Lat-B对家兔房水葡萄膜巩膜引流通路的影响

目的:研究Lat-B对家兔眼内压、葡萄膜巩膜通路的影响。方法:兔眼局部应用Lat-B,BSS和DMSO,于用药前1h及用药后1,2,3,4,5,6,24h测量眼压后部分免疫荧光组通过前房内注入微量示踪剂异硫氰酸荧光素牛血清白蛋白(fluorescein isothiocyanate bovine serum albumin,FITC-BSA),于点眼后2,4,6,8,10h各处死家兔2只,摘除双侧眼球作冰冻切片,于荧光显微镜下观察并确定睫状体、脉络膜上腔、前、后巩膜和脉络膜的荧光强度等级。结果:Lat-B滴眼后处理眼眼压不同时间点与滴眼前比较眼压呈下降趋势,差异有显著性(P<0.05),1h即可引起眼压降低,24h仍有效,BSS组与DMSO组未引起眼压下降;葡萄膜巩膜途径通路3组之间在睫状体、脉络膜上腔、前、后巩膜和脉络膜的荧光强度,各部位均为Lat-B组最强,Lat-B与BSS组和DMSO组相比差异均有显著性(P<0.05),BSS组和DMSO组相比差异无显著性。结论:Lat-B能够有效降低眼压,1h即可起效,且24h仍有效。Lat-B可以增加葡萄膜巩膜途径通路的房水流出率,具有治疗青光眼的应用前景,尤其是正常眼压性青光眼、开角性青光眼。

Lat-B对家兔巩膜胶原重塑的影响

目的研究latrunculin-B(Lat-B)对兔巩膜通透性的影响,为细胞骨架因子在青光眼治疗中的应用及眼后节疾病的药物传递研究提供新的思路和理论依据。方法 36只家兔随机分为平衡盐液(BSS)组、二甲基亚砜(DMSO)组及Lat-B组,每组12只,分别用BSS、DMSO和Lat-B局部点眼,于用药前1h及用药后1、2、3、4、5、6、24h分别测量眼压,于24h后处死动物并获取部分巩膜组织,自制巩膜滤过装置测试巩膜通透性的变化,部分巩膜组织行免疫组织化学染色以检测前部巩膜组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和组织金属蛋白酶-2抑制剂(TIMP-2)的表达。光学显微镜下观察实验兔眼部各组织结构的形态学变化。结果 Lat-B组、BSS组与DMSO组点眼前后各时间点眼压的总体变化差异有统计学意义(F=25.76,P<0.01),Lat-B点眼后不同时间点与点眼前比较眼压呈下降趋势,差异有统计学意义(Ftime=4.50,P<0.01),点眼后1h即可引起眼压降低,降眼压作用可持续24h;BSS组与DMSO组点眼前后各时间点眼压变化的差异无统计学意义(P>0.05);Lat-B点眼后的前部巩膜对BSS的滤过较BSS组和DMSO组明显增加,3组的总体比较差异有统计学意义(F=47.50,P<0.01);Lat-B组、BSS组和DMSO组MMP-2及TIMP-2表达的吸光度(A)值的总体比较差异均有统计学意义(F=28.70,F=22.30,P<0.01)。MMP-2、TIMP-2的表达Lat-B组与BSS组比较差异有统计学意义(P<0.01),与DMSO组比较二者的表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.01);BSS组和DMSO组间MMP-2及TIMP-2比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 Lat-B能够有效降低眼压,明显提高巩膜的房水流出易度,并可通过上调MMP-2、TIMP-2的表达导致巩膜胶原重塑。

pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达

克隆单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virusⅡ,HSV-2)潜伏相关转录体(latency associated transcript,LAT)第3个开放阅读框(open reading frame3,ORF3)的DNA序列,构建pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体,并观察其在非洲绿猴肾细胞(Vero)中的表达,为进一步研究LAT基因及ORF3的生物学功能奠定基础。用HSV-2333株感染Vero细胞,从Vero细胞培养液中收集HSV-2并提取HSV-2基因组。以HSV-2基因组为模板,PCR扩增得到HSV-2LAT ORF3DAN片段。将ORF3片段连接到pEGFP-C2质粒上,用卡那霉毒筛选阳性克隆,经菌落PCR,双酶切及测序验证pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体构建成功。用Xfect转染试剂将重组载体转染入Vero细胞,倒置荧光显微镜观察其在Vero细胞中的表达。双酶切及测序结果验证ORF3片段正确插入pEGFP-C2质粒,荧光显微镜观察到融合蛋白在转染的Vero细胞中的表达。成功构建pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体,该重组质粒能在Vero细胞中成功表达。

