蛭龙活血通瘀胶囊通过Lats1/Yap通路改善脑出血诱导的脑损伤

目的:探究蛭龙活血通瘀胶囊在体外脑出血模型中能否减轻脑出血损伤及其机制。方法:40只健康8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组及蛭龙活血通瘀胶囊低(0.35 g/kg)、中(0.7 g/kg)、高(1.4 g/kg)剂量组,采用Ⅶ型胶原酶以小鼠尾状核为目的注射点制备小鼠脑出血模型,24 h后进行神经功能缺失评分,蛭龙活血通瘀胶囊各组连续灌胃给药3 d。另用巨噬细胞条件性Yap基因敲除小鼠同等建立脑出血模型。通过观察改良神经功能缺失评分(mNSS)评估小鼠神经功能,HE染色分析脑组织病理形态及神经细胞损伤情况,免疫组化、Real Time PCR和Western Blot法检测小鼠出血区周围炎症因子及Lats1/Yap通路的基因与蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组神经功能障碍差异有统计学意义,脑组织病理损伤严重;与模型组比较,蛭龙活血通瘀胶囊组和Yap基因敲除小鼠神经功能障碍明显减轻,脑组织病理损伤减轻,炎症因子及Lats1/Yap通路相关信号分子表达下调。结论:蛭龙活血通瘀胶囊可能通过调控Lats1/Yap信号通路减轻脑出血损伤,发挥脑保护作用。

苓桂术甘汤对心肌梗死后小鼠心肌纤维化及Lats1/Yap信号通路的影响

观察苓桂术甘汤对心肌梗死(MI)后小鼠心肌纤维化(MF)及心肌组织大肿瘤抑制激酶1(Lats1)/Yes相关蛋白(Yap)信号通路的影响,探讨其抑制MF的作用和机制。采用冠状动脉左前降支结扎法构建MI后小鼠缺血模型,造模24 h后,连续干预6周。采用小动物超声成像系统检测小鼠左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左室收缩末期内径(LVIDs)、左室舒张末期内径(LVIDd);采用HE及Masson染色观察小鼠心肌组织病理学变化;采用ELISA法检测小鼠血清肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)水平;采用RT-qPCR法检测小鼠心肌组织Lats1、Yap、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA水平;采用Western blot法检测小鼠心肌组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅰ(ColⅠ)、胶原蛋白Ⅲ(ColⅢ)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、Lats1、Yap、磷酸化Yap(phosphorylation-Yap,p-Yap)、细胞核Yap(n-Yap)蛋白表达。与假手术组比较,模型组小鼠LVEF、LVFS水平显著降低,LVIDd、LVIDs水平显著升高(P<0.01);心肌细胞排列紊乱,心肌纤维部分断裂及胶原纤维大量沉积;小鼠血清CK-MB、LDH水平显著升高(P<0.01);心肌组织Lats1 mRNA水平显著降低(P<0.01),Yap、CTGF mRNA水平显著升高(P<0.01);心肌组织α-SMA、ColⅠ、ColⅢ、MMP2、Yap、n-Yap蛋白表达显著升高(P<0.01),Lats1、TIMP1、p-Yap蛋白表达及p-Yap/Yap比值显著降低(P<0.01)。与模型组比较,经高剂量苓桂术甘汤干预后,小鼠LVEF、LVFS水平显著升高,LVIDd、LVIDs水平显著降低(P<0.01);心肌细胞排列较整齐,心肌纤维断裂及胶原纤维沉积明显减少;小鼠血清CK-MB、LDH水平显著降低(P<0.01);心肌组织Lats1 mRNA水平显著升高(P<0.01),Yap、CTGF mRNA水平显著降低(P<0.01);心肌组织α-SMA、ColⅠ、ColⅢ、MMP2、Yap、n-Yap蛋白表达显著降低(P<0.01),Lats1、TIMP1、p-Yap蛋白表达及p-Yap/Yap比值显著升高(P<0.01)。苓桂术甘汤能够抑制MI后模型小鼠MF,改善小鼠心功能,此作用与其激活Lats1/Yap信号通路密切相关。

