LncRNA MIAT、LASP1蛋白在甲状腺癌组织中的表达及与预后的相关性

目的探讨长链非编码RNA心肌梗死相关转录本(LncRNA MIAT)、LIM和SH3蛋白1(LASP1)蛋白在甲状腺癌组织内的表达水平及与预后的关系。方法选取63例甲状腺癌患者,收集其癌组织、癌旁正常组织,测定LncRNA MIAT、LASP1蛋白表达水平,并进行对比分析;同时分析LncRNA MIAT、LASP1蛋白表达与甲状腺癌患者临床病理特征的关系;另随访3年,分析LncRNA MIAT、LASP1蛋白表达与甲状腺癌患者预后的关系。结果癌组织LncRNA MIAT相对表达量与LASP1蛋白阳性表达率均高于癌旁正常组织,有统计学差异(P<0.05)。LncRNA MIAT、LASP1蛋白表达与甲状腺癌患者的淋巴结转移、临床分期有关,有统计学差异(P<0.05);LncRNA MIAT高表达、LASP1蛋白阳性表达患者的3年生存率低于LncRNA MIAT低表达、LASP1蛋白阴性表达患者,有统计学差异(P<0.05)。结论LncRNA MIAT、LASP1蛋白在甲状腺癌组织中表现为高水平,其表达水平与患者临床分期、淋巴结转移有关,且表达水平越高,患者预后越差。

LASP1基因对人结直肠癌LOVO细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制

目的探讨LASP1基因表达对人结肠癌(LOVO)细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响及其作用机制。方法分别构建LASP1过表达质粒和LASP1干扰质粒转染LOVO细胞,qRT-PCR验证LASP1mRNA转染结果。MTT法、Tunel染色分别检测细胞增殖活性和细胞的凋亡情况,细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。Westernblot测定细胞LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达。结果质粒转染成功。LASP1过表达的LOVO细胞的增殖、迁移和侵袭能力增加,细胞凋亡率降低,细胞中LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达升高(P<0.01)。而敲减LOVO细胞中LASP1的表达后,细胞增殖、迁移和侵袭能力减弱,细胞凋亡率增加,细胞中LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达降低(P<0.01)。结论LASP1可正向调控FAK/AKT信号通路,促进LOVO细胞的增殖、迁移以及侵袭能力。

脑胶质瘤病人血清LASP1、ZBTB20水平变化及其诊断价值

目的:观察脑胶质瘤病人血清含LIM和SH3结构域蛋白1(LASP1)、锌指和BTB结构域蛋白20(ZBTB20)水平变化,并探讨血清LASP1、ZBTB20水平对脑胶质瘤的诊断价值。方法:选取2017年6月—2020年3月沧州市人民医院神经外科收治的67例脑胶质瘤病人作为研究组,采集病人入院后及术后7 d静脉血,收集病人的临床资料,另选取同期在我院体检的60名健康体检者作为对照组,采集静脉血,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清LASP1水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测血清ZBTB20水平;采用Pearson相关性分析法分析LASP1与ZBTB20表达的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LASP1、ZBTB20水平对脑胶质瘤的诊断价值。结果:研究组病人血清LASP1、ZBTB20水平明显高于对照组(P<0.001),术后7 d病人血清LASP1、ZBTB20水平明显低于术前(P<0.001)。Pearson相关性分析结果显示,脑胶质瘤病人血清LASP1与ZBTB20水平呈正相关(r=0.263,P=0.031)。血清LASP1、ZBTB20及二者联合诊断脑胶质瘤的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.770,0.859,0.904,敏感度分别为76.12%、77.61%、74.63%,特异度分别为68.33%、83.33%、95.00%,二者联合诊断的效能优于各自单独诊断(Z=3.643,P<0.001;Z=2.129,P=0.003)。结论:脑胶质瘤病人血清LASP1、ZBTB20水平显著上调,二者联合检测对脑胶质瘤具有较高的诊断价值。

