表面增强拉曼光谱法灵敏检测鸡肉中拉沙洛西残留

为提高鸡肉中抗球虫类兽药拉沙洛西(LAS)残留的监控检测效率,本研究利用表面增强拉曼光谱(SERS)技术建立了LAS残留的灵敏检测方法。本研究首先制备不同粒径的金纳米粒子(AuNPs),根据SERS增强效果选择最优粒径AuNPs作为基底,并利用4-氨基苯硫酚(PATP)作为探针分子评估AuNPs基底重现性;然后通过添加HNO_(3)改变AuNPs聚集程度并增大LAS溶解度,进一步增强SERS信号;最后通过建立标准曲线并进行鸡肉样品加标回收试验对方法进行评价。结果表明,粒径40 nm的AuNPs增强效果较好,1118 cm^(-1)处为LAS的SERS特征峰,基底具有良好的重现性,HNO_(3)最优添加浓度为0.5 mol/L。本方法的线性范围为0.55×10^(-6)~0.55mg/mL,检测限为0.23ng/mL,鸡肉样品的加标回收率为91.9%~107.3%,相对标准偏差为3.6%~5.7%,与国标法(GB31613.5-2022)的检测结果一致。本研究为LAS残留的灵敏检测提供了新方法,对于其他兽药残留的SERS检测方法研究具有参考价值。

动物源性食品中拉沙洛西钠检测方法综述

本文对动物源性食品中拉沙洛西钠检测方法进行研究,对酶联免疫吸附法、高效液相色谱法、超高效液相色谱-串联质谱法等检测技术进行了阐述,重点分析了这三种方法的优势和劣势,并对超高效液相色谱-串联质谱法进行了重点介绍,同时也对拉沙洛西钠的发展前景进行了展望,为我国食品安全检测拉沙洛西钠的残留量提供检测技术方面的参考。

10株柔嫩艾美耳球虫对四种药物的抗药性检测

从4省市10个鸡场分离到10株柔嫩艾养耳球虫，使用AA肉鸡按每只鸡接种10万卵囊，对马杜霉素、百球清、盐霉素和拉沙里菌素的敏感性进行了测试。依照最适抗球虫活性百分率、相对卵囊产量和病变记分减少率3项指标，检测结果显示：30％虫株对马杜霉素和百球清有抗药性，40％虫株对拉沙里菌素有抗药性，70％虫株对盐霉素有抗药性，80％虫株对两种或两种以上的药物有抗药性。虫株的抗药谱带有明显的地方性。此外，对抗药虫株的鉴定标准进行了讨论。

拉沙里菌素单克隆抗体的研制及间接竞争ELISA检测方法的建立

为制备拉沙里菌素(LAS)单克隆抗体,建立针对LAS的间接竞争ELISA(Ci-ELISA)方法,试验采用了活性酯法将LAS分别与BSA和OVA偶联成LAS-BSA和LAS-OVA作为免疫原和检测原,6次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,最终筛选出一株能稳定分泌抗LAS单克隆抗体的杂交瘤细胞株C11。经鉴定,C11的抗体类型为Ig G1,轻链为κ链;所制腹水效价为1∶16 000,与莫能菌素钠、盐霉素钠、马杜霉素胺、头孢噻吩钠和硫酸链霉素均无交叉反应。用此单克隆抗体建立LAS Ci-ELISA检测方法显示,Ci-ELISA标准工作曲线为y=0.376x-0.2374(R2=0.9914),LAS在5~1 000 ng/m L时,线性关系良好,IC50为90.22 ng/m L,加标回收率为81.76%~102.41%,表明方法精确度好、灵敏度高。LAS单克隆抗体的制备和Ci-ELISA方法的建立为下一步试剂盒的研发奠定了基础。

柔嫩艾美耳球虫拉沙里菌素抗性虫株的实验室诱导

采用实验室建立抗性虫株的方法，用４０、６０、７５、１０５、１２５、１３５μｇ／ｇ梯度的拉沙里菌素作用于柔嫩艾美耳球虫盐霉素敏感株和盐霉素抗性株，经过１５次继代，诱导产生了对１３５μｇ／ｇ拉沙里菌素的抗药性虫株。在同一诱导条件下，盐霉素敏感株和盐霉素抗性株对拉沙里菌素产生抗药性的时值和强度没有差异。

