壳多糖抑制兔主动脉平滑肌细胞增殖机制的探讨

目的 :探讨壳多糖抑制平滑肌细胞 (SMC)增殖的作用机制。方法 :通过随机引物法标记 c- m yc探针 ,应用 Northern印迹技术 ,观察壳多糖对小牛血清 (NBS)刺激的兔主动脉 SMC c- m yc m RNA表达的影响。结果 :当 NBS刺激血管 SMC 2 4h后 ,c- m yc m RNA表达较对照组明显增高 ;当壳多糖与 NBS合用时 ,c- m yc m RNA表达较 NBS组明显降低。结论 :壳多糖有可能通过抑制 NBS刺激的血管 SMC c- m yc m RNA的表达而达到抑制血管

天然和氧化修饰型LDL、VLDL及HDL对培养人动脉平滑肌细胞原癌基因fos及myc表达的影响

动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）是动脉粥样硬化（ＡＳ）斑块中的主要细胞，它的增殖在ＡＳ形成过程中极其重要。脂蛋白和氧化修饰型脂蛋白对ＳＭＣ增殖的影响以及ＳＭＣ增殖与原癌基因异常表达的关系是当前ＡＳ发病机制研究的热点之一。我们在建立人主动脉ＳＭＣ体外培养方法的基础上，观察了ＬＤＬ，ＶＬＤＬ及ＨＤＬ和相应的氧化修饰型脂蛋白对培养人ＳＭＣｆｏｓ，ｍｙｃ，ｅｒｂ－Ｂ原癌基因转录表达的影响。结果表明：①ＨＤＬ对ＳＭＣｆｏｓ，ｍｙｃ基因表达无影响；②ＬＤＬ和ＶＬＤＬ有使这些基因表达增加的趋势，但与对照比较差异不显著（Ｐ＞０．０５）；③ＯＸ－ＶＬＤＬ，ＯＸ－ＶＬＤＬ和ＯＸ－ＨＤＬ有使ＳＭＣｆｏｓ，ｍｙｃ基因表达显著增强的作用（Ｐ＜０．０１），且其作用较相应的天然脂蛋白大（Ｐ＜０．０１）．上述结果说明：ＬＤＬ，ＶＬＤＬ，ＯＸ－ＬＤＬ，ＯＸ－ＶＬＤＬ和０Ｘ－ＨＤＬ的致ＡＳ作用可能与刺激ＳＭＣｆｏｓ和ｍｙｃ癌基因表达增加有关。

大鼠颈动脉气囊导管损伤早期原癌基因c-Fos、c-Jun的表达研究

目的：采用ＲＴ－ＰＣＲ方法研究动脉损伤早期原癌基因ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ的表达规律；方法：制备大鼠颈动脉气囊导管扩张损伤模型，采用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测损伤早期不同时相点动脉壁平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ基因的表达丰度，同时采用免疫组化方法观测ｃ－ｆｏｓ蛋白的表达。结果： ｃ－ｊｕｎ在损伤后３０ｍｉｎ达高峰。术后１ｈ、２ｈ仍能检测到明显的表达，术后５ｈ后不能检出。ｃ－ｆｏｓ在术后３０ｍｉｎ、１ｈ均可检测到该基因多量的表达，以后随时间的推移表达逐渐下降，５ｈ时不能检出。损伤后４５ ｍｉｎ中膜残留ＶＳＭＣ ｃ－ｆｏｓ蛋白表达阳性，阳性率８６％。结论：在动脉损伤后极早期即有ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ的大量表达，ＲＴ－ＰＣＲ检测原癌基因的表达为研究动脉损伤早期ＶＳＭＣ的活化机理提供了一个的敏感方法。

1．06μm激光血管成形术后动脉平滑肌细胞中的癌基因表达

通过建立兔腹主动脉粥样硬化性狭窄模型进行１．０６μｍ激光血管成形术（ＬＡ），应用系列癌基因片段与地高辛－ｄＵＴＰ随机插入标记，进行血管组织的原位杂交。发现：（１）ＬＡ后血管壁可见ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ、Ｃ－ｍｙｃ和Ｎ－ｒａｓ等癌基因表达；（２）癌基因表达多位于血管斑块中的ＳＭＣ；（３）ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ表达迅速而短暂，ｃ－ｍｙｃ和Ｎ－ｒａｓ表达较迟，持续时间较长。结论：激光损伤可诱导动脉ＳＭＣ中的某些癌基因表达。

激光血管成形术后血管的形态学变化

用腹主动脉内膜球囊损伤造成狭窄≥50％的日本大耳白兔50只进行激光血管成形术(LA),术后3、7、14、21、28、35、42、49、56和63天血管取材切片作病理变化分析。结果:LA后14天,血管平滑肌细胞(SMC)出现增殖,动脉中层SMC向内层迁移;LA后28天,内膜层SMC增殖最为明显,并导致血管再狭窄;内膜层SMC表型与合成型SMC相似;LA后35天,内膜层增厚速度降低。结论:实验性LA后SMC增殖反应呈一动态过程,与球囊血管成形术后再狭窄的病理变化大致相同,故本实验模型适于LA后血管再狭窄机制的研究。

原癌基因c-myc核酶表达载体抑制血管平滑肌细胞的c-myc表达

目的构建原癌基因c-myc核酶表达载体以抑制心血管系统细胞异常增殖。方法采用DNASIS软件对大鼠c-mycmRNA进行二级结构和最低自由能分析,确定第4600位核苷酸作为核酶的切割位点,设计并合成c-myc核酶。通过体外切割实验证明该核酶的有效性。进一步构建成c-myc核酶表达载体,转染同步化血管平滑肌细胞(VSMC)以检测其对原癌基因c-myc表达的影响。结果体外切割实验显示该核酶能有效地将85bp的模板切割成60和25bp的二个片段。所构建载体经酶切法和基因测序法证明其序列的正确性。转染VSMC后能有效抑制血管紧张素Ⅱ诱导的c-myc的表达。结论c-myc核酶表达载体能有效抑制VSMC的c-myc过度表达,适合用于动脉增殖性疾病的基因治疗。

牛磺酸抑制激光血管成形术后体外培养的平滑肌细胞增殖和癌基因c-fos、c-myc的表达

本文在兔腹主动脉粥样硬化模型上，行激光血管成形术（ｌａｓｅｒａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ，ＬＡ），用体外培养的血管平滑肌（ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌ，ＶＳＭＣ）３Ｈ－ＴｄＲ掺入和癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达的测定，观察了牛磺酸对血管损伤后腹主动脉ＶＳＭＣ增殖的影响。结果显示：牛磺酸（３×１０－６～５×１０－３ｍｏｌ／Ｌ）能抑制体外培养ＶＳＭＣ３Ｈ－ＴｄＲ掺入，呈剂量依赖关系，５×１０－３ｍｏｌ／Ｌ抑制血清诱导ＶＳＭＣ中的ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ基因表达。