LATS1-YAP信号通路对人皮肤成纤维细胞增殖及细胞外基质合成的调控

目的探讨LATS1-YAP信号通路对人皮肤成纤维细胞活力及细胞外基质合成的调控作用。方法实验分为未干预组、LATS1 siRNA干预组和YAP siRNA干预组。构建LATS1 siRNA和YAP siRNA,LATS1 siRNA干预组利用LATS1 siRNA转染人皮肤成纤维细胞株HS27,YAP siRNA干预组利用YAP siRNA转染HS27。转染后48 h利用Western-blot观察LATS1、YAP和collagenⅠ的表达情况,应用MTT检测HS27细胞株的细胞活力情况。结果 LATS1 siRNA转染48 h后LATS1蛋白表达显著降低,YAP蛋白和collagenⅠ蛋白表达升高,细胞活力显著增高;YAP siRNA转染48 h后LATS1蛋白表达无变化,YAP蛋白和collagenⅠ蛋白表达降低,细胞活力显著降低。结论 LATS1-YAP信号通路可调控人皮肤成纤维细胞活力和细胞外基质的合成,可能成为皮肤创伤后修复以及阻止创伤后瘢痕形成提供潜在治疗靶点。

慢病毒介导LATS1过表达对人肾癌细胞系786-0增殖、凋亡及下游癌基因YAP的影响

目的探讨慢病毒介导LATS1过表达对人肾癌细胞786-0增殖、凋亡及下游癌基因YAP的影响。方法采用携带LATS1基因的慢病毒载体感染人透明细胞肾癌细胞系786-0,利用RT-PCR检测感染后786-0细胞中Hippo-YAP信号通路大肿瘤抑制基因-1(large tumor suppressor gene 1,LATS1)mRNA和下游癌基因Yes-相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)mRNA的表达水平,Western blot检测LATS1和YAP的蛋白表达水平,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡和周期,细胞增殖/毒性试剂(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖抑制情况。结果慢病毒介导LATS1感染肾癌786-0细胞系后,LATS1 mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组及空病毒组(P<0.05),YAP mRNA及蛋白表达水平显著低于对照组及空病毒组(P<0.05),细胞周期停滞在G1期(P<0.05)、细胞增殖受到明显抑制(P<0.05)、细胞凋亡显著增加(P<0.05)。结论慢病毒介导LATS1过表达下调YAP基因表达,抑制786-0细胞增殖、促进其凋亡并阻滞细胞周期于G1期。肾癌的发生、发展可能与LATS1和YAP表达失调有关。

LATS1和YAP蛋白在小肠腺癌组织中的表达及意义

目的:探讨大肿瘤抑制基因1(LATS1)和Yes相关蛋白(YAP)在小肠腺癌中的表达及意义。方法:采用免疫组织化学法检测LATS1和YAP蛋白在60例小肠腺癌和20例癌旁组织中的表达情况及其与小肠腺癌患者临床生物学特征的关系。结果:与癌旁组织比较,LATS1在小肠腺癌组织中低表达,而YAP在小肠腺癌组织中高表达。但是,LATS1/YAP信号异常表达与小肠腺癌患者的性别、年龄及病理学分级无相关性。结论:LATS1/YAP信号异常表达与小肠腺癌相关,但是与患者临床生物学特征无相关性。

过表达LATS1降低食管癌Eca109细胞增殖

目的运用慢病毒转染技术在食管癌Eca109细胞中过表达LATS1基因,探究LATS1调控Eca109细胞增殖、凋亡及周期的作用及机制。方法构建LATS1基因的慢病毒载体转染Eca109细胞系,RT-PCR检测细胞中LATS1mRNA的表达;Western blot检测LATS1、YAP、BAX/BCL-2的蛋白表达水平;MTS检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡及周期;hochest33258观察细胞凋亡染色。结果 LATS1慢病毒载体转染Eca109细胞后,目的基因组(AdLATS1)LATS1 mRNA及LATS1蛋白表达、BAX蛋白表达明显高于对照组(CON)及阴性对照组(Ad-GFP),而YAP、BCL-2的蛋白表达明显低于对照组及Ad-GFP组(P<0.05);Ad-LATS1组Eca109细胞的增殖率从第5天开始明显低于对照组及Ad-GFP组(P<0.05);Ad-LATS1组细胞较Ad-GFP及对照组G1期比例明显增高而S期比例明显缩短,凋亡率明显增高(P<0.05),细胞荧光染色强度及范围也增高。结论 LATS1基因可上调BAX、下调YAP、BCL-2使Eca109凋亡,并诱导G1期延长、S期缩短来降低其增殖力。

Hippo信号通路核心组分lats1:一种新的肿瘤分子标记和潜在治疗靶点

大肿瘤抑制基因1(large tumor suppressor gene 1,lats1)是hippo信号通路中的关键组分之一,通过下调靶基因yap抑制肿瘤的发生和发展。研究发现,lats1在多种肿瘤组织中表达下调或缺失,被认为是一个抑癌基因。因此,lats1很可能成为一个新的恶性肿瘤分子标记和治疗靶点,该文就lats1在该领域的研究进展作一综述。