基于LASP1、CXCR1探析全真一气汤对COPD大鼠的炎症反应和免疫功能的影响

目的:观察全真一气汤对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织LASP1和CXCR1表达的影响,探析全真一气汤对COPD的炎症反应和免疫功能的影响。方法:将18只SD大鼠随机分为中药组和模型组,每组各9只。利用烟熏联合内毒素脂多糖(LPS)构建COPD大鼠模型。模型组每日予0.9%生理盐水灌胃;中药组每日予40%全真一气汤浓缩汤剂灌胃。利用PCR技术检测大鼠肺组织LASP1和CXCR1mRNA水平的变化,Western blot检测大鼠肺组织LASP1和CXCR1蛋白水平的变化。结果:中药组LASP1 mRNA表达丰度为模型组的0.145倍;中药组CXCR1 mRNA表达丰度为模型组的0.614倍。与模型组相比,中药组LASP1、CXCR1蛋白表达水平均显著降低。结论:全真一气汤能通过下调LASP1和CXCR1基因及蛋白的表达,改善COPD大鼠炎症微环境,这可能是其降低COPD引起肺癌发生风险的潜在机制之一。

丰富环境通过上调海马LASP1改善父系应激致子代小鼠焦虑抑郁样行为

目的探索丰富环境(environmental enrichment,EE)在父系应激致子代焦虑、抑郁样行为中的作用及其可能机制。方法给予雄性C57BL/6小鼠(F0)慢性温和不可预知应激(unpredictable chronic mild stress,UCMS),随后与正常雌鼠交配获得F1子代(F1-UCMS)小鼠。在F1-UCMS子代小鼠幼年期(3~5周龄)分别给予标准环境(standard environment,SE)和丰富环境(EE)干预,成年后(8周龄)采用旷场实验(open field test,OFT)、高架十字迷宫实验(elevated plus-maze test,EPM)检测小鼠焦虑样行为,采用强迫游泳实验(forced swimming test,FST)、糖水偏好实验(sucrose preference test,SPT)检测小鼠抑郁样行为。通过实时荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting)检测成年F1-UCMS小鼠海马LIM和SH3结构域蛋白1(LIM and SH3 domain protein 1,LASP1)的表达。结果与正常父系的F1子代(F1-Nor)相比,应激父系的F1子代F1-UCMS小鼠在OFT的中央区域停留时间百分比减少、EPM的开放臂停留时间百分比减少(P均<0.05),表现出明显焦虑样行为;F1-UCMS组小鼠在FST的不动时间百分比增加、SPT的糖水消耗百分比减少(P均<0.01),表现出明显抑郁样行为。与SE组相比,EE组小鼠在OFT的中央区域停留时间百分比增加[雄性:(7.44±0.75)%vs.(14.93±1.74)%,P<0.01;雌性:(8.89±1.06)%vs.(15.10±1.82)%,P<0.05]、EPM的开放臂停留时间百分比增加[雄性:(8.09±1.05)%vs.(14.15±1.88)%,P<0.05;雌性:(9.13±1.14)%vs.(14.04±1.37)%,P<0.05],表明EE改善父系应激导致的F1-UCMS小鼠焦虑样行为;EE组小鼠在FST的不动时间百分比减少[雄性:(58.63±4.51)%vs.(42.15±3.81)%,P<0.05;雌性:(57.96±4.19)%vs.(43.25±4.22)%,P<0.05]、SPT的糖水消耗百分比增加[雄性:(50.38±3.47)%vs.(70.39±3.12)%,P<0.01;雌性:(52.42±2.84)%vs.(69.99±3.55)%,P<0.01],表明EE改善父系应激导致的F1-UCMS小鼠抑郁样行为。RT-qPCR及Western blotting检测结果显示,与F1-Nor组相比,SE组子代小鼠海马LASP1表达减少(雄性P<0.01,雌性P<0.05);与SE组相比,EE组小鼠海马LASP1表达增加(P均<0.05)。结论EE可改善父系应激导致的F1-UCMS小鼠焦虑、抑郁样行为,其机制可能与F1-UCMS小鼠海马LASP1表达增加相关。

