薰衣草高频植株再生系统的建立

以薰衣草叶片为外植体,建立了薰衣草高频植株再生系统,为薰衣草规模化快繁和遗传转化体系的建立奠定了基础。以6-BA,NAA,IBA,Ce(NO3)2,Na2MoO4及蔗糖为实验因子,芽分化率为测定指标,通过L18(61×36)正交实验,筛选了薰衣草芽分化的最佳组合:MS培养基中含有6-BA2.0mg/L,NAA0.5mg/L,IBA0.15mg/L,Ce(NO3)210mg/L,Na2MoO40.5mg/L及蔗糖15g/L。通过L9(34)正交实验,筛选了1种宜于薰衣草生根的理想培养基,即MS+IAA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖15g/L+活性炭1.0g/L。

孟士德薰衣草愈伤组织诱导和植株再生

取孟士德薰衣草叶片、茎段、芽为外植体,设置6组不同激素水平进行组织培养试验,结果显示:以MS+BA 2.0 mg.L-1(单位下同)+NAA 0.1或MS+BA 2.0+IBA 0.15为培养基诱导愈伤组织效果好;茎段的愈伤诱导率高达92.5%;芽的萌动早、愈伤诱导率达80%;叶的诱导效果最差,愈伤诱导率为35%,且极易褐变死亡。愈伤组织在MS+BA 1.0+IBA 0.1培养基上继续培养,形成大量的丛生芽。单个芽在1/2MS+NAA 0.2培养基上进行生根培养,生根率达98%。试验表明芽适合作快速繁殖材料,茎段适合先形成愈伤组织再诱导植株再生。

几种生物学因子对薰衣草胚性愈伤组织悬浮培养生长的影响

通过研究接种量、培养基、碳源、氮源及激素组合等生物学因子对薰衣草胚性愈伤组织悬浮培养生长的影响,建立了一种可快速生长的薰衣草胚性愈伤组织悬浮培养体系。结果表明,在添加0.05mg/L2,4-D、0.5mg/L6-BA、30g/L蔗糖及0.5g/L水解酪蛋白的MS培养液中,以50g/L的接种量进行薰衣草胚性愈伤组织的悬浮培养,其生长速率可达24.14g/(L·d)。

根癌农杆菌介导的雪莲冷诱导蛋白基因对薰衣草遗传转化的初步研究

预培养6d的薰衣草下胚轴在添加100μmol·L-1乙酰丁香酮(AS)的根癌农杆菌重悬液中浸染10min后共培养2～3d,再经过7～10d的恢复培养之后用包含10mg·L-1潮霉素B和200mg·L-1头孢霉素的筛选培养基进行筛选是较为理想的遗传转化条件。通过GFP观察和GUS染色以及对筛选得到的抗性芽的PCR检测证明,外源目的基因()莲冷诱导蛋白基因scp)已整合到薰衣草基因组中,阳性率为40%。

薰衣草细胞悬浮培养体系的优化

采用正交设计方法对影响薰衣草悬浮细胞生长的因素进行了优化研究,筛选了最有利于薰衣草悬浮细胞生长的培养条件:含有0.025mg/L2,4-D、0.5mg/L6-BA、40g/L蔗糖的B5培养基和120r/min的转速,在此条件下培养15天,悬浮活细胞密度可达到4.4×105个/ml;经过3个月的培养,悬浮细胞的分化率可达到90%以上。通过分析薰衣草细胞对残糖的消耗规律,探讨了蔗糖浓度影响活细胞密度的原因。

抗生素对薰衣草愈伤组织诱导和生长的影响

研究了卡那霉素(Kanamycin)和头孢霉素(Cefotaxime)对法国孟士德薰衣草(Lavandula angustifolia,cv．Munstead)愈伤组织诱导和生长的影响。结果表明:在以卡那霉素为抗性选择标记时,叶盘的选择压力为10 mg／L,愈伤组织的选择压力为20 mg／L;在以头孢噻肟钠为抑菌剂用于薰衣草叶盘遗传转化实验时,其浓度为200 mg／L时即可有效抑制农杆菌的生长,同时又不会对薰衣草愈伤组织产生明显的伤害作用。

