枸杞LbSPL6重组蛋白的纯化和复性

SPL(Squamosa promoter binding protein-like,SPL)是植物特有的转录因子,在植物花和果实的生长发育、次生代谢、调控植物适应性等过程中起着重要作用。SPL蛋白中含有高度保守的SBP功能结构域,通过特异性结合基因的启动子元件,调控相关基因的表达。对已获得的枸杞pET28a-LbSPL6融合蛋白进行诱导表达条件的优化,并对形成的包涵体蛋白进行纯化和复性。结果表明:诱导温度37℃、c(IPTG)=1 mmol/L诱导4 h后,LbSPL6蛋白的表达量最高;原核表达的LbSPL6蛋白,在各种诱导条件下的存在形式都为包涵体;通过超声破碎回收包涵体,并将沉淀在变性缓冲液中进行溶解复性,利用Ni-NTA柱亲和层析纯化蛋白,从而获得有活性的重组LbSPL6融合蛋白。蛋白免疫检测结果进一步证实纯化后的蛋白为LbSPL6重组蛋白。试验纯化得到的重组LbSPL6蛋白为进一步深入研究枸杞LbSPL6蛋白的功能奠定了基础。

枸杞LbSPL6基因的克隆及表达分析

从实验室前期对枸杞(Lycium barbarum L.)花发育过程转录组测序结果推测,枸杞Squamosa启动子结合蛋白(Squamosa promoter binding protein-like,SPL)转录因子可能在枸杞花发育过程中发挥重要功能。该研究以宁夏特色植物资源枸杞为材料,采用RACE方法克隆LbSPL6基因,通过生物信息学及基因表达分析对该基因进行初步研究。结果表明:(1)成功克隆获得LbSPL6基因,其开放阅读框全长1524 bp,编码507个氨基酸,分子量为55.34 kD;序列分析表明LbSPL6蛋白中包含3个保守基序,且氨基酸序列与茄科植物同源蛋白的氨基酸序列高度相似。(2)qRT-PCR分析证实,LbSPL6基因在枸杞花器官中表达,并且在花药发育的四分体时期及单核花粉时期表达量较高;亚细胞定位实验证明,LbSPL6蛋白定位于细胞核中。该研究结果为进一步研究枸杞LbSPL6转录因子在花发育过程中的功能和作用机制奠定了基础。