LASP1下调和ferritin上调在rhBMP-2诱导的比格犬BMSCs成骨分化中起重要作用

目的建立稳定的比格犬骨髓间充质干细胞(BMSCs)诱导成骨分化模型;鉴定参与比格犬BMSCs细胞成骨分化过调控的蛋白质,探讨其可能的调控机制。方法分离培养比格犬BMSCs细胞,rhBMP-2诱导细胞成骨分化7 d,基于蛋白质双向凝胶电泳的蛋白质组学分析成骨分化组与对照组差异表达的蛋白质,对感兴趣的蛋白质LASP1、ferritin轻链和重链表达情况用Q-PCR、Western blot进行验证。结果成功诱导比格犬BMSCs成骨分化;蛋白质组学分析获得rhBMP-2诱导上调的蛋白质9个,下调的蛋白质11个。荧光定量PCR技术和Western blot对LASP1和ferritin表达情况进行了验证,发现rhBMP-2诱导7 d后,LASP1显著下调而ferritin显著上调,与蛋白质组学结果一致。结论 LASP1在调节细胞骨架活性方面发挥重要功能,而ferritin是细胞铁离子稳态维持的重要分子,提示这两种蛋白质在rhBMP-2诱导的比格犬BMSCs成骨分化过程中发挥重要作用。

Lasp1 mRNA和蛋白在口腔鳞癌组织中表达上升及其临床意义

目的:探讨Lasp1基因与蛋白质水平在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织标本中的表达及其临床意义。方法:分别采用荧光实时定量RT-PCR和免疫组织化学方法,检测Lasp1在30例口腔鳞癌患者的癌组织及癌旁组织标本中mRNA和蛋白质表达水平,其表达水平与临床病理指标之间的关系采用SPSS10.0软件包进行统计分析。结果:口腔鳞癌组织标本中Lasp1 mRNA和蛋白质表达水平均显著高于癌旁组织(P<0.01)。Lasp1蛋白在临床晚期、淋巴结转移阳性病例中表达明显升高,与烟酒嗜好、肿瘤大小及肿瘤分化程度无关。结论:Lasp1在口腔鳞状细胞癌中表达上调,可能与肿瘤的发生、发展和淋巴结转移有关,可以作为一个潜在的生物标志物和治疗的靶标。

干扰LASP1基因表达对胃癌细胞BGC823增殖、迁移及侵袭能力的影响

背景与目的:LASP1是一种新的肌动蛋白结合蛋白,参与细胞骨架的重组调控及细胞迁移,在多种恶性肿瘤中高表达,并与肿瘤的增殖、侵袭和转移密切相关。但目前LASP1在胃癌发生、发展中的作用少见报道。该研究旨在探讨LASP1在胃癌增殖和侵袭中的作用及分子机制。方法:利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测LASP1在不同胃癌细胞系中的表达,应用RNA干扰技术抑制BGC823细胞中LASP1的表达,采用RTFQ-PCR和Western blot检测转染后LASP1的表达,应用体外增殖、迁移和侵袭实验检测转染后细胞的增殖、迁移和侵袭能力,通过F-actin聚合实验检测细胞的F-actin的聚合能力,采用Western blot检测转染前后BGC823细胞中Akt的磷酸化情况。结果:LASP1在胃癌BGC823细胞中高表达。RNA干扰技术沉默LASP1基因后,干扰组与对照组相比,LASP1的m RNA和蛋白表达水平均明显下降。细胞增殖实验显示,干扰组细胞的增殖率低于对照组(P<0.05);Transwell迁移和侵袭实验发现,与对照组相比,干扰组细胞的迁移和侵袭能力均明显降低(P<0.05);在干扰组细胞内的F-actin聚合量比对照组减少(P<0.05);在干扰组细胞内Akt磷酸化受到抑制。结论:LASP1的表达降低可以抑制胃癌BGC823细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力,LASP1通过调节F-actin的聚合和Akt磷酸化从而影响胃癌细胞的侵袭、转移。