食管鳞癌组织中LAT-1、RON蛋白的表达与病理学特征的关系

目的:探究食管鳞癌组织中L型氨基酸转运载体-1(Large neutral amino acid transporter-1,LAT-1)、巨噬细胞刺激蛋白受体(Recepteur d’origine nanta,RON)蛋白的表达与病理学特征的关系。方法:回顾性分析2020年7月至2022年7月本院收治的食管鳞癌患者113例为研究对象。采用免疫组织化学法(Envision法)对其食管鳞癌组织和癌旁组织中的LAT-1、RON蛋白表达水平进行检测。对比不同食管鳞癌组织与癌旁组织间LAT-1、RON蛋白表达水平;对比不同临床特征食管鳞癌组织间LAT-1、RON蛋白表达情况;分析食管鳞癌组织中LAT-1、RON蛋白表达相关性。结果:LAT-1在癌旁组织中无阳性表达,但在食管鳞癌组织中有阳性表达。食管鳞癌组织LAT-1、RON蛋白阳性率均显著高于癌旁组织(P<0.05)。食管鳞癌组织中LAT-1、RON蛋白表达在不同分化程度、临床TNM分期及淋巴结转移中表达均有差异(P<0.05)。Spearman轶相关分析结果显示在食管鳞癌组织中,LAT-1与RON蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论:LAT-1、RON蛋白与食管鳞癌临床病理特征显著相关,并能作为一种新的预后判断指标和治疗靶点,为临床病情诊断及预后评估提供参考。

前列腺癌组织中ErbB-3和LAT-1表达的研究

目的:分析表皮生长因子受体家族中的ErbB-3受体和氨基酸转运蛋白L型氨基酸转运体-1(LAT-1)在临床前列腺癌组织标本中的表达和定位,以及二者之间可能存在的相关性。方法:对45例前列腺癌组织标本,10例良性前列腺增生组织(BPH)标本和9例正常前列腺标本的石蜡切片采用免疫组织化学SABC方法染色并进行分析。结果:在45例前列腺癌组织中有33例(73.3%)细胞质或细胞核呈现ErbB-3染色阳性;10例BPH标本中,仅有1例出现阳性反应(P<0.001);正常前列腺组织中未见到阳性表达(P<0.001)。而LAT-1在前列腺癌组织中的表达阳性率高于ErbB-3,为40例(88.9%),表达于细胞膜和或细胞质中,明显高于正常组织以及BPH组织(P<0.05)。LAT-1在正常组织和BPH组织中无阳性表达。ErbB-3和LAT-1在前列腺癌组织中的表达均与Glean评分分级无关。在前列腺癌组织中ErbB-3和LAT-1的表达存在正相关性(r=0.426,P<0.05)。结论:在前列腺组织中的ErbB-3和LAT-1阳性表达和定位能够区分恶性肿瘤与BPH和正常前列腺组织,有利于前列腺癌的诊断和生物学的预测。

pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体在Vero细胞中的表达特性及其对细胞活性的影响

目的:研究单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框3(ORF3)的表达特点及其对细胞活性的影响。方法:双酶切和测序验证本实验室构建的HSV-2 LAT ORF3真核表达载体pEGFP-C2/LAT-ORF3的可用性,并将其转染入vero细胞,通过荧光和RT-PCR检验其在细胞中的表达,用MTT法进行细胞活性分析。结果:融合蛋白在细胞核中大量集中,且影响了绿色荧光蛋白在细胞中的分布;重组质粒对Vero细胞没有损伤作用。结论:HSV-2 LAT ORF3可抵消空质粒对细胞的损伤作用;其作用靶点可能主要存在于细胞核中,为阐明HSV-2 LAT ORF3在潜伏复发中的功能提供了实验基础。