甜菜碱对聚醚类抗生素抗球虫药的增效作用

从中国广东分离的柔嫩艾美耳球虫（Ｅｉｍｅｒｉａｔｅｎｅｌｌａ）野外抗药株深圳（ＳＺ）株，分别对３种聚醚类抗生素－马杜拉霉素、盐霉素、拉萨里霉素及它们与甜菜碱同时使用的药效情况进行试验。结果发现，添加甜菜碱可提高聚醚类抗生素组的增重，特别是甜菜碱加马杜拉霉素组增重最明显，而对病变记分和卵囊数量无明显影响。

球安等药物抗Eimeria tenella的效力

将 1日龄罗曼公雏于无球虫条件下饲养至 1 3日龄时随机分组 ,按组分别投予球安 ( Avatec,含 2 5 % L asalocid) 1 2 5 mg/ kg。球佳 (含 2 % Diclazuril) 1 mg/ kg,加福( Cygro,含 1 % Maduramycin) 5 mg/ kg和球净 ( Necoxine,含 2 5 % Nicabazine和 1 .6 %Ethopabata) 1 2 5 mg/ kg,并设立不给药不感染、不给药感染对照组。给药后第 3d,除不给药不感染对照组的鸡只外 ,其余全部试验鸡每只分别接种 E.tenella孢子化卵囊 1× 1 0 5个 ,根据各组鸡的存活率、相对增重率、盲肠病变计分、血便记分和抗球虫指数对 4种药物进行药物疗效判定。试验结果表明 :球安、球佳为高效抗球虫药 ,其存活率都达 1 0 0 % ,相对增重率分别为 1 0 3.1 2 5和 92 .5 ,平均血便记分为 0 .0 2和 0 .0 1 ,病变值 8.75和 6 .75 ,抗球虫指数 1 89.375和 1 80 .75 ;而加福和球净虽对雏鸡保护率为 1 0 0 % ,但血便和肠组织病变严重 ,抗球虫指数仅为 99.2 5和1 0 5 .75 ,表明抗球虫无效。

柔嫩艾美尔球虫野外株对3种聚醚类离子载体抗生素的敏感性试验

采用鸡体药效试验法测定了柔嫩艾美尔球虫对３种聚醚类离子载体抗生素的敏感性。试验证明，柔嫩艾美尔球虫野外分离株对盐霉素（６６×１０－６）、莫能菌素（１２０×１０－６）和拉沙菌素（１２５×１０－６）产生了耐药性。上述３种药物的抗球虫指数（ＡＣＩ）分别为１４９．３９、１３４．０４和１５６．１１。

鸡肝组织中拉沙洛西钠残留的高效液相色谱检测方法

建立了鸡肝组织中拉沙洛西钠残留的高效液相色谱检测方法。甲醇提取鸡肝组织样品中残留的拉沙洛西钠 ,硅胶柱净化 ,以磷酸盐缓冲液 乙腈 甲醇作为流动相 ,反相高效液相色谱-荧光检测法检测。方法平均回收率为 82 .1 % ,平均变异系数为 7.75 % ,方法的检测限为 0 .0 2mg/kg。

柔嫩艾美尔球虫(永川株)对四种球虫药的敏感性试验

为了测定柔嫩艾美尔球虫（永川株）对四种抗球虫药物（尼卡巴嗪、麦杜拉霉素、拉沙菌素、地地珠利）的敏感性进行了本试验。通过计算各药物组的最适抗球虫活性百分率（ＰＯＡＡ）、病变记分 减少率（ＲＬＳ）、相对盲肠卵囊产量（ＲＯＰ）及抗球虫指数（ＡＣＩ）。综合四项指标，判定结果为：Ｅｉｍｅｒｉａｔｅｎｅｌｌａ（永川株）对地克珠利高度敏感，对拉沙菌素有轻度抗药性，对麦杜拉霉素有中度抗药性，对尼卡巴嗪有严重抗药性。

甜菜碱与三种抗球虫药配伍的增效比较试验

为研究甜菜碱与抗球虫药物配伍抗球虫病的增效作用,进行了疗效比较试验。用甜菜碱(8×104)分别与球安(125×106)、加福(5×105)和球佳(1×106)配伍的3组药物拌入饲料,治疗人工感染E.tenella的鸡,结果各组的平均体增重分别为83.6g、61g和37.5g;盲肠病变值为5.8、8.0和10;ACI为193.7、158.35和126.875。而单用球安、加福和球佳拌料喂的鸡平均体增重分别为82.6g、42g和74g;盲肠病变值8.75、13.25和6.75;ACI为189.375、99.75和180.75。试验表明:甜菜碱加聚醚类抗球虫药组的平均体增重和ACI值均高于单用药组,尤其甜菜碱加加福组增效显著,但甜菜碱加球佳组疗效却降低。

