NapA蛋白诱导巨噬细胞分泌趋化因子单核细胞趋化蛋白1和白细胞介素8的机制

目的:研究幽门螺杆菌NapA蛋白诱导巨噬细胞分泌趋化因子单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)和白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)的机制。方法:利用NapA蛋白处理巨噬细胞,然后使用ELISA法检测上清中MCP-1和IL-8的表达量。使用C29、ST2825、SB203580、SP600125以及PDTC和巨噬细胞预先共孵育1 h,分别抑制Toll样受体2(toll-like receptors 2,TLR2)、髓样分化因子(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、核糖核酸酶p蛋白亚基p38(ribonuclease p-protein subunit p38,p38)、应激活化蛋白激酶(c-Jun N-terminal kinase,c-Jun)和核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的活性,然后再加入NapA蛋白孵育4 h,收集上清并检查其中MCP-1和IL-8的表达量。结果:NapA蛋白刺激巨噬细胞后,MCP-1和IL-8的表达量明显高于未处理组。利用抑制剂C29抑制TLR2的活性,NapA蛋白诱导的MCP-1和IL-8表达量降低。使用ST2825、PDTC以及SB203580分别抑制MyD88、NF-κB以及p38的活性,能够降低NapA蛋白诱导巨噬细胞分泌MCP-1和IL-8的能力,但是抑制c-Jun不影响NapA蛋白诱导巨噬细胞分泌MCP-1和IL-8。结论:幽门螺杆菌NapA蛋白通过TLR2/MyD88/NF-κB通路诱导巨噬细胞分泌MCP-1和IL-8。

植物乳杆菌P8对低蛋白日粮蛋鸡生产性能、蛋品质、营养物质表观代谢率、血清免疫和抗氧化指标的影响

为探究植物乳杆菌P8对低蛋白日粮蛋鸡生产性能、蛋品质、营养物质代谢率、血清免疫和抗氧化指标的影响,试验选取31周龄体重相近、健康的海兰褐蛋鸡144只,随机分为3组,每组6个重复,每个重复8只。对照组饲喂基础日粮(粗蛋白水平为16%);低蛋白组饲喂粗蛋白水平为12%的日粮,并补充4种必需氨基酸至对照组水平;植物乳杆菌P8组饲喂添加1×1011 cfu/kg植物乳杆菌P8的低蛋白日粮。预试期1周,正试期8周。结果显示:与对照组相比,低蛋白组蛋鸡平均日采食量、产蛋率、产蛋量和平均蛋重显著降低(P<0.05);植物乳杆菌P8显著改善低蛋白日粮饲喂蛋鸡的产蛋率、产蛋量、哈氏单位、干物质和粗蛋白表观代谢率(P<0.05)。此外,低蛋白组蛋鸡血清白细胞介素-1β、白细胞介素-6、丙二醛含量显著高于对照组(P<0.05),谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶活性显著低于对照组(P<0.05);植物乳杆菌P8可显著降低低蛋白组蛋鸡血清白细胞介素-1β、白细胞介素-6和丙二醛水平(P<0.05),显著提高血清过氧化氢酶活性(P<0.05)。综上所述,植物乳杆菌P8可在一定程度上改善过低粗蛋白水平导致的蛋鸡生产性能和营养物质表观代谢率的降低,提高蛋鸡血清抗氧化和免疫功能。

细胞周期蛋白激酶抑制调控蛋白p21在HHV-8病毒裂解复制周期的作用

目的研究细胞周期蛋白激酶抑制调控蛋白p21对人类疱疹病毒8型(human herpesvirus 8,HHV-8)病毒裂解复制周期的影响。方法组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂SAHA预处理后,倒置荧光显微镜观察红色荧光蛋白(RFP)阳性的iSLK.219细胞数,实时定量PCR检测TREx-K-Rta BCBL-1细胞中HHV-8病毒相关基因的mRNA水平。脂质体转染p21-siRNA后,免疫印迹法检测iSLK.219和TREx-K-Rta BCBL-1细胞中p21蛋白表达,计算RFP阳性iSLK.219细胞百分率,检测TREx-K-Rta BCBL-1细胞中ORF50和PAN的mRNA水平,CCK-8法和台盼蓝染色观察细胞存活情况。结果SAHA显著增强iSLK.219细胞RFP阳性率、TREx-K-Rta BCBL-1细胞中HHV-8裂解复制周期相关基因ORF50、PAN及K8.1的mRNA水平和p21蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。siRNA沉默p21后,iSLK.219细胞RFP阳性率、TREx-K-Rta BCBL-1细胞中HHV-8裂解复制周期相关基因ORF50和PAN mRNA水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),且保护SAHA介导的TREx-K-Rta BCBL-1细胞死亡。结论抑制HDAC活性通过调控p21促进HHV-8病毒裂解复制。

