丹酚酸B调控脂质代谢改善非酒精性脂肪肝实验研究

目的探讨丹酚酸B(SalB)可能通过调控Lcn2改善非酒精性脂肪肝的作用。方法体内实验,8周龄♂C57BL/6J小鼠用普通维持饲料喂养,作为对照组,8周龄ApoE-/-小鼠用高脂饲料喂养,随机分为模型组和SalB组。在饲养8周后,SalB组小鼠用SalB灌胃,低剂量为15 mg·kg^(-1)·d^(-1),高剂量为30 mg·kg^(-1)·d^(-1),对照组和模型组用等剂量生理盐水灌胃。肝脏转录组测序结果揭示模型组和SalB组的差异表达基因,HE染色、油红O染色观察肝组织的病理变化,试剂盒检测血清和肝组织的脂质、氧化应激和炎症指标,RT-qPCR检测Lcn2、SREBP-1C以及脂质合成相关酶的mRNA水平。体外实验,用棕榈酸(PA)诱导L02和LX-2细胞24 h建立NAFLD模型,用SalB(30μmol·L^(-1))和PA(0.2 mmol·L^(-1))共孵育检测SalB体外改善NAFLD的情况。试剂盒检测L02细胞TC、TG的含量,细胞油红O染色试剂盒检测L02细胞的脂质积累,RT-qPCR检测LX-2细胞Lcn2、SREBP-1C以及脂质合成相关酶基因的mRNA水平。结果模型组血清、肝脏的生化指标异常,肝组织脂质、炎症和氧化应激水平升高,出现大面积脂肪空泡和大量的脂质沉积,PA诱导的L02细胞也出现大量的脂质积累,在SalB干预后均有明显改善。转录组测序结果表明SalB可以调控肝脏脂质代谢和炎症。肝脏和LX-2细胞mRNA水平显示模型组Lcn2、SREBP-1C以及脂质合成相关酶基因表达明显上调,SalB干预后均能降低这些基因的表达。结论丹酚酸B可以明显改善非酒精性脂肪肝,其机制可能是通过下调Lcn2、SREBP-1C和脂质合成酶的表达。

黄连素介导NF-κB/LCN2信号通路改善COPD诱导的Th17/Treg细胞失衡

目的通过构建慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠模型,探讨黄连素是否通过调节NF-κB/LCN2信号通路改善COPD诱导的Th17/Treg细胞失衡。方法将50只Wistar大鼠随机分为对照组(Control组)、慢性阻塞性肺病组(COPD组)、黄连素组(Berberine组)、黄连素+过表达对照组(Berberine+ov-NC组)和黄连素+过表达LCN2组(Berberine+ov-LCN2组),每组10只。Western blotting检测肺组织p-NF-κB、LCN2、IL-17和IL-10蛋白表达;HE染色观察大鼠肺组织病理形态变化;流式细胞术检测大鼠外周血Th17/Treg细胞比例;ELISA检测大鼠血清中IL-17和IL-10水平。结果对照组大鼠肺组织结构完整;与Control组相比,COPD组大鼠肺组织结构损伤,肺组织中p-NF-κB和LCN2蛋白表达显著升高,外周血中Th17细胞比例显著升高,Treg细胞比例显著降低,血清中IL-17水平和肺组织中IL-17蛋白表达显著升高,血清中IL-10水平和肺组织中IL-10蛋白表达显著降低(P<0.05);与COPD组相比,Berberine组和Berberine+ov-NC组大鼠肺组织损伤改善,肺组织中p-NF-κB和LCN2蛋白表达显著降低,外周血中Th17细胞比例显著降低,Treg细胞比例显著升高,血清中IL-17水平和肺组织中IL-17蛋白表达显著降低,血清中IL-10水平和肺组织中IL-10蛋白表达显著升高(P<0.05);与Berberine组和Berberine+ov-NC组相比,Berberine+ov-LCN2组大鼠肺组织损伤加重,肺组织中LCN2蛋白表达显著升高,外周血中Th17细胞比例显著升高,Treg细胞比例显著降低,血清中IL-17水平和肺组织中IL-17蛋白表达显著升高,血清中IL-10水平和肺组织中IL-10蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论黄连素治疗通过下调LCN2表达改善COPD大鼠肺损伤以及Th17/Treg细胞失衡,其机制可能与抑制NF-κB/LCN2信号通路有关。

