25%(R25)、50%(R50)、75%(R75)、100%(R100)的鱼粉制作成5种等氮(粗蛋白水平为45%)等脂(粗脂肪水平为10%)的实验饲料。各实验组以对照组(FM)饲料蛋氨酸、赖氨酸含量为基准,分别添加适量的晶体赖氨酸和蛋氨酸。养殖实验在浙江省象山县西沪港区进行,每个处理随机分配3个网箱(1.5 m×1.5 m×2 m),每个网箱放养60尾,养殖周期为56 d。结果表明,与对照组相比(FM),SPC替代鱼粉水平对大黄鱼幼鱼的增重率(WGR)、特定生长率(SGR)、存活率(SR)以及饲料系数(FCR)没有显著影响(P>0.05);肌肉粗蛋白和全鱼粗蛋白无显著差异(P>0.05),肌肉粗脂肪和全鱼粗脂肪含量随替代比例的增加有下降的趋势,均以R100组含量最低,肌肉水分含量和全鱼水分有上升的趋势;血清各项指标没有显著性差异,但血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量有下降趋势,以R100组含量最低;血清胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)的含量呈现出先升高后下降的趋势。从肝组织学观察中发现,SPC替代水平超过75%会对肝细胞产生损伤,引起肝细胞空泡化,脂肪堆积加重,肝细胞核逐渐溶解或缺失。综上所述,在本研究条件下,SPC替代饲料75%的鱼粉,不会对大黄鱼幼鱼的生长造成负面影响。

大黄鱼性腺原代细胞培养技术的建立

为建立大黄鱼精巢和卵巢组织的原代细胞培养技术,获得单层的性腺原代细胞,采用组织块贴壁法,对来源于大黄鱼的卵巢和精巢组织的细胞进行原代培养,并使用0.25%胰酶消化法尝试传代培养。在26℃条件下,添加20%胎牛血清,在100 IU/mL青霉素(Penicillin)和100μg/mL硫酸链霉素(Streptomycin)的DMEM/F-12(HAM)1∶1培养基中培养大黄鱼卵巢和精巢组织的细胞。结果显示:1)大黄鱼卵巢组织在贴壁后第4天成纤维细胞开始迁出,呈辐射状生长;贴壁后第6天迁移出上皮样细胞,呈“铺石路”状生长;贴壁后第17天左右出现不同程度贴壁抑制。2)大黄鱼精巢组织在贴壁后第5天迁出成纤维细胞;第9~17天,部分成纤维细胞呈长梭形涡旋状生长,部分呈三角形均匀分布增殖;贴壁后第18天左右部分细胞空泡化严重。3)在培养后第8天对卵巢和精巢组织原代细胞进行胰酶消化传代培养,传代培养第2天部分细胞贴壁分裂增殖,传代培养3 d后可进行第二次传代,第二次传代后细胞长势变缓,细胞空泡化加快。