钙卫蛋白S100 A8/A9对肺炎支原体肺炎患儿病情严重程度的预测价值

目的探讨钙卫蛋白S100 A8/A9复合物在重症肺炎支原体肺炎(severe Mycoplasma pneumoniae pneumonia,SMPP)患儿病情评估中的作用。方法前瞻性纳入136例MPP患儿与30例健康对照儿童。根据病情严重程度,将MPP组患儿分为轻症亚组(n=40)和SMPP亚组(n=96)。比较两组及两亚组间S100 A8/A9复合物及相关炎症因子的水平差异,并分析S100 A8/A9在评估MPP严重程度中的作用。结果MPP组患儿S100 A8/A9显著高于健康对照组,其中SMPP组升高更显著(P<0.05)。多因素logistic回归分析发现血清C反应蛋白(C reactive protein,CRP)及S100 A8/A9升高与SMPP密切相关(P<0.05)。受试者操作特征曲线分析结果显示血清S100 A8/A9联合CRP预测SMPP的曲线下面积为0.904,高于S100 A8/A9、CRP单独预测SMPP的AUC(P<0.05),其特异度为0.718,灵敏度为0.952。结论S100 A8/A9与MPP病情严重程度密切相关,S100 A8/A9联合CRP更有利于判断MPP患儿的病情严重程度。

亚油酸诱导植物乳杆菌p-8产生共轭亚油酸的蛋白组和类组蛋白乙酰化分析

研究亚油酸(linoleic acid,LA)诱导下植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)p-8的蛋白组和类组蛋白乙酰化水平差异,探究共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)产生的机制。结果表明,LA的最佳诱导质量浓度为1 mg/mL,在此质量浓度条件下,蛋白质组学分析发现,烯酰-酰基载体蛋白还原酶、酰基载体蛋白等脂肪酸合成的关键蛋白因子下调,脂肪酸合成下调,乙酰基转移酶水平上调。Western blot结合体外添加NaAc实验表明,乙酰辅酶A含量增加导致类组蛋白乙酰化水平提升。实时聚合酶链式反应检测显示,添加LA和NaAc使CLA相关酶、转录调控因子和Sigma因子的mRNA表达升高,CLA含量也提高。相关性分析得出,乙酰辅酶A与LA水合酶转录水平和CLA含量之间呈显著正相关,揭示乙酰辅酶A和乙酰基转移酶含量上调导致类组蛋白乙酰化加强而上调CLA合成。结果为分子改良或科学调控乳酸菌以提高CLA转化率奠定了基础。

植物ATG8结合蛋白

ATG8(自噬相关蛋白8)结合蛋白通过ATG8相互作用基序(ATG8 interaction motif,AIM)或泛素相互作用基序(ubiquitin interaction motif,UIM)与ATG8相互作用,在自噬、选择性自噬和非自噬过程中起关键作用。ATG8结合蛋白在酵母和哺乳动物研究中取得了巨大进展,但在植物领域仍然滞后。本文首先概括了植物ATG8蛋白结构及特征,其次,重点阐述了作为植物选择性自噬受体的ATG8结合蛋白的结构和功能,最后,总结了参与自噬小体闭合、转运和人工合成ATG8结合蛋白研究状况。本文结合最新研究,系统总结了目前发现的植物ATG8结合蛋白结构和功能,以期为植物选择性自噬和自噬的研究提供新思路。

斑马鱼角蛋白8基因克隆、组织分布及时空表达分析

研究旨在分析斑马鱼(Danio rerio)角蛋白8(Keratin 8,Krt8)基因的分子特性,组织分布及病原菌感染后的动态表达模式。通过克隆斑马鱼Krt8基因CDS序列,进行生物信息学分析。利用实时荧光定量PCR技术,研究Krt8基因在健康斑马鱼肠道、肝脏、肾脏和皮肤组织中的表达分布,并分析了海藻希瓦氏菌(Shewanella algae)感染后,在各组织中的时空表达模式。研究结果显示,斑马鱼Krt8基因CDS区序列编码一个含520个氨基酸的蛋白质,其分子量为57.76 kDa,且具有14个磷酸化位点。对构建的系统发育进化树分析表明,斑马鱼Krt8的氨基酸序列与安水金线鲃(Sinocyclocheilus anshuiensis)的亲缘关系最近。此外,Krt8基因在斑马鱼肠道、肝脏、肾脏和皮肤组织中均有分布,其中在肝脏中的表达水平最高。海藻希瓦氏菌感染后,Krt8基因在斑马鱼检测组织中呈现差异表达,其中在肠道中表达下调,在肝脏和肾脏组织中呈现先升高再下降的趋势。综上所述,斑马鱼Krt8可能参与海藻希瓦氏菌感染引起的机体免疫应答或病理生理过程,为进一步研究Krt8蛋白的功能和作用机理提供参考资料。

