羊草锌转运蛋白LcZNE1功能的鉴定

从羊草转录组数据库中筛选出基因Lc240210,发现其编码蛋白与拟南芥Zn2+转运蛋白AtZNE1同源,因此将其命名为LcZNE1。生物信息学分析表明,LcZNE1是膜蛋白,有15个跨膜域,与二穗短柄草亲缘关系最近,具有Zn2+配基。通过瞬时转染烟草叶表皮细胞和羊草叶原生质体发现,LcZNE1定位于内质网。实时荧光定量PCR分析发现,在高锌和低铁条件下LcZNE1基因表达上调,LcZNE1参与Zn和Fe营养调控。酵母功能互补试验证明,LcZNE1能够增强高锌敏感酵母突变体(△zrc1/△cot1)对高锌条件的抗性,具有Zn2+转运功能。等温滴定量热法(ITC)发现,LcZNE1有8条非跨膜域短肽与Zn2+结合,包括胞质面和非胞质面各4条短肽,其中Non-CytoⅡ与Zn2+结合能力强。