LCMT1在肝癌中的表达和预后的意义

目的:探讨亮氨酸羧基甲基转移酶1(LCMT1)在肝癌中的表达和预后的意义。方法:通过收集网络数据库GEPIA中有关信息进行LCMT1表达情况的分析、相关性分析和生存分析,然后通过免疫组化染色进一步分析LCMT1在肝癌中的表达和预后。结果:LCMT1在肾上腺皮质癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤、肝癌和胸腺瘤中的表达和正常组织的表达相比具有统计学意义(P<0.05)。LCMT1在肝癌中高表达,且高表达的患者生存时间短,更容易发生转移。LCMT1和金属蛋白酶2(MMP2)之间的相关系数为0.324(P<0.05)。LCMT1和丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)存在正相关关系且相关系数为0.76(P<0.05)。结论:LCMT1在肝癌中高表达,且高表达与患者的不良预后有关,LCMT1可能通过激活MAPK3的磷酸化而促进肝癌的发生。

肝特异性LCMT1基因敲除小鼠模型的制备及鉴定

目的建立肝特异性LCMT1基因敲除小鼠模型。方法运用CRISPR/Cas9技术构建肝特异性LCMT1-KO小鼠。通过RT-PCR、实时定量PCR、Western Blot和HE染色等方法鉴定及比较野生和敲除小鼠的差异;观察和分析两组小鼠的一般情况、繁殖能力和子代存活率。结果成功鉴定子代的基因型;LCMT1-KO小鼠肝LCMT1 mRNA和蛋白质水平显著低于对照组小鼠;两组小鼠的饮食、饮水、体重、繁殖能力、子代存活率、肝外观和HE染色无明显差异;LCMT1-KO小鼠心脏、大脑和肾组织中LCMT1表达与对照组相比没有显著变化;LCMT1-KO小鼠sgRNA未发生脱靶。结论成功构建肝特异性LCMT1基因敲除小鼠,为研究LCMT1基因在疾病中的调控作用提供实验手段。

胃癌组织的LCMT1-AS2水平及临床意义

目的探讨胃癌组织中长链非编码RNA LCMT1反义RNA 2(LCMT1-AS2)的水平及临床意义。方法基于UALCAN在线分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中375例胃癌组织和32例正常组织的LCMT1-AS2水平,通过NCBI提供的GEO2R平台检索GEO数据库GSE54129中111例胃癌组织和21例正常组织的LCMT1-AS2水平,采用实时定量PCR(qPCR)检测本院2015年1月至2019年12月手术切除的117例胃癌组织和103例癌旁正常组织的LCMT1-AS2水平,分层分析LCMT1-AS2水平与胃癌临床病理特征(性别、年龄、Lauren分型、肿瘤直径、TNM分期、分化程度、淋巴结转移和浸润深度)的关系,Kaplan-Meier法进行生存分析并采用Engauge Digitizer软件在生存曲线上提取1、3、5年生存率。结果TCGA数据库和GSE54129数据集中胃癌组织的LCMT1-AS2水平均高于正常组织(P<0.05);qPCR结果显示胃癌组织的LCMT1-AS2水平为3.413±1.463,高于癌旁组织的1.735±0.735(P<0.05);LCMT1-AS2水平与胃癌的性别、年龄和分化程度无关(P>0.05),而与Lauren分型、肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移和浸润深度有关(P<0.05)。Kaplan-Meier Plotter数据库分析显示LCMT1-AS2高水平者的中位总生存期(OS)为36.4个月,短于低水平者的70.4个月(HR=1.30,95%CI:1.04~1.62,P=0.021)。LCMT1-AS2低水平者的1、3、5年总生存率分别为98.4%、76.0%和48.1%,高于LCMT1-AS2高水平者的92.9%、40.9%和9.8%,中位OS为50.0个月,长于LCMT1-AS2高水平者的34.0个月,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素分析显示,LCMT1-AS2高水平为胃癌患者预后不良的危险因素(HR=3.451,95%CI:1.259~6.257,P<0.05)。结论LCMT1-AS2在胃癌组织中高表达,且该指标水平异常升高与恶性程度和不良预后有关,一定程度上参与胃癌的发生发展,可作为胃癌诊治的候选靶点。

基于iTRAQ技术分析LCMT1高表达对人胚肾细胞的影响

LCMT1是重要的哺乳动物甲基转移酶,为了探索LCMT1在生物体内可能涉及的生物进程,并建立LCMT1高表达的差异表达蛋白谱。我们成功构建了LCMT1高表达和质粒对照细胞株,利用同位素标记相对和绝对定量（isobaric tags for relative and absolute quantitation,i TRAQ）技术鉴定LCMT1高表达引起的差异表达蛋白,并进行了生物信息学分析。我们共鉴定到4 480个蛋白,差异表达蛋白233个,其中上调蛋白78个,下调蛋白155个。涉及到的细胞生物进程5条,信号通路15条。蛋白质相互作用分析结果表明差异表达蛋白主要分为4群,这些差异表达蛋白主要与RNA翻译与泛素化,肾脏发育,羧酸代谢过程相关。本研究发现LCMT1高表达引起了大量蛋白的差异表达,而这些差异表达蛋白的识别为后续LCMT1相关疾病的研究提供了丰富的理论依据。

亮氨酸羧基甲基转移酶1对锰致神经细胞凋亡的拮抗作用

目的探索亮氨酸羧基甲基转移酶1(LCMT1)高表达对锰诱导神经细胞损伤的拮抗作用。方法利用脂质体将LCMT1-PCDNA 3.0和PCDNA 3.0质粒分别转染小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a细胞),通过G418筛选稳定高表达LCMT1的LCMT1-N2a细胞和PCDNA-N2a细胞,Western blot检测显示LCMT1蛋白过表达情况。将LCMT1-N2a细胞和PCDNA-N2a细胞分别暴露于空白培养基(对照组)和不同浓度氯化锰(250、500、1000、2000μmol/L)12 h后以刃天青法检测细胞活性。随后,用流式细胞仪检测染锰(0、500、1000μmol/L)12 h后细胞的凋亡率。结果LCMT1蛋白在LCMT1-PCDNA 3.0细胞中的表达高于对照组且差异具有统计学意义(P<0.05);转染后细胞的形态与转染前无明显变化。锰暴露可使PCDNA-N2a细胞活性下降且有剂量-反应关系,相同浓度锰暴露下LCMT1-N2a细胞存活率高于PCDNA3.0 N2a(P<0.05)。PCDNA3.0 N2a细胞的凋亡率随着染锰浓度增加而升高且存在剂量-反应关系;在相同的染锰剂量下,LCMT1-PCDNA3.0 N2a细胞的凋亡率低于PCDNA3.0 N2a细胞(P<0.05)。结论LCMT1高表达可以拮抗锰致N2a细胞细胞活性的下降和细胞凋亡。