皮肤黑素瘤中细胞分裂周期相关蛋白8的表达水平及功能学分析

目的基于生物信息学方法分析CDCA8在皮肤黑素瘤组织中的表达水平及其相关生物学功能。方法TCGA数据库中下载皮肤黑素瘤数据集,分析CDCA8在皮肤黑素瘤组织中的表达,K-M曲线分析皮肤黑素瘤组织中CDCA8表达水平与总体生存率的关系,UALCAN数据库筛选皮肤黑素瘤中与CDCA8的共表达基因,并对共表达基因进行GO和KEGG富集分析。TIMER数据库分析皮肤黑素瘤组织中CDCA8与免疫细胞浸润的相关性。HPA数据库验证CDCA8在皮肤黑素瘤组织及正常组织中的表达差异。结果与正常组织相比,CDCA8在皮肤黑素瘤组织中明显高表达(P<0.5);与皮肤黑素瘤TP-53野生型相比,CDCA8表达水平在TP-53突变型中明显升高(P<0.05)。皮肤黑素瘤中CDCA8高表达组总体生存率显著低于CDCA8低表达组(HR=1.500,P=0.005)。皮肤黑素瘤组织中CDCA8共表达基因主要富集于细胞核、细胞质、细胞分裂、细胞周期、DNA修复、蛋白结合、RNA结合、细胞周期、DNA复制及细胞核质转运等过程。皮肤黑素瘤中CDCA8与B细胞(r=0.166,P<0.001)、CD8^(+)T细胞(r=0.176,P<0.001)、中性粒细胞(r=0.193,P<0.001)及树突状细胞(r=0.230,P<0.001)浸润程度存在显著正相关性。免疫组化显示CDCA8在皮肤黑素瘤组织中均呈现高强度表达,而在正常组织中无表达或低表达。结论CDCA8在皮肤黑素瘤组织中呈现高表达状态,与患者不良预后显著相关,CDCA8可能通过调控细胞周期及免疫细胞浸润参与皮肤黑素瘤的发病机制。

老年乳腺癌患者癌组织中YTHDF1、E2F8蛋白表达变化及与预后的关系

目的 探讨N6-甲基腺苷RNA结合蛋白1(YTHDF1)、E2F8转录因子8(E2F8)蛋白表达与乳腺癌患者临床病理特征及预后的关系。方法 选取46例老年乳腺癌患者,术中取癌组织和癌旁组织,用免疫组化染色法检测组织中YTHDF1、E2F8蛋白表达。随访患者并记录随访期间肿瘤复发、转移及死亡时间。用Spearman秩相关分析乳腺癌组织YTHDF1与E2F8蛋白表达的相关性;Kaplan-Meier法分析YTHDF1、E2F8蛋白表达与患者无进展生存预后的关系;Cox回归分析老年乳腺癌患者无进展生存预后的影响因素。结果 乳腺癌组织中YTHDF1、E2F8蛋白阳性表达率高于癌旁组织(P均<0.05),二者蛋白表达呈正相关(r=0.706,P<0.05)。TNM分期Ⅱ期、肿瘤最大径>2 cm、合并淋巴结转移老年乳腺癌患者癌组织中YTHDF1、E2F8蛋白阳性表达率高于TNM分期Ⅰ期、肿瘤最大径≤2 cm、无淋巴结转移的癌组织(P均<0.05)。32例患者发生肿瘤进展,YTHDF1、E2F8蛋白表达阳性患者5年无进展生存率低于其蛋白表达阴性患者(P均<0.05)。TNM分期Ⅱ期、合并淋巴结转移、YTHDF1蛋白阳性表达、E2F8蛋白阳性表达是老年乳腺癌患者无进展生存预后的独立危险因素(P均<0.05)。结论 老年乳腺癌患者癌组织中YTHDF1、E2F8蛋白高表达,且与老年乳腺癌患者肿瘤TNM分期、肿瘤最大径、淋巴结转移有关,是患者无进展生存预后的独立危险因素。

