HPLC测定千金子和千金子霜中两种泻下成分的含量

目的:对不同地区千金子药材及其炮制品千金子霜中泻下成分续随二萜酯和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯的含量进行测定。方法:采用高效液相色谱法,流动相为甲醇-水(68∶32),kromasil C18柱(150mm×4.6mm,5μm),柱温:40℃,检测波长:280nm。结果:续随二萜酯和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯分别在0.200μg～1.200μg、0.206μg～1.651μg范围内,线性关系良好,r=0.9997和r=0.9999。不同产地千金子中所含两种成分的量略有差别,续随二萜酯的质量分数在0.4508%～0.6251%,多数在0.4500%以上。千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯的质量分数在0.6923%～0.7529%,多数在0.7200%以上。千金子霜中两种成分的质量分数分别在0.1568%～0.2211%(多数在0.2000%以下)和0.2322%～0.2830%(多数在0.3000%以下)。结论:建立了高效液相色谱法测定千金子脂肪油中两种泻下成分含量的方法,该方法准确、可靠,可用于毒性中药千金子及其炮制品的质量控制。

千金子二萜醇衍生物抗非小细胞肺癌的作用及机制

目的:非小细胞肺癌占所有肺癌的85%,具有较高的发病率和病死率。非小细胞肺癌的治疗研究和新药开发迫在眉睫。本研究主要探讨千金子二萜醇衍生物的活性及其抑制非小细胞肺癌细胞生长的作用机制。方法:以千金子二萜醇为原料合成3个千金子二萜醇衍生物,采用磁共振验证结构;采用MTT法检测上述衍生物对非小细胞肺癌细胞(A549和H1299细胞)增殖活力的影响,筛选出活性最佳的化合物进行后续实验。集落形成、划痕、Transwell实验分别用于检测A549和H1299细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR(real-time RT-PCR)和蛋白质印迹法用于检测A549细胞中E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、MMP2等mRNA和蛋白质的表达水平。结果:3个千金子二萜醇衍生物均呈剂量依赖性地抑制A549和H1299细胞的生长,且对正常细胞Beas-2B和16HBE细胞抑制作用较弱,具有一定的选择性杀伤作用。其中C-5苯甲酰化千金子二萜醇的活性最佳,作为后续实验的药物。与对照组相比,处理组的A549和H1299细胞克隆团明显变小且数目明显减少,相对迁移率明显降低,侵袭细胞数目明显减少(均P<0.05)。在mRNA水平上,integrinα2、integrinβ1、MMP2、MMP9、β-catenin、N-cadherin表达均降低,E-cadherin表达增高(均P<0.05);在蛋白质水平上,N-cadherin、β-catenin、MMP2和integrinαV表达均降低,E-cadherin表达增高(均P<0.05)。结论:本研究合成的千金子二萜醇衍生物抑制非小细胞肺癌的活性较好,其中C-5苯甲酰化千金子二萜醇可能通过调控上皮间质转化过程显著抑制非小细胞肺癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力。

千金子二萜醇调控TGF-β1/Smad通路影响肾癌小鼠TNF-α和IL-17表达

目的:探讨千金子二萜醇调控TGF-β1/Smad通路影响肾癌小鼠TNF-α和IL-17表达的机制。方法:建立肾癌移植瘤小鼠,分为模型组、实验组(千金子二萜醇组)和SB-431542组(TGF-β1/Smad通路抑制剂组),实验组小鼠灌胃给予20 mg/kg千金子二萜醇溶液,模型组灌胃给予等体积生理盐水,SB-431542组腹腔注射10 mg/kg SB-431542溶液,计算脾脏指数;Western blot检测Smad2/3和p-Smad2/3蛋白表达;ELISA检测肾癌移植瘤小鼠血清TNF-α和IL-17表达。结果:给药19 d后,与模型组相比,实验组和SB-431542组小鼠脾脏指数降低(P<0.05),Smad2/3蛋白表达升高(P<0.05),p-Smad2/3蛋白表达、TNF-α和IL-17水平明显降低(P<0.01)。结论:千金子二萜醇可通过调控TGF-β1/Smad通路活性降低肾癌小鼠TNF-α和IL-17表达。