人脐静脉内皮细胞内化膜微粒通路的初步探索

目的:探讨人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)内化骨髓间充质干细胞(MSC)来源膜微粒(microparticles,MP)的可能途径。方法:将人骨髓MSC经低氧低营养诱导后收集上清,超速离心机分离提取MP,电子显微镜鉴定其形态及大小;流式细胞术检测MP表面标记物及磷脂酰丝氨酸(PS)的表达;细胞免疫荧光技术观察HUVEC是否表达PS受体(PSR)。将Di I标记的MP与HUVEC共孵育,体系中加入PSR封闭性抗体,在共聚焦显微镜下观察MP的内化过程。结果:MSC在低氧低营养条件下诱导产生的膜微粒高表达PS,内皮细胞表面表达PSR。MP可快速进入内皮细胞,并主要分布于细胞核周围胞浆。抗体封闭内皮细胞PSR后,HUVEC内化MP的过程明显受抑,抑制率达80%以上。结论:MSC-MP表面的PS与HUVEC表面PSR的特异性结合,是MP内化的关键环节。

聚桂醇对体外培养人脐静脉内皮细胞的促凝血活性的影响

目的观察聚桂醇对体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)表面磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)暴露及其促凝血活性的影响。方法不同浓度的聚桂醇(0,10,20,30,40,50μg/ml)处理HUVECs 24小时。通过检测凝血时间分析相关促凝血活性。乳黏素(lactadherin)作为检测HUVECs的PS暴露的探针和凝血抑制剂。通过流式细胞仪和荧光倒置显微镜检测和观察HUVECs的PS暴露。结果凝血时间随着聚桂醇浓度的增加而显著缩短,并且具有浓度依赖性,药物处理组与未处理组间差异有统计学意义(P<0.05)。在抑制实验中,乳黏素起到明显的抑制作用,而抗组织因子抗体(Anti-TF)没有明显的抑制效果。在流式细胞仪和荧光倒置显微镜的检测和观察下,清晰地呈现出HUVECs的PS暴露。结论 HUVECs的PS暴露增多与其促凝血活性的增强具有聚桂醇浓度依赖性,聚桂醇通过增加HUVECs表面的PS暴露增强其促凝血活性。