高迁移率族蛋白B1对甲苯二异氰酸酯诱导的支气管上皮细胞中性粒细胞趋化因子CXCL12、IL-8表达的影响

目的通过体外实验探讨高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)在甲苯二异氰酸酯(toluene diisocyanate,TDI)所致的职业性哮喘中趋化中性粒细胞的作用机制。方法制备TDI-人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)偶联物(TDI-HSA),并通过Gutmann法与BCA法分别测定偶联物中TDI及HSA含量。分别以0、40、80、120 mg/L TDI-HSA染毒人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBECs)12 h,ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、趋化因子12(C-X-C motif chemokine 12,CXCL12)的水平;Western blot法检测细胞中HMGB1、CXCL12及核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)相关蛋白的表达;活细胞荧光探针法检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平;免疫荧光法观察HMGB1的核转位情况。使用不同浓度(100、200 mmol/L)甘草素(glycyrrhizin,GL)预处理HBECs细胞24 h抑制HMGB1后,继续用TDI-HSA染毒12 h,检测细胞培养上清中IL-8水平,HMGB1、CXCL12及NF-κB相关蛋白表达,ROS释放水平及HMGB1的核转位情况。结果不同浓度TDI-HSA染毒HBECs 12 h后,随着染毒浓度的升高,HBECs细胞内HMGB1发生明显核转位,细胞中ROS和细胞上清中IL-8水平明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,120 mg/L染毒组HBECs细胞HMGB1、磷酸化P65蛋白表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。以含有不同浓度GL的培养基联合120 mg/L TDI-HSA处理HBECs细胞12 h后,与对照组相比,GL作用于HBECs细胞可显著抑制TDI-HSA导致的HMGB1的核转位,抑制HBECs细胞中的ROS和上清液中的IL-8水平的升高,显著减少细胞中HMGB1、磷酸化P65蛋白的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TDI可通过增加HBECs细胞HMGB1蛋白表达和核转位,激活NF-κB,促进IL-8的释放,不影响CXCL12的表达。GL可通过降低HMGB1表达,抑制NF-κB活化,减少IL-8释放水平。

三结构域蛋白8、Ras相关蛋白35、多聚ADP核糖聚合酶1在子宫内膜癌组织中的表达及检测临床意义

目的:探讨三结构域蛋白8(TRIM8)、Ras相关蛋白35(Rab35)、多聚ADP核糖聚合酶1(PARP-1)在子宫内膜癌(EC)组织中的表达及检测临床意义。方法:选择75例EC患者为研究对象,取手术切除的EC组织及癌旁正常子宫内膜组织,以免疫组织化学法检测EC组织和癌旁组织中TRIM8、Rab35、PARP-1蛋白表达情况,并结合患者临床病理因素分析其与临床病理特征的关系,随访5年,记录EC患者生存率,并分析EC患者预后影响因素。结果:Rab35、PARP-1蛋白在EC组织和癌旁组织中阳性表达率分别为71.00%和35.00%、74.00%和43.00%,TRIM8蛋白阳性表达率分别为30.00%和69.00%(均P<0.01)。EC组织中Rab35与PARP-1为正相关性,Rab35和PARP-1与TRIM8表达为负相关性(r=0.542、-0.461、-0.461,均P<0.05)。Rab35阳性患者5年生存率55.17%低于阴性患者70.57%,PARP-1阳性患者5年生存率65.96%低于阴性患者79.24%,TRIM8阳性患者5年生存率93.33%高于阴性患者72.73%(均P<0.05)。FIGO分期Ⅲ-Ⅳ期、肌层浸润深度≥1/2和PARP-1、TRIM8、Rab35表达异常为影响EC患者预后的危险因素(均P<0.05)。结论:子宫内膜癌组织PARP-1、Rab35表达升高、TRIM8表达降低,三者表达变化与子宫内膜癌的发生、发展有显著相关性。