多灶性甲状腺乳头状癌发生颈部转移性淋巴结的危险因素及其预测模型构建

目的 分析多灶性甲状腺乳头状癌(MPTC)患者发生中央区颈部淋巴结转移(CLNM)和颈侧区淋巴结转移(LLNM)的危险因素,并建立预测模型。方法 选取93例MPTC患者作为研究对象。根据是否发生CLNM分为CLNM组(n=42)和无CLNM组(n=51);根据是否发生LLNM分为LLNM组(n=31)和无LLNM组(n=62)。分别分析MPTC患者发生CLNM和LLNM的危险因素,并构建预测模型。通过受试者工作特征(ROC)曲线评估模型的预测效能。结果 93例MPTC患者CLNM的发生率为45.16%, LLNM的发生率为33.33%。男性、年龄≤45岁、最大肿瘤直径>10 mm、被膜侵犯是MPTC患者发生CLNM的危险因素(P<0.05);最大肿瘤直径>10 mm、被膜侵犯和有CLNM是MTPC发生LLNM的危险因素(P<0.05)。MPTC患者发生CLNM模型的ROC曲线的曲线下面积(AUC)为0.846(95%CI:0.749~0.947),灵敏度为78.21%,特异度为86.07%;MPTC患者发生LLNM模型的AUC为0.848(95%CI:0.749~0.947),灵敏度为76.38%,特异度为82.46%。结论 男性、年龄≤45岁、最大肿瘤直径>10 mm、被膜侵犯与CLNM和LLNM均有关,LLNM发生与有CLNM有关。构建的CLNM和LLNM预测模型,模型拟合度良好,具有一定的预测价值。

RGD及NLSY1伽马波段的流量分布及RMS-Flux关系研究

研究了Fermi-LAT第4期目录中的射电星系(Radio galaxy,RDG)以及窄线型赛弗特星系1(Narrow-line Seyfert 1,NLSY1)的γ射线流量分布特征及均方根-流量(RMS-Flux)的线性关系。基于这两类活动星系核的γ射线流量数据处理,用高斯函数和对数正态函数对其流量分布进行了拟合。通过K-S检验(Kolmogorov-Smirnov test)、S-W检验(Shapiro-Wilk test)及约化卡方(Reduced χ^(2))发现,射电星系及窄线型赛弗特星系1的分布都更加符合对数正态分布而非高斯分布,这表明其光变可能具有非线性和乘法性质。此外,还分别对这两类源的两种不同分组的均方根-流量关系进行了线性拟合,发现了均方根-流量有极强的线性相关性且斜率都为正。

苍耳子水提液对过敏性鼻炎小鼠的治疗作用及机制研究

[目的]探讨苍耳子(Xanthii Fructus,XF)水提液对过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)小鼠的治疗作用及机制。[方法]36只BALB/c小鼠随机分为正常对照(normal control,NC)组、AR组、低剂量XF水提液(low-dose XF,L-XF)组(4 mg·kg^(-1))、中剂量XF水提液(medium-dose XF,M-XF)组(8 mg·kg^(-1))、高剂量XF水提液(high-dose XF,H-XF)组(16 mg·kg^(-1))和地塞米松(dexamethasone group,DXM)组(5 mg·kg^(-1)),每组6只。除NC组外,余下各组小鼠均用卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)致敏进行AR造模,随后治疗14 d。治疗结束后,记录小鼠搔鼻和喷嚏次数,并进行鼻炎症状评分;取小鼠鼻腔组织,行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和糖原(periodic acid-schiff,PAS)染色观察小鼠鼻腔组织学形态变化并评分,中性红染色观察肥大细胞脱颗粒情况,并计算各组药物脱颗粒抑制率;酶联免疫吸附试验检测小鼠血清白三烯C4、组胺及β-氨基己糖苷酶A水平;免疫印迹法检测鼻腔组织T细胞激活连接蛋白(linker for activation of T cell,LAT)、磷酸化LAT(phospho-LAT,p-LAT)、磷脂酶Cγ1(phospholipase Cγ1,PLCγ1)、磷酸化PLCγ1(phospho-PLCγ1,p-PLCγ1)、蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)、磷酸化PKC(phospho-PKC,p-PKC)蛋白的表达。[结果]与NC组比较,AR组小鼠的搔鼻、打喷嚏次数显著增加,鼻炎评分显著升高,HE评分以及PAS评分均显著升高,血清白三烯C4、组胺、β-氨基己糖苷酶A水平显著升高,肥大细胞脱颗粒率显著升高,p-LAT/LAT、p-PLCγ1/PLCγ1、p-PKC/PKC的蛋白表达显著升高(P<0.01)。与AR组比较,各组小鼠搔鼻、打喷嚏次数,以及肥大细胞脱颗粒率显著减少(P<0.05,P<0.01);M-XF组、H-XF组、DXM组的鼻炎评分显著下降,HE评分以及PAS评分显著降低,血清白三烯C4、组胺、β-氨基己糖苷酶A水平显著下降(P<0.05,P<0.01);M-XF组、H-XF组、DXM组的药物脱颗粒抑制率显著高于L-XF组(P<0.05,P<0.01)。免疫印迹显示,与AR组比较,各组小鼠鼻腔组织的p-PKC/PKC蛋白表达显著下降(P<0.05,P<0.01),M-XF组、H-XF组、DXM组小鼠鼻腔组织的p-LAT/LAT、p-PLCγ1/PLCγ1的蛋白表达显著下降(P<0.05,P<0.01)。[结论]XF水提液可能通过抑制LAT/PLCγ1/PKC信号通路的表达,抑制肥大细胞脱颗粒,从而改善小鼠AR症状。