LASP1、GSTA3在鼻咽癌组织中的表达及与复发、转移的关系

目的探究LIM和SH3蛋白1(LASP1)、谷胱甘肽硫转移酶A3(GSTA3)在鼻咽癌组织中的表达及与复发、转移的关系.方法选取本院2012年9月至2016年5月收治的鼻咽癌患者117例作为研究对象,检测对比鼻咽癌患者癌组织、癌旁组织中LASP1、GSTA3 mRNA,比较不同临床特征患者癌组织中LASP1、GSTA3 mRNA,采用Logistic多元回归方程分析LASP1、GSTA3 mRNA与鼻咽癌复发、转移的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线分析LASP1、GSTA3 mRNA高危者、低危者生存曲线,采用Pearson分析LASP1、GSTA3 mRNA与无进展生存期(PFS)相关性.结果癌组织中LASP1 mRNA高于癌旁组织,GSTA3 mRNA低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);复发、转移、低分化、Ⅳ期鼻咽癌患者LASP1 mRNA高于未复发、转移、中高分化、Ⅲ期患者,GSTA3 mRNA低于未复发、转移、中高分化、Ⅲ期患者,差异有统计学意义(P<0.05);复发、转移鼻咽癌患者LASP1 mRNA高于未复发、未转移患者,GSTA3 mRNA低于未复发、未转移患者,差异有统计学意义(P<0.05);LASP1、GSTA3 mRNA与鼻咽癌复发、转移显著相关(P<0.05);复发鼻咽癌患者PFS为31.17个月,转移鼻咽癌患者PFS为8.72个月;复发与转移鼻咽癌患者LASP1 mRNA高表达者PFS短于低表达者,GSTA3 mRNA高表达者PFS长于低表达者,差异有统计学意义(P<0.05);LASP1 mRNA与PFS呈负相关,GSTA3 mRNA与PFS呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05).结论在鼻咽癌组织中,LASP1表达升高,GSTA3表达降低,对肿瘤复发、转移分别起到正负调节作用,并与PFS有关.

靶向LASP1基因的干扰腺病毒对非小细胞肺癌的抗肿瘤作用

目的探讨靶向LIM和SH3蛋白1基因(LASP1)干扰腺病毒(Ad-LASP1-shRNA)对非小细胞肺癌(NSCLC)的抗肿瘤作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)及Western blot检测NSCLC组织中LASP1表达水平;应用Ad-LASP1-shRNA感染A549细胞48 h;采用qPCR、Western blot分析转染后A549细胞中mRNA及蛋白的表达水平;划痕实验和Transwell法检测转染后A549的迁移与侵袭能力;建立A549移植瘤模型,瘤体内注射Ad-LASP1-shRNA,定期测量肿瘤体积。结果NSCLC癌组织和癌旁组织中LASP1的mRNA表达量、蛋白表达水平差异均有统计学意义(P<0.001)。qPCR和Western blot表明Ad-LASP1-shRNA可有效抑制LASP1的表达。Ad-LASP1-shRNA感染A549细胞24 h后的A549迁移、侵袭能力显著降低,侵袭和迁移细胞数目显著低于对照组(P<0.05);接种5周后Ad-LASP1-shRNA组肿瘤体积为(334.5±32.6)mm 3明显小于PBS组(833.9±61.3)mm^(3),Ad-LASP1-shRNA能显著抑制移植瘤的生长。结论Ad-LASP1-shRNA对NSCLC有显著的抑瘤效果,值得进一步研究。