GA_3处理对蒙斯特薰衣草种子发芽的影响

以蒙斯特薰衣草(Lavandula munstead)种子为试材,采用两因素随机区组试验设计方法,研究了GA_3浓度和处理时间对种子发芽及幼苗生长的影响,并应用隶属函数法对各处理组合的发芽效果进行了综合评价。结果表明,GA_3浓度和处理时间两因素的交互效应对发芽势、发芽率、发芽指数和活力指数4个指标的影响达到极显著水平(P<0.01),对苗高和根长2个指标的影响不显著(P>0.05)。两因素对6个发芽指标的影响作用均为GA_3浓度>处理时间。除处理组合5以外,各处理组合分别使种子萌发时间提前1～13 d。蒙斯特薰衣草种子发芽的最优处理为800 mg·L^(-1) GA_3处理6 h,种子发芽率、发芽指数、活力指数、苗高和根长分别达到43.33%,0.394,0.014 9,5.00 cm和2.42 cm。

孟士德薰衣草种子萌芽生物学特性研究

以孟士德薰衣草为试验材料,研究温度、光照以及赤霉素等外界条件对孟士德薰衣草种子萌发的影响,以期找到提高孟士德薰衣草种子萌芽率的有效方法,为孟士德薰衣草的播种繁殖及育种工作提供科学的理论依据。结果表明:(1)孟士德薰衣草的种子黑褐色,表皮光滑,种皮坚硬角质化,外包蜡质,种子千粒质量(0.947±0.045)g;(2)200 mg/L赤霉素浸泡处理6 h孟士德薰衣草种子萌芽率最高,达到94.6%;(3)15℃黑暗环境下孟士德薰衣草种子萌芽率最高,达到95.2%,20℃次之,为94.6%,但相比15℃幼苗长势更好;(4)光照10 h处理有利于孟士德薰衣草种子萌芽,萌芽率为94.6%,且幼苗长势最好;(5)采用不同浓度GA3对孟士德薰衣草种子进行处理,以200 mg/L的GA3处理种子萌芽效果最佳,萌芽率达到94.0%。

IBA对3种薰衣草扦插生根及生长的影响

以法国薰衣草、孟士德薰衣草及蕨叶薰衣草‘西班牙之眼’当年生顶芽为试材,以植物生长调节剂吲哚丁酸(IBA)为生根剂,研究了不同浓度IBA(0mg/L、100mg/L、300mg/L、500mg/L、800mg/L)对其扦插生根及生长的影响,结果表明:用300mg/L的IBA处理法国薰衣草插穗,能快速促进其生根,其生根率、平均根长、根系数量、根系效果指数、株高及叶片数量均达到最大,分别为66.00%、1.87cm、8.33条、0.31、8.37cm、20.00片;同时,孟士德薰衣草的生根率、平均根长、根系数量、根系效果指数、株高及叶片数量也均达到峰值,分别为90.00%、2.00cm、15.33条、0.60、8.67cm、21.00片;用500mg/L的IBA处理蕨叶薰衣草‘西班牙之眼’插穗,可显著提高其生根率、平均根长、根系数量、根系效果指数、株高及叶片数量,且生根及生长效果最佳,分别为93.33%、1.70cm、12.00条、0.41、19.47cm、34.67片;且IBA浓度在100~300mg/L范围内时,孟士德薰衣草生根能力最强,法国薰衣草次之,蕨叶薰衣草‘西班牙之眼’最差,但IBA浓度在300~500mg/L范围内时,蕨叶薰衣草‘西班牙之眼’生根能力最强,孟士德薰衣草次之,法国薰衣草最差。