三种药物防治奶牛球虫病试验

目的 为考察现有抗球虫药物对奶牛球虫病的防治效果。方法 选用应用较广的3种抗球虫药物（地克珠利、拉沙里菌素、莫能菌素）对1～6月龄球虫感染阳性奶牛进行防治试验。将34头球虫感染阳性奶牛分为4组，地克殊利组9头，按体重0．5mg／kg．BW每天口服1次；拉沙里菌素组9头，按360mg／头每天口服1次；莫能菌素组8头，按1mg／kg．BW每天口服1次；不用药物对照组8头。连续用药10d，停药后再观测10d，每3d直肠采集粪便检测球虫1次，以每克粪便球虫卵囊数（OGP）为试验指标。结果 用药9d后的OPG与用药前相比，地克珠利组下降了78．9％，拉沙里菌素组下降了80．92％，莫能菌素组下降了98．81％。停药3～6d后，地克珠利和拉沙里菌素组的OPG上升较快，而莫能菌素组的OPG保持较低水平。结论 3种抗球虫药对奶牛球虫病均有防治效果，其中莫能菌素最好，拉沙里菌素和地克珠利次之。

柔嫩艾美尔球虫(荣昌株)对球佳等三种抗球虫药的抗药性试验

采用鸡体药效试验法测定了柔嫩艾美尔球虫对球佳、球安、加福三种药物的抗药性。试验结果表明：球佳、球安、加福的最适抗球虫活性百分率（poAA）分别为58．po％、78．23％、叨．27％；病变记分减少率（RLS）为100％、72。73％、74．03％；相对盲肠卵鲢产量（ROP）为限26％、577.6％。288．6％。POAA‘PLS显示柔嫩艾美尔球虫对三种药物均无抗药性，而ROP显示对球安、加福有抗药性。综合POAA、RLS、ROP三项参数指标判定柔嫩艾美尔球虫对球佳敏感，对球安、加福有轻度抗药性。

蜂蜜中聚醚类抗生素的一次性快速检测方法研究

研究建立了高效液相色谱串联荧光检测器和二极管阵列紫外可见检测器,并配置柱后衍生系统,一次性快速测定蜂蜜样品中莫能菌素、盐霉素、甲基盐霉素和拉沙洛菌素药物残留。在各聚醚类抗生素浓度5~100(拉沙洛菌素:80)μg/mL范围内,检测峰面积和浓度呈良好线性关系。回收率试验:在空白蜂蜜中添加莫能菌素、盐霉素、甲基盐霉素和拉沙洛菌素浓度分别为5、20、60μg/mL时,总体平均回收率为73%~99%,变异系数为0.2%~1.52%。最低检测限为2.5μg/mL。方法简单、快速、准确。

柔嫩艾美耳球虫对四种抗球虫药的交叉抗药性试验

为了测试柔嫩艾美耳球虫的４种抗药虫株（抗地克珠利、抗拉沙里菌素、抗盐霉素和抗克球粉虫株）对４种抗球虫药（地克珠利、拉沙里菌素、盐霉素和克球粉）的敏感性进行了本试验。结果表明：柔嫩艾美耳球虫地克珠利抗药虫株对拉沙里菌素、盐霉素和克球粉均表现敏感，拉沙里菌素抗药虫株、盐霉素抗药虫株和克球粉抗药虫株对地克珠利也表现为高度敏感，因此，柔嫩艾美耳球虫对地克珠利与拉沙里菌素、地克珠利与盐霉素、地克珠利与克球粉３组药物不存在交叉抗药性。

三种聚醚类抗生素促进育肥肉牛增重的比较试验

将30头平均体重为435.8kg的夏洛来牛×南阳牛F1分为三组,在饲喂麦秸、啤酒糟和日补精料6.14kg的条件下,分别添加莫能菌素、沙拉里菌素和盐霉素进行饲养试验。结果,莫能菌素、沙拉里菌素和盐霉素组的平均日增重分别为1.20、1.07、1.11kg/d;料重比分别为5.13:1、5.75:1和5.52:1;单位增重的增重剂成本分别为0.073元,0.064元和0.145元。