感染MDV鸡羽髓组织中CyP、LASP1和PCBP1蛋白的表达分析

本实验室前期的蛋白质组学研究显示,鸡羽髓组织中亲环素蛋白(CyP)、LIM和SH3蛋白1(LASP1)和多聚胞嘧啶结合蛋白1(PCBP1)3种蛋白为马立克氏病病毒(MDV)感染过程中差异表达蛋白。为进一步检测这3种蛋白在病毒感染过程中的表达水平,本研究以MDV GA强毒株感染SPF鸡,应用荧光定量PCR和westernblot检测病毒感染14 d和21 d后这3种蛋白在羽髓组织中的表达水平。检测结果表明,病毒感染14 d后,羽髓组织中这3种蛋白的mRNA和蛋白表达水平均有不同程度的下调,其中LASP1 mRNA和PCBP1蛋白分别下调62%和48%(p<0.05);在21 d,除CyP蛋白表达基本不变外,其他mRNA和蛋白均不同程度下调,其中LASP1蛋白下调达到46%(p<0.05)。结果表明在两个不同的MDV感染时期,MDV均可以不同程度的抑制羽髓组织中这3种蛋白的表达,本研究为进一步阐释MDV与羽髓组织的相互作用机理提供有价值的参考。

miR-6886-5p通过调控LASP1表达抑制胃癌细胞的增殖和迁移

目的观察微小RNA(microRNA,miR)-6886-5p对LIM和SH3蛋白1(LIMandSH3 protein 1,LASP1)表达的调控作用及对胃癌细胞增殖和迁移的影响。方法2019年10月至2021年1月,使用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胃癌细胞株和正常胃黏膜上皮细胞中miR-6886-5p表达。以表达最低的细胞为实验对象,分为miR-6886-5p组(转染miR-6886-5p)和对照组(转染miR-NC)。使用淋巴细胞增殖检测(MTS)法和划痕愈合实验分别检测miR-6886-5p对胃癌细胞增殖和迁移能力的影响。使用生物信息学软件microRNA.org及双荧光素酶报告基因实验预测和验证miR-6886-5p的靶基因。使用qRT-PCR和Westernblot检测miR-6886-5p对靶基因表达的调控作用。结果与正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)相比,胃癌细胞株miR-6886-5p表达明显下降(P<0.05),表达最低的细胞是HS-746T细胞(P<0.01)。对照组和miR-6886-5p组HS-746T细胞中miR-6886-5p表达分别为(1.17±0.40)和(9.48±1.10),差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组相比,miR-6886-5p组细胞的增殖能力明显降低(P<0.05),迁移能力明显降低(P<0.01)。miR-6886-5p可能与LASP1基因的信使RNA(mRNA)存在结合位点。miR-6886-5p可靶向结合LASP1 mRNA(P<0.05)。与对照组相比,miR-6886-5p组LASP1基因表达明显下降(P<0.01)。结论miR-6886-5p在胃癌细胞株中呈低表达,miR-6886-5p能够通过调控LASP1基因表达,降低胃癌HS-746T细胞增殖和迁移能力。

