薰衣草高频植株再生系统的建立

以薰衣草叶片为外植体,建立了薰衣草高频植株再生系统,为薰衣草规模化快繁和遗传转化体系的建立奠定了基础。以6-BA,NAA,IBA,Ce(NO3)2,Na2MoO4及蔗糖为实验因子,芽分化率为测定指标,通过L18(61×36)正交实验,筛选了薰衣草芽分化的最佳组合:MS培养基中含有6-BA2.0mg/L,NAA0.5mg/L,IBA0.15mg/L,Ce(NO3)210mg/L,Na2MoO40.5mg/L及蔗糖15g/L。通过L9(34)正交实验,筛选了1种宜于薰衣草生根的理想培养基,即MS+IAA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖15g/L+活性炭1.0g/L。

几种生物学因子对薰衣草胚性愈伤组织悬浮培养生长的影响

通过研究接种量、培养基、碳源、氮源及激素组合等生物学因子对薰衣草胚性愈伤组织悬浮培养生长的影响,建立了一种可快速生长的薰衣草胚性愈伤组织悬浮培养体系。结果表明,在添加0.05mg/L2,4-D、0.5mg/L6-BA、30g/L蔗糖及0.5g/L水解酪蛋白的MS培养液中,以50g/L的接种量进行薰衣草胚性愈伤组织的悬浮培养,其生长速率可达24.14g/(L·d)。

薰衣草细胞悬浮培养体系的优化

采用正交设计方法对影响薰衣草悬浮细胞生长的因素进行了优化研究,筛选了最有利于薰衣草悬浮细胞生长的培养条件:含有0.025mg/L2,4-D、0.5mg/L6-BA、40g/L蔗糖的B5培养基和120r/min的转速,在此条件下培养15天,悬浮活细胞密度可达到4.4×105个/ml;经过3个月的培养,悬浮细胞的分化率可达到90%以上。通过分析薰衣草细胞对残糖的消耗规律,探讨了蔗糖浓度影响活细胞密度的原因。

根癌农杆菌介导的雪莲冷诱导蛋白基因对薰衣草遗传转化的初步研究

预培养6d的薰衣草下胚轴在添加100μmol·L-1乙酰丁香酮(AS)的根癌农杆菌重悬液中浸染10min后共培养2～3d,再经过7～10d的恢复培养之后用包含10mg·L-1潮霉素B和200mg·L-1头孢霉素的筛选培养基进行筛选是较为理想的遗传转化条件。通过GFP观察和GUS染色以及对筛选得到的抗性芽的PCR检测证明,外源目的基因()莲冷诱导蛋白基因scp)已整合到薰衣草基因组中,阳性率为40%。

抗生素对薰衣草愈伤组织诱导和生长的影响

研究了卡那霉素(Kanamycin)和头孢霉素(Cefotaxime)对法国孟士德薰衣草(Lavandula angustifolia,cv．Munstead)愈伤组织诱导和生长的影响。结果表明:在以卡那霉素为抗性选择标记时,叶盘的选择压力为10 mg／L,愈伤组织的选择压力为20 mg／L;在以头孢噻肟钠为抑菌剂用于薰衣草叶盘遗传转化实验时,其浓度为200 mg／L时即可有效抑制农杆菌的生长,同时又不会对薰衣草愈伤组织产生明显的伤害作用。

孟士德薰衣草愈伤组织诱导和植株再生

取孟士德薰衣草叶片、茎段、芽为外植体,设置6组不同激素水平进行组织培养试验,结果显示:以MS+BA 2.0 mg.L-1(单位下同)+NAA 0.1或MS+BA 2.0+IBA 0.15为培养基诱导愈伤组织效果好;茎段的愈伤诱导率高达92.5%;芽的萌动早、愈伤诱导率达80%;叶的诱导效果最差,愈伤诱导率为35%,且极易褐变死亡。愈伤组织在MS+BA 1.0+IBA 0.1培养基上继续培养,形成大量的丛生芽。单个芽在1/2MS+NAA 0.2培养基上进行生根培养,生根率达98%。试验表明芽适合作快速繁殖材料,茎段适合先形成愈伤组织再诱导植株再生。

薰衣草基因转化直接分化受体系统的建立

以法国孟士德薰衣草(Lavandula angustifoliacv.Munstead)的下胚轴和子叶为研究材料,通过高频再生系统的建立和抗生素敏感性实验,建立了薰衣草基因转化的直接分化受体系统。结果表明:下胚轴的不定芽分化能力比子叶更强,在IAA 0.1 mg.L-1+6-BA 1.0 mg.L-1条件下,10 d苗龄的下胚轴的出愈率和不定芽分化率分别为96.7%和36.7%;所得组培苗在1/2 MS基本培养基上生根率可达95%以上;确定了下胚轴适宜的抗生素筛选浓度,潮霉素的筛选浓度为10 mg.L-1,头孢霉素浓度为200 mg.L-1时即可有效抑制农杆菌的生长,同时又不会对薰衣草不定芽分化产生明显的伤害作用。