固定正畸矫治80例病人唾液基质金属蛋白酶8和基质金属蛋白酶9的水平变化

目的 探究固定正畸矫治病人唾液基质金属蛋白酶8(MMP-8)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平的变化及临床意义。方法 选取2019年6月至2021年12月于保定市第二医院接受固定正畸矫治成年病人80例及健康受试者40例为研究对象。对病人固定矫治前(T1)、固定矫治1周(T2)、固定矫治1个月(T3)及健康受试者探诊出血(BOP)、菌斑指数(PLI)进行检测;收集健康受试者及病人T1、T2、T3时期唾液,采用ELISA检测唾液中MMP-8、MMP-9水平;流式细胞术对唾液白细胞含量进行检测;分别对MMP-8、MMP-9与牙龈BOP相关性进行分析;分离唾液白细胞,检测白细胞MMP-8、MMP-9表达水平变化。结果T2、T3时病人BOP[(21.36±8.79)%、(13.06±5.80)%]、PLI[(2.53±0.43)分、(1.89±0.39)分]及唾液中MMP-8[(0.43±0.11)μg/L、(0.32±0.10)μg/L]、MMP-9[(3.64±0.76)μg/L、(2.02±0.50)μg/L]、白细胞水平[(17 893.71±505.49)个、(8 532.18±421.89)个],显著高于T1水平[(5.05±2.11)%、(0.71±0.25)分、(0.16±0.08)μg/L、(0.25±0.13)μg/L、(2 308.66±178.04)个,P<0.05];唾液MMP-8、MMP-9水平与牙龈BOP、PLI呈正相关;进一步发现T2、T3时白细胞MMP-8、MMP-9表达水平显著高于T1水平(P<0.05)。受试者操作特征(ROC)曲线显示唾液MMP-8及MMP-9水平能较好预测牙龈炎程度。结论 正畸病人唾液MMP-8、MMP-9水平与牙龈炎病情呈正相关,唾液MMP-8、MMP-9可作为评估正畸病人牙龈炎的潜在生物标志物。

蛋白酶体20S亚基β8调控丝裂原活化蛋白激酶激酶/细胞外信号调节激酶通路对肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探究蛋白酶体20S亚基β8(PSMB8)对肾透明细胞癌(ccRCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以及是否通过调控丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路发挥其作用。方法采用癌症基因组图谱数据库分析ccRCC与正常组织PSMB8 mRNA的表达水平,并通过实时荧光定量PCR、Western blot和免疫组织化学染色等方法进一步检测PSMB8在ccRCC组织和细胞中的表达情况。构建稳定过表达和敲减PSMB8的细胞株,分别采用CCK-8法和平板克隆实验检测细胞的增殖能力,划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭的能力。对PSMB8共表达基因进行京都基因与基因组百科全书通路富集分析,Western blot检测MEK/ERK通路相关蛋白的磷酸化水平,并加用ERK激动剂C16-PAF处理进行细胞功能学挽救实验。结果与正常组织比较,PSMB8 mRNA和蛋白在ccRCC组织中呈高表达(P均<0.001),且与临床患者的TNM分期显著相关(P<0.001);与阴性对照组比较,过表达PSMB8可以促进786-O、ACHN细胞的增殖(P=0.021,P=0.039)、迁移和侵袭(P均<0.001),敲减PSMB8可以抑制786-O、ACHN细胞的增殖(P=0.022,P=0.005)、迁移和侵袭(P均<0.001);PSMB8共表达基因通路富集分析提示其可能与丝裂原活化蛋白激酶通路相关(P<0.001);敲减PSMB8后786-O和ACHN细胞MEK1/2(P=0.017,P=0.016)、ERK1/2(P=0.010,P=0.040)蛋白磷酸化水平及ERK下游因子c-Myc(P=0.043,P=0.038)、c-Fos(P=0.025,P=0.008)和CyclinD1(P=0.006,P=0.047)转录水平均下调;与ERK激动剂C16-PAF处理组比较,敲减PSMB8+C16-PAF组明显抑制786-O、ACHN细胞的增殖(P=0.003,P=0.002)、迁移和侵袭能力(P均<0.001)。结论PSMB8通过激活MEK/ERK信号通路从而促进ccRCC细胞的增殖、迁移及侵袭。

肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子1在小鼠急性肝损伤中的作用及机制

目的探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子1(TNFAIP8L1)在小鼠急性肝损伤中的作用及机制。方法选择C57BL/6J雄性野生型(WT)小鼠和C57BL/6J雌性TNFAIP8L1^(+/-)小鼠杂交繁殖的第2代TNFAIP8L1^(+/-)小鼠和WT小鼠,进一步自交繁殖出第3代雄性TNFAIP8L1^(-/-)小鼠和第3代WT雄性小鼠。分别取5只正常第3代雄性WT小鼠和5只正常第3代雄性TNFAIP8L1^(-/-)小鼠,检测比较2种正常小鼠的血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,苏木精-伊红(HE)染色观察2种正常小鼠肝组织中炎症细胞浸润及细胞坏死情况,采用流式细胞术检测2种正常小鼠肝组织髓系细胞亚群中性粒细胞(Neu)、嗜酸性粒细胞(EOS)、树突状细胞(DC)、骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs)、骨髓来源的单核细胞(BMNCs)所占百分比。另取5只第3代雄性WT小鼠和4只第3代雄性TNFAIP8L1^(-/-)小鼠,采用脂多糖(LPS)/D-半乳糖胺(D-Gal)诱导制备急性肝损伤小鼠模型,24 h后采取上述方法检测比较2种急性肝损伤小鼠血清ALT水平,观察2种急性肝损伤小鼠肝组织中炎症细胞浸润及细胞坏死情况,并检测2种急性肝损伤小鼠肝组织髓系细胞亚群Neu、EOS、DC、BMDMs、BMNCs所占百分比。结果正常WT小鼠和TNFAIP8L1^(-/-)组小鼠肝组织中髓系细胞亚群Neu、EOS、DC、BMDMs、BMNCs百分比及血清ALT水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。正常WT小鼠和TNFAIP8L1^(-/-)小鼠的肝组织HE染色结果均显示肝小叶结构完整清晰,肝细胞形态正常、排列整齐,无明显炎症细胞浸润及细胞坏死。急性肝损伤24 h后,TNFAIP8L1^(-/-)小鼠肝组织髓系细胞亚群中Neu、BMNCs百分比及血清ALT水平显著高于WT小鼠(P<0.05);2组小鼠肝组织髓系细胞亚群EOS、DC、BMDMs百分比比较差异无统计学意义(P>0.05)。急性肝损伤WT小鼠肝组织中肝小叶结构模糊,肝细胞肿胀、散在空泡样脂肪变性,有少量炎症细胞浸润。急性肝损伤TNFAIP8L1^(-/-)小鼠肝组织中肝小叶结构几乎不存在,肝细胞损伤严重且大量坏死,并有大量炎症细胞浸润。结论TNFAIP8L1基因缺陷不影响小鼠肝组织中髓系细胞的发育和小鼠肝脏稳态。TNFAIP8L1在急性肝损伤的发生发展过程中起抑制作用。TNFAIP8L1基因缺陷加重LPS/D-Gal诱导的急性肝损伤,有可能是通过增加Neu和BMNCs浸润而招募其他类型的免疫细胞浸润入肝组织,从而加重肝细胞的坏死。

血管生成素样蛋白8在心血管疾病发病中作用的研究进展

血管生成素样蛋白8(ANGPTL8)是由肝脏和脂肪组织合成、分泌的一种糖蛋白,能够促进血管重塑、调节炎性反应,并通过这些机制参与冠心病、高血压、主动脉瘤、病理性心肌肥厚等多种心血管疾病的发生与发展,有望成为心血管疾病新的预防和治疗靶点。

解整合素-金属蛋白酶8对急性酒精性肝损伤小鼠中肝细胞增殖与凋亡的调控作用

目的 探讨解整合素-金属蛋白酶8(A disintegrin and metalloprotease 8,ADAM8)对急性酒精性肝损伤小鼠中肝细胞增殖与凋亡的影响。方法 选择6~8周龄的KM小鼠30只,随机分为5组:正常对照组(n=6)、模型组(n=6)、ADAM8-sgRNA1组(n=6)、ADAM8-sgRNA2组(n=6)、ADAM8-sgRNA3组(n=6)。正常对照组小鼠不做任何处理,质粒组小鼠分别尾静脉注射3种质粒,模型组小鼠尾静脉注射等量生理盐水;将模型组和质粒组小鼠常规喂养3 d,通过一次经口灌胃50%酒精14 mL/kg诱导小鼠急性肝损伤。检测各组小鼠AST、ALT水平,HE染色观察其病理学变化,PAS染色观察肝组织糖原变化;Western blotting检测ADAM8、TNF-α、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、BCL2关联X蛋白(BCL2-associated X protein, Bax)的表达水平。结果 与模型组相比,ADAM8-sgRNA2组ADAM8的表达水平明显降低(P<0.05);与正常对照组相比,模型组PCNA的表达水平明显降低(P<0.001),TNF-α、Bax的表达水平明显升高(P<0.01);与模型组相比,ADAM8-sgRNA2组PCNA表达水平显著升高(P<0.001),TNF-α、Bax表达水平显著下降(P<0.01)。与正常对照组相比,模型组AST、ALT指标显著升高(P<0.05);与模型组相比,ADAM8-sgRNA2组AST、ALT指标显著下降(P<0.05)。HE染色和PAS染色结果显示:与正常对照组相比,模型组肝损伤明显,坏死积分显著升高(P<0.05),糖原含量显著减少(P<0.001);与模型组相比,ADAM8-sgRNA2组坏死积分明显降低(P<0.05),ADAM8-sgRNA2组糖原含量明显上升(P<0.001)。结论 ADAM8过表达可抑制急性酒精性肝损伤小鼠中肝细胞的增殖并促进肝细胞的凋亡。