miR-218靶向LASP1调控TGF-β/Smad信号通路调节肺癌细胞的侵袭和转移

目的:观察miR-218对肺癌细胞生物学行为的影响并探讨其可能的作用机制。方法:收集62例肺癌患者癌组织及癌旁正常组织,qRT-PCR和免疫组化方法检测miRNA-218、LASP1和TGF-β的表达情况;通过脂质体转染法转染肺癌细胞系A549,从而构建miRNA-218过表达细胞模型及空载体组,并以A549细胞作为空白对照组;观察过表达miRNA-218对A549细胞生物学行为的影响,采用CCK-8法检测过表达miRNA-218对A549细胞增殖的影响;通过划痕实验及Transwell侵袭实验检测过表达miRNA-218对A549细胞侵袭和迁移能力的影响;StarBase数据库及荧光素酶报告基因实验检测miRNA-218与LASP1的靶向关系;Western blot法检测细胞转染前后LASP1、TGF-β及Smad蛋白的表达。结果:qRT-PCR结果显示,肺癌组织中miRNA-218的表达水平低于正常组织,且与患者肿瘤浸润深度(P=0.004)、肿瘤大小(P=0.005)、淋巴结转移(P=0.014)以及TNM分期(P=0.021)密切相关,肺癌组织LASP1和TGF-β阳性表达率高于正常组织(P<0.05);相比于未转染的空白对照组,转染miRNA-218的细胞增殖、侵袭、迁移能力显著降低(P<0.05),空载体组与空白对照组比较无显著差异。StarBase数据库及荧光素酶报告基因实验结果显示miRNA-218与LASP1存在靶向关系。与空白对照组相比,转染miRNA-218的A549肺癌细胞LASP1、TGF-β及Smad蛋白的表达水平明显降低(P<0.05),空载体组的表达水平无明显变化。结论:miRNA-218可能通过靶向抑制LASP1蛋白的表达,进而调控TGF-β/Smad信号通路,从而抑制肺癌细胞的侵袭和迁移。

LASP1和HIF-1α在肺癌中的表达及临床价值

目的分析LASP1(LIM and SH3 protein 1)和缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在肺癌中的表达及其与临床因素之间的相关性。方法应用qRT-PCR、Western blot分别检测肺癌细胞株和正常肺细胞株间LASP1和HIF-1αmRNA和蛋白表达差异,免疫组化分析肺癌患者LASP1和HIF-1α蛋白表达情况。结果 LASP1和HIF-1αmRNA和蛋白在肺细胞株中的表达明显低于在肺癌细胞株中的表达(P<0.05)。肺癌患者中LASP1表达与N分期(P=0.033)密切相关,HIF-1α与LASP1表达与T分期(P=0.027)和N分期(P=0.015)密切相关;LASP1和HIF-1α表达呈正相关(r=0.273,P=0.025)。预后生存分析发现N分期、LASP1和HIF-1α表达为本组肺癌患者预后独立因素。结论肺癌中LASP1和HIF-1α表达升高,LASP1和HIF-1α表达可作为肺癌预后预测指标。

沉默LASP1对口腔鳞癌细胞生物学行为及3种抗肿瘤药物IC_(50)的影响

目的:评价LASP1对口腔鳞癌细胞增殖、转移、侵袭和周期的影响,并对3种抗肿瘤药物顺铂、阿帕替尼和多西他赛的相关作用进行分析。方法:利用The human protein atlas数据分析LASP1与头颈部肿瘤生存率、预后的关系。RT-PCR和Western免疫印迹检测LASP1在口腔鳞癌细胞系的mRNA和蛋白表达。慢病毒构建LASP1沉默的HN30稳转细胞株,CCK-8法检测细胞增殖,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,Transwell法检测细胞转移和侵袭能力,流式细胞仪检测细胞周期变化。建立裸鼠口腔鳞癌肺部转移瘤。CCK-8法分析3种药物顺铂、阿帕替尼和多西他赛在细胞中的IC_50变化。采用SPSS 11.0软件包对数据进行统计学分析。结果:LASP1与头颈部肿瘤生存率、预后密切相关。LASP1促进口腔鳞癌细胞系HN30增殖、克隆形成、转移和侵袭,促进细胞周期G2/M期过渡。沉默LASP1后,裸鼠肺部转移瘤显著减少,多西他赛IC_50显著下调,而顺铂和阿帕替尼IC_50无显著变化。结论:LASP1促进口腔鳞癌细胞增殖、平板克隆、转移和侵袭,细胞周期G2/M期过渡,促进裸鼠体内肺转移瘤形成和多西他赛耐药。