庚子事变后南洋华人对新政改革的评议与倡导——以新加坡华文报刊《叻报》为中心的探讨(1900-1901)

义和团运动后,为了挽回声誉,重振民心,维护清廷的继续统治,刚刚逃至西安的慈禧太后就颁布诏令启动变法,让社会各界各抒己见,由此拉开十年新政序幕。华文报刊《叻报》在1900年前后紧跟清廷的时局,积极报道义和团的动向和战争的进程,并对运动的失败和时局的败坏痛心疾首。当1901年初两宫诏令新政后,《叻报》仍然紧密关注清廷的动向,大量转载国内与改革变法相关的奏折和文章,并为新政建言献策,其中隐含着南洋华人群体希望国家民族自立与强大的爱国之情。

超大跨暗挖平顶直墙结构下穿桥桩研究

目前城市地铁建设发展迅速,以不同工法下穿桥梁等重大风险源工程项目越来越多,但是超大跨暗挖平顶直墙结构下穿桥梁的工程案例却很少见。以北京地铁16号线达官营站换乘通道结构为依托,通过平顶直墙结构导洞分幅、开挖、结构施作等各关键阶段施工对上部桥梁及基础的影响程度及可能带来的危害进行分析,制定出桥梁注浆、顶升加固等设计关键措施以及合理的施工工序。根据制定的措施及关键施工步序对上部的桥梁及桥桩安全性影响进行数值模拟分析评价,实现了下穿桥梁安全可控,并与实际监测数据进行了对比,进而验证了研究成果的适用性、合理性和科学性。

中国沿岸主要验潮站海图深度基准面的计算与分析

对中国沿岸有代表性的15个验潮站的多年潮位观测资料,以年序列进行调和分析并据调和常数计算验潮站的海图深度基准面,分析了由年观测序列求得的调和常数和海图深度基准面的稳定性,研究和更新了理论上可能最低潮面计算中的浅水分潮和长周期分潮订正算法。计算结果表明,中国沿岸不同验潮站的海图深度基准面定义和算法存在差异,新的订正算法计算的可能最低潮面和最低天文潮面具有意义一致性,研究成果能够用来精化和重新构建中国沿岸海图深度基准面。

伪狂犬病毒gG基因的表达及gG-LAT诊断方法的建立

依据伪狂犬病病毒(PseudorabiesVirusPRV)Rice株序列合成针对gG基因的特异性引物,从PRV鄂A株中扩增出gG基因,并将其克隆到pBluescriptⅡSK+质粒中并测序,用SacⅠ和HindⅢ酶切,将gG基因融合到pET 28a质粒中T7启动子下游,构建成原核表达质粒pET 28a gG1,结果并未获得表达。再用NotⅠ切除gG基因后小半部分片段,构建成原核表达质粒pET 28a gG2,使其在E.coliBL21(DE3)中以IPTG诱导表达,经SDS PAGE分析,表达特异带为47KDa,斑点杂交证实表达产物具有抗原性。表达产物主要以可溶性蛋白的形式存在于细菌裂解液的上清之中,上清经饱和硫酸铵溶液沉淀,透析,PEG20000浓缩,ELISA分析表明,经初步纯化的表达产物可与抗PRV猪血清发生特异性免疫反应。用该产物致敏空白乳胶建立gG 乳胶凝集试验(gG LAT),检测340份血清,结果表明gG LAT能区分gG基因缺失疫苗活苗免疫猪与自然感染野毒的血清学阳性猪,且特异性强、敏感性高。

改质剂对LATS精炼钢包渣粘度的影响

为减少LATS合金化精炼钢包浸渍罩粘渣,研究了LATS精炼前后钢包渣粘度的变化,并分别用CaO+CaF2,CaO+B2O3及Li2O作为钢包渣的改质剂来降低渣粘度.采用旋转柱体法的粘度测试结果表明,LATS合金化精炼钢包渣的粘度高及LATS处理后渣的粘度进一步升高是造成浸渍罩粘渣的主要原因之一.实验所用3种改质剂均能有效降低钢包渣的粘度.在1500℃无改质剂时LATS处理后钢包渣粘度为6Pa-s,当加入10%CaO+CaF2后渣粘度低于3Pa-s,而加入10%CaO+B2O3或加入4%Li2O都可使渣粘度低于2Pa-s.