血管生成素样蛋白8敲除减轻脂多糖诱导的肝脏脂质沉积

目的 探索血管生成素样蛋白8(ANGPTL8)在脂多糖(LPS)诱导的肝脏脂质沉积中的作用及机制。方法 选取6~8周雄性野生型和ANGPTL8敲除小鼠,通过腹腔注射LPS(10 mg/kg)诱导脓毒症小鼠模型。荧光定量PCR(qPCR)检测肝脏组织和免疫荧光检测HepG2细胞中ANGPTL8的表达;分别用谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)和丙二醛(MDA)试剂盒检测血清ALT、AST水平及肝脏组织TG、MDA含量;HE染色观察肝脏组织的病理变化;油红O染色分析肝组织脂滴形成;TUNEL检测肝细胞凋亡;RNA-seq分析肝脏组织差异表达基因,并通过qPCR及Western blot进一步验证差异基因。结果 LPS刺激小鼠48 h后,肝脏ANGPTL8明显上调;与野生型小鼠相比,ANGPTL8敲除小鼠肝脏脂质沉积、脂肪变性和细胞凋亡显著减轻,血清中ALT、AST以及肝脏TG、MDA的水平显著降低;ANGPTL8敲除可上调LPS诱导的肝脏中小窝蛋白1(CAV1)的表达。结论 LPS促进肝脏组织ANGPTL8的表达和分泌,ANGPTL8通过抑制CAV1促进肝脏脂质沉积和过氧化,从而加剧LPS诱导的肝脏脂质沉积。

结直肠癌组织中ACTL8、p38蛋白表达与患者临床病理特征的相关性及预后预测价值分析

目的探讨结直肠癌(CRC)组织中肌动蛋白样蛋白8(ACTL8)、p38蛋白表达与患者临床病理特征之间的关联及其对患者预后的预测价值。方法选择2021年1月至2022年6月在亳州市人民医院接受根治性手术治疗的78例CRC患者作为研究对象,采用免疫组织化学法分析患者CRC组织及癌旁组织中ACTL8、p38蛋白的表达情况,并探讨其与患者临床病理特征之间的相关性。对入组患者进行为期1年的随访,观察患者预后情况,并采用多因素logistic回归模型分析CRC组织中ACTL8、p38蛋白表达情况对患者预后的预测价值。结果CRC组织中ACTL8、p38蛋白阳性表达率均显著高于癌旁组织(P均<0.05)。不同性别、年龄、合并症的CRC患者组织中ACTL8、p38蛋白表达水平的差异均无统计学意义(P均>0.05)。临床分期为Ⅲ期、肿瘤分化程度为低分化、肿瘤直径≥5 cm、有淋巴结转移的患者组织中ACTL8、p38蛋白阳性表达率均分别高于临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤分化程度为中/高分化、肿瘤直径<5 cm、无淋巴结转移者(P均<0.05)。CRC患者的预后不良发生率为29.49%。预后不良患者CRC组织中ACTL8、p38蛋白阳性表达率均显著高于预后良好者;ACTL8、p38蛋白阳性表达患者中预后不良发生率均分别高于阴性表达者(P均<0.05)。多因素logistic回归模型分析结果显示,ACTL8、p38蛋白阳性表达均是影响CRC患者预后的独立危险因素(OR=1.875、2.154,P均<0.05)。结论ACTL8、p38蛋白均在CRC组织中高表达,且两者阳性表达率均与患者的临床分期、肿瘤分化程度、是否发生淋巴结转移有关。ACTL8、p38蛋白阳性表达均是影响患者预后的独立危险因素。