血清microRNA-1、LASP1、TAGLN2及LGALS3BP在食管癌诊断中的价值

目的探讨血清microRNA-1、LASP1、TAGLN2及LGALS3BP在食管癌诊断中的应用价值。方法选取2012年1月至2016年1月在沈阳某三甲医院收治的128例食管癌患者(观察组)和134名健康体检者(对照组)为研究对象。采用ELISA实验检测血清中LASP1、TAGLN2和LGALS3BP的蛋白表达水平,采用PCR检测microRNA-1 mRNA的表达水平,采用ROC曲线分析microRNA-1、LASP1、TAGLN2及LGALS3B单独或联合诊断食管癌的价值。结果观察组血清中LASP1、TAGLN2以及LGALS3BP的蛋白表达水平均高于对照组(P<0.001),但microRNA-1表达水平低于对照组(P<0.001)。食管癌患者血清中LASP1、TAGLN2以及LGALS3BP表达水平均与microRNA-1表达水平呈负相关(P<0.001)。血清中microRNA-1、LASP1、TAGLN2以及LGALS3BP诊断食管癌的AUC分别为0.940(95%CI:0.913~0.967)、0.890(95%CI:0.843~0.936)、0.841(95%CI:0.794~0.889)、0.924(95%CI:0.893~0.956),联合诊断的AUC为0.970(95%CI:0.954~0.987),均高于单独诊断的AUC (P<0.05)。结论血清中LASP1、TAGLN2、LGALS3BP和microRNA-1表达水平对食管癌有一定的诊断价值。

miR⁃203a⁃3p通过靶向LASP1介导Akt/GSK⁃3β/Snail信号通路调控肝癌细胞生物学行为

目的研究miR-203a-3p对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞生物学行为的影响及其相关分子机制。方法将miR-203a-3p模拟物(miR-203a-3p mimics)及阴性对照(miR-NC mimics)、LIM和SH3蛋白1(LIM and SH3 protein 1,LASP1)过表达质粒(pcDNA-LASP1)及阴性对照质粒(pcDNA-NC)分别转染至HepG2细胞。以qRT-PCR法检测细胞miR-203a-3p、LASP1 mRNA表达情况,CCK-8法和异体移植瘤实验分析细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡,双荧光素酶报告基因检测miR-203a-3p与LASP1的靶向关系,Western blot法检测细胞中LASP1、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、磷酸化Ak(t phosphorylated Akt,p-Akt)、糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)、磷酸化GSK-3β(phosphorylated GSK-3β,p-GSK-3β)、Snail表达情况。结果与miR-NC组相比,miR-203a-3p组HepG2细胞增殖活性、迁移率、侵袭数目、LASP1 mRNA和蛋白表达量、p-Akt/Akt和p-GSK-3β/GSK-3β比值、Snail蛋白表达量均显著降低,小鼠移植瘤体积和质量显著减少,细胞凋亡率显著升高(均P<0.01)。Targetscan软件预测显示,miR-203a-3p与LASP1存在靶向关系;与LASP1-Wt+miR-NC组比较,LASP1-Wt+miR-203a-3p组相对荧光素酶活性显著下降(P<0.001)。与miR-203a-3p+pcDNA-NC组比较,miR-203a-3p+LASP1组HepG2细胞增殖活性、迁移率、侵袭数目、p-Akt/Akt和p-GSK-3β/GSK-3β比值、Snail蛋白表达量均显著升高,小鼠移植瘤体积和质量显著增加,细胞凋亡率显著降低(均P<0.01)。结论miR-203a-3p可能通过靶向抑制LASP1表达调控Akt/GSK-3β/Snail信号通路活性,从而调控HCC细胞生物学行为。