乳胶凝集试验与血清中和试验检测猪伪狂犬病血清抗体的比较

应用血清中和试验 (SNT)和伪狂犬病乳胶凝集试验 (LAT)诊断试剂盒对两种伪狂犬病标准阳性血清、伪狂犬病病毒 (PRV)高免血清及 6 0份被检猪血清进行了PRV抗体效价测定和相关性分析 ,两种方法测得的抗体效价之间呈强相关性 (r=0 .96 ) ,且LAT效价比SNT一般高出一个滴度 ;对来自 35个猪场的 414份猪血清进行了PRV抗体检测 ,并与SNT检测结果进行了对比 ,结果在SNT检测为阳性的 171份血清中 ,LAT检出阳性 16 8份 ,阳性符合率为 98.2 % (16 8/ 171) ,在SNT检测为阴性的 2 43份血清中 ,LAT检出 5 2份血清为PRV抗体阳性 ;对猪瘟、口蹄疫 (O型 )、猪细小病毒、猪衣原体四种标准阳性血清和来自无伪狂犬病猪场的 18头健康猪血清进行检测 ,检测结果均为阴性 ,其符合率为 10 0 % (2 2 / 2 2 )。结果表明 ,两种方法检测结果符合率高 ,特异性强 ,LAT比SNT敏感、快速简便和实用。

重组M蛋白-乳胶凝集试验检测PRRS病毒血清抗体的研究

利用纯化的 PRRS病毒重组 M蛋白致敏乳胶制成乳胶抗原 ,成功地建立了一种检测 PRRS病毒血清抗体的乳胶凝集试验 (L AT)诊断方法。用制备的乳胶 M抗原分别检测猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病、猪弓形体病、猪衣原体病、猪乙型脑炎阳性血清 ,结果均为阴性 ,无交叉反应 ,说明建立的 L AT方法具有良好的特异性。用建立的乳胶凝集试验方法与国外IDEXX公司 PRRS病毒抗体检测试剂盒同时对 76份猪血清样本进行检测 ,结果表明建立的 L AT方法的特异性和敏感性均为 95 % ,两种方法的总符合率为 87% ,检出率基本一致。研究结果表明 L AT方法具有操作简便、快速、敏感性高、特异性强、价格低廉且可用于现场检测等优点 ,是一种适合基层兽医单位用于

油罐火灾灭火指挥计算机模拟训练系统

介绍了一种基于网络环境下的油罐火灾灭火指挥计算机模拟训练系统的体系结构及其功能特点 ,为消防灭火指挥训练手段的改革提供了一种具体实现。

CD59在T细胞LAT脂筏内移位及跨膜信号转导中的作用

目的用前期构建好的LAT-EGFP质粒转染Jurkat细胞,探讨单克隆抗体交联CD59前后CD59与接头蛋白分子LAT在Jurkat细胞活化转导中的相关作用。方法采用电转染的方法转染Jurkat细胞,抗体交联CD59后共聚焦显微镜下观察细胞膜上LAT-EGFP分子分布的变化;利用噻唑蓝(MTT)比色法检测CD59抗体交联前后Jurkat细胞的增殖效应;用Western blot技术检测CD59抗体交联前后LAT磷酸化情况。结果共聚焦显微镜下可观察到CD59抗体交联后LAT-EGFP由散在分布为主变为点簇状分布为主;CD59抗体交联刺激组Jurkat细胞增殖能力增加;Western blot结果表明CD59抗体交联后LAT磷酸化水平增加。结论抗体交联CD59能使接头蛋白分子LAT进入脂筏,并增强T细胞信号转导效应。

乳胶凝集试验检测H5亚型禽流感病毒血凝素抗体的研究

利用原核表达并经过纯化的H5亚型禽流感病毒的血凝素蛋白做为抗原,经碳二亚胺(EDAC)将表达产物和羧基化的乳胶共价偶联,并对偶联乳胶的蛋白量和偶联时间进行合理选择,建立H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白乳胶凝集试验的方法。临床检测H5亚型禽流感病毒实验免疫鸡血清126份,同血凝抑制试验相比,其敏感性为87.03%,特异性为88.8%,两者的符合率为87.30%。结果证明建立的方法可用于H5亚型禽流感抗体水平监测和流行病学调查。