山羊瘤胃给饲蛋氨酸和拉沙里菌素对血液指标的影响

采用3只装有永久性瘤胃瘘管的萨能母山羊为试验动物,试验分为4期,每期6d,每期为一个处理。对照组:基础日粮;处理Ⅰ:基础日粮+15g蛋氨酸;处理Ⅱ:基础日粮+15g蛋氨酸+0.15g拉沙里菌素;处理Ⅲ:基础日粮+15g蛋氨酸+0.20g拉沙里菌素。每期的最后一天为血样的采样日,采样日的采样时间点为3个,即当日早晨饲喂前(0h)、饲喂后2h和5h。血样经处理后,测定样本中血浆游离蛋氨酸(PFM)的含量和有关酶的活性。试验结果表明:不同处理之间,在0h处理Ⅲ的谷氨酸脱氢酶(GLDH)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)活性显著高于对照组(P<0.05),谷草转氨酶(GOT)极显著低于对照组(P<0.01),谷丙转氨酶(GPT)活性极显著高于对照组(P<0.01),处理ⅡGOT活性极显著低于对照组和处理Ⅰ(P<0.01);在2h处理ⅡGGT活性显著低于处理Ⅲ(P<0.05),极显著低于处理Ⅰ(P<0.01),处理ⅢGPT活性显著高于处理Ⅱ(P<0.05),极显著高于对照组和处理Ⅰ(P<0.01);在5h处理ⅠGGT活性显著高于处理Ⅱ(P<0.05),处理ⅢGPT活性极显著高于对照组(P<0.01),处理Ⅰ的PFM水平在0、2、5h均极显著高于对照组、处理Ⅱ和处理Ⅲ(P<0.01);不同处理内,处理Ⅰ的0hGGT活性显著低于2、5h(P<0.05),5h的PFM水平显著高于0、2h(P<0.05),处理Ⅲ的5hGGT活性低于0h(P<0.05)。

几种抗球虫药防治鸡盲肠球虫病的疗效试验

试验对鸡人工接种Etenella孢子化卵囊，在饲料中添加加福、球安、球必清和氯苯胍以比较其防治球虫病的疗效，结果表明：加福、球必清和球安显示有良好的抗球虫效果，对雏鸡的保护率为100％，抗球虫指数（ACI）分别为厂8．27，178．90和168．35；而氯苯胍对球虫病的疗效很差，保护率为25％，抗球虫指数31．98．表明球虫已对氯苯胍产生严重的抗药性。因此，在临床治疗时不宜再选用氯苯胍．可选用聚醚类和苯乙腈类的高效抗球虫药。

响应面法优化聚醚类抗生素拉沙里菌素的发酵条件

目的为了提高拉沙里链霉菌Streptomyces lasaliensis产拉沙里菌素的发酵水平,利用响应面法对其发酵条件进行优化。方法用Plackett-Burman实验对影响发酵水平的9个主要因素进行显著性评价,筛选出3个显著因素,再选取最陡爬坡法逼近最佳响应面区域的发酵条件,通过CCD中心组合实验以及响应面分析,确定最优发酵条件。结果优化后,最佳培养条件为葡萄糖6.26g/L、糊精28.75g/L、p H 5.58,最佳产量为393.121mg/L。结论在此优化条件下,拉沙里菌素的产量提高了1.18倍。

4种饲料及1种饲料添加剂中拉沙洛西钠的高效液相色谱检测方法优化

研究旨在开发能够广泛应用于多种饲料中拉沙洛西钠的检测方法,以期能满足现阶段我国对饲料中此药使用的安全监控需要。以我国现行有效饲料中拉沙洛西钠检测的标准方法和美国分析化学学协会(AOAC)官方标准方法为基础进行方法优化,获得实际应用能力更优的检测程序,并进一步考察方法优化后对各种类型的饲料中拉沙洛西钠含量分析的可行性。方法优化后,采用酸化甲醇涡动提取并稀释,以C18色谱柱和流动相为125 mmol/L醋酸铵溶液-甲醇(15+85,V/V)进行分离,利用荧光法检测。该方法操作简单、灵敏度高、准确度高、重复性好,能够满足多种饲料和饲料添加剂样品中拉沙洛西钠的检测要求。