免疫组化法测定LASP1蛋白在鼻咽癌组织中的表达及影响因素分析

目的探讨免疫组化法测定LASP1蛋白在鼻咽癌组织中的表达情况,并对其相关影响因素进行分析。方法回顾性分析2018年4月—2019年9月期间在郑州金域临床检验中心接受治疗并经病理诊断确诊为鼻咽癌的67例患者的临床资料,使用免疫组化法测定所有患者癌组织及癌旁组内表达水平,并对影响其检测结果的各因素进行分析。结果经检测,LASP1蛋白在鼻咽癌组织中的表达水平为(0.13±0.03),显著高于在癌旁组织中的表达水平(0.03±0.01),差异显著(P<0.05);经检测,LASP1蛋白在鼻咽癌组织中呈高表达水平的患者有29例,占比为43.28%,呈低表达水平的患者有38例,占比为56.72%;两组患者性别、年龄占比对比,差异无统计学意义(P>0.05);LASP1蛋白高表达组患者TNM分级(Ⅳ级)占比显著高于LASP1蛋白低表达组患者(P<0.05);本研究经Logistic回归分析发现,TNM分级可能影响LASP1蛋白在鼻咽癌组织中呈高表达水平(OR>1,P<0.05)。结论LASP1蛋白在鼻咽癌组织中表达水平较高,TNM分级(Ⅳ级)可能影响LASP1蛋白在鼻咽癌组织中呈高表达水平,临床可利用LASP1蛋白作为诊断及治疗鼻咽癌患者的新型分子靶点。

基于转录组测序对LASP1调控的肝癌细胞基因及相关功能的分析

目的检测LASP1在肝癌细胞中导致的基因表达变化,为深入研究LASP1介导肝癌发生发展的分子机制提供更多生物学依据。方法构建LASP1的真核表达质粒并转染肝癌细胞HepG2,建立过表达LASP1的肝癌细胞及相关的对照细胞。利用转录组测序技术检测2组细胞的基因表达谱。通过生物信息学方法比较2组细胞间的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)。通过GO、KEGG pathway和WikiPathway富集分析,探讨LASP1调控的DEGs参与的生物学过程及相关通路。通过STRING数据库构建DEGs编码蛋白的相互作用网络,寻找LASP1调控的潜在关键基因。结果与对照细胞相比,在过表达LASP1的肝癌细胞中筛选出410种DEGs。其中308种DEGs表达上调,102种DEGs表达下调。GO富集分析结果显示,DEGs与离子跨膜转运、阳离子转运等生物学过程有关。DEGs的KEGG pathway富集结果主要与化学致癌等有关,WikiPathway富集的结果与组蛋白修饰等有关。DEGs编码蛋白之间能够形成复杂的蛋白相互作用网络,并且HIST1H1B、HIST1H4B、NCAM1、SLC17A7等基因为LASP1调控的潜在关键基因。结论本研究揭示了LASP1在肝癌细胞中调控的基因及其参与的离子跨膜转运和化学致癌等生物学过程和通路,为深入探讨LASP1在肝癌细胞中的生物学功能及相关的分子机制提供了基础。

干扰LASP1基因表达抑制肾癌细胞HTB-47和CRL-1932的迁徙侵袭能力

目的LASP1是一种与癌细胞肌动蛋白组装动力学相关的肌动蛋白结合蛋白,其在许多肿瘤的发生演变中发挥了巨大的作用,在这个研究中我们将着重探讨LASP1对肾癌的发生发展以及演变中的作用。方法通过对肾癌细胞HTB-47和CRL-1932进行转染LASP1及其上游的HIF1a si RNA,进行蛋白印迹实验、transwell以及划痕实验,观察敲低LASP1和HIF1a后,LASP1和HIF1a表达量的改变以及肾癌细胞迁移侵袭能力的变化。结果转染LASP1 si RNA后的HTB-47和CRL-1932迁移能力和侵袭能力明显受抑制。转染HIF1a si RNA后,LASP1的蛋白表达量亦下调,HTB-47和CRL-1932的迁移和侵袭能力也明显受到抑制。结论LASP1基因促进HTB-47和CRL-1932的迁移和侵袭能力,敲低LASP1的表达,可明显抑制HTB-47和CRL-1932的迁移侵袭行为。敲低HIF1a能明显改变LASP1的表达量,从而可以间接调控肾癌细胞的生物学行为。