抑郁症180例血清S100钙结合蛋白A8和S100钙结合蛋白A9表达与抑郁程度的相关性分析

目的探讨抑郁症病人血清S100钙结合蛋白A(S100A)8、S100A9表达水平,以及二者与抑郁程度的相关性。方法选取中国人民解放军空军第九八六医院2019年1月至2022年10月收治的180例抑郁症病人作为研究组,另外选取174例同期体检健康的志愿者作为对照组,采用酶联免疫吸附测定检测血清S100A8、S100A9水平,采用汉密尔顿抑郁量表(HAMD-17)评估抑郁症病人的抑郁程度,其中7~17分判定为轻度抑郁病人(78例)、18~24分为中度抑郁病人(53例)、>24分为重度抑郁病人(49例),采用Spearman法分析血清S100A8和S100A9与病人抑郁程度的相关性。Pearson法分析血清S100A8和S100A9与炎症因子的相关性。logistic回归分析影响病人抑郁程度的因素。结果研究组血清S100A8[(6.57±1.74)μg/L]、S100A9[(7.36±2.07)μg/L]以及炎症因子白细胞介素(IL)-6[(15.37±3.56)ng/L]、IL-1β[(9.57±2.89)ng/L]、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)[(24.24±5.28)ng/L]水平显著高于对照组[(3.98±1.18)μg/L、(4.14±1.25)μg/L、(12.98±3.86)ng/L、(6.98±1.45)ng/L、(18.45±4.19)ng/L],差异有统计学意义(P<0.05);研究组病人抑郁症家族史、体力活动时间与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);血清S100A8和S100A9水平在轻、中、重度抑郁病人中依次升高,差异有统计学意义(P<0.05);经Spearman法分析发现,血清S100A8和S100A9及IL-6、IL-1β、TNF-α均与病人抑郁程度呈正相关(r=0.54、0.44、0.41、0.44、0.51,P<0.05);经Pearson法分析,血清S100A8水平分别与IL-6、IL-1β、TNF-α呈正相关(r=0.35、0.41、0.45,P<0.05),血清S100A9水平分别与IL-6、IL-1β、TNF-α呈正相关(r=0.37、0.38、0.44,P<0.05)。logistic回归分析,结果显示S100A8、S100A9、IL-6、IL-1β、TNF-α是抑郁症病人抑郁程度的影响因素(P<0.05)。结论S100A8、S100A9在抑郁症病人血清中表达上调,与病人的抑郁程度密切相关。

外泌体递送角蛋白8小干扰RNA调控下咽癌细胞对5-FU敏感性研究

目的探究下咽癌患者血清源性外泌体中角蛋白8(KRT8)小干扰RNA(si-KRT8)对人咽鳞状细胞癌FaDu细胞株5-氟脲嘧啶(5-FU)化疗敏感性的影响和作用机制。方法收集下咽癌患者肿瘤组织以及治疗后耐药患者的血清、肿瘤组织以及癌旁组织。构建FaDu的5-FU耐药细胞株(FaDu/R)用于后续实验。超速梯度离心法分离患者血清中的外泌体并利用透射电镜及蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)技术进行鉴定,利用电转染技术将si-KRT8封装至外泌体(Exosome@si-KRT8)中,后续用于处理细胞。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及WB方法检测KRT8分别在不同组织、电转染后外泌体及不同处理条件下FaDu细胞中的表达水平。CCK-8、原位末端转移酶标记技术及迁移侵袭技术和WB检测Exosome@si-KRT8对FaDu/R细胞活力、凋亡及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。结果下咽癌耐药组织及FaDu/R细胞中的KRT8表达水平相较于癌旁组织和肿瘤组织以及正常FaDu细胞均升高(t=15.79,P<0.01)。分离的患者血清外泌体呈现双层膜结构,且CD63和TSG101蛋白均表达,电转染si-KRT8后,外泌体中KRT8表达量下降(t=6.70,P<0.01)。Exosome@si-KRT8能够抑制FaDu/R细胞中KRT8的蛋白表达水平(t=123.50,P<0.01)。与5-FU组及5-FU+Exosome组相比,Exosome@si-KRT8能够抑制FaDu/R细胞的活力(t=17.07,P<0.01),促进其凋亡水平,并且抑制FaDu/R细胞耐药相关蛋白的表达(t P-gp=103.20,t MDR1=238.60,P<0.01)。此外,Exosome@si-KRT8还能抑制FaDu/R细胞的迁移侵袭能力(t=42.30,t=122.00,P<0.01),并在促进E-cadherin的表达同时抑制N-cadherin的表达水平(t=130.80,t=83.90,P<0.01)。结论下咽癌患者血清来源的外泌体封装si-KRT8能够增强下咽癌细胞的化疗敏感性,且其作用机制可能与抑制细胞上皮间质转化有关。