动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者血清和脑脊液LCN2早期表达分析

目的:分析动脉瘤性蛛网膜下腔出血(aneurysmal subarachnoid hemorrhage,aSAH)患者血清和脑脊液载脂蛋白2(lipocalin-2,LCN2)早期表达情况,探讨其与患者早期脑损伤(early brain injury,EBI)严重程度的相关性。方法:选择2020-2022年入住包头市中心医院神经内科诊断为aSAH且发病3 d内的患者为aSAH组;选取同期与患者年龄、性别相匹配的其他患者为对照组。采用酶联免疫吸附法测定两组血清和脑脊液LCN2水平。运用Hunt-Hess分级评定患者脑损伤严重程度并分为3组:Ⅰ组Hunt-HessⅠ级、Ⅱ组Hunt-HessⅡ级、Ⅲ组Hunt-HessⅢ-Ⅴ级,分析EBI严重程度与血清和脑脊液LCN2水平的相关性。结果:共入组47例患者。(1)aSAH组血清和脑脊液LCN2水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。(2)Ⅱ组血清和脑脊液LCN2水平均高于Ⅰ组,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ组血清和脑脊液LCN2水平均高于Ⅱ组,差异有统计学意义(P<0.05),Hunt-Hess分级和血清LCN2、脑脊液LCN2均为正相关且差异有统计学意义(r_(s)>0,P<0.05)。(3)通过绘制ROC曲线表明:血清LCN2的ROC曲线下面积为0.876(特异度为100.00%,敏感度为61.70%),最佳诊断界限值为45.68 ng/mL;脑脊液LCN2的ROC曲线下面积为0.914(特异度为76.60%,敏感度为100.00%),最佳诊断界限值为15.08 ng/mL。结论:aSAH患者早期体液LCN2明显升高,并与EBI密切相关,可能参与EBI发病机制。

他汀类药物联合多奈哌齐治疗NAFLD合并AD的疗效及对LCN2的影响

目的:探讨他汀类药物联合多奈哌齐治疗NAFLD合并AD的疗效及对LCN2的影响。方法:选择本院2021年1月—2023年6月收治的66例NAFLD合并AD患者为研究对象,按电脑随机法分组,分为观察组(33例)和对照组(33例);对照组给予多奈哌齐治疗,观察组在对照组基础上加用他汀类药物,比较两组治疗效果。结果:治疗后,观察组患者的氧化应激指标(MDA、SOD)对比具有显著差异(P<0.05),且观察组患者的SOD水平更高,MDA水平更低(P<0.05);治疗后,观察组ADL和MMSE评分高于对照组(P<0.05);治疗后,两组患者的LCN2水平明显降低,且观察组患者的LCN2指标低于对照组(P<0.05);治疗后,两组患者的不良反应发生率(6.06%VS18.18%)对比差异不大(t=2.276,P=0.131)。结论:在他汀类药物联合多奈哌齐治疗NAFLD合并AD的疗效十分显著,可加以应用和推广。

骨骼DNA分析的应用研究

近年来,各国法庭科学工作者对骨骼DNA检验进行了不断研究与实践[1],但由于陈旧骨骼受时间和环境因素的影响,对其进行DNA分析仍是目前国际法医界公认的难题.

山羊Lcn5的表达特点及其在繁殖器官中定位

为探明附睾视黄酸结合蛋白5(Lcn 5)mRNA在公山羊体组织及不同月龄附睾中的表达特性,及其在睾丸、附睾和精子中的定位。采用实时荧光定量PCR方法检测18种组织和不同月龄附睾Lcn5mRNA表达规律;利用蛋白印迹技术对成年公羊睾丸和附睾Lcn 5蛋白表达进行定量分析;利用免疫组化技术对5月龄公羊睾丸和附睾Lcn 5进行定位,利用免疫荧光技术对精子Lcn 5进行定位。Lcn5mRNA在不同组织中均有表达,其中在性腺中的表达量最高,附睾头>附睾尾>附睾体>睾丸;在5月龄前附睾的Lcn5mRNA表达量随月龄逐渐升高,5月龄时达到最高,随后又逐渐降低。Western blotting结果显示,Lcn 5蛋白表达量:附睾头>附睾尾>附睾体>睾丸,支持了Lcn5mRNA定量的结果。免疫组化结果显示,5月龄山羊在附睾管壁的柱状细胞、纤毛细胞检测到较强Lcn 5蛋白表达的阳性信号,附睾尾管腔检测到较强的阳性信号。在睾丸各级生精细胞中也检测到了微弱阳性信号。Lcn 5蛋白包裹在精子头部顶体帽上。Lcn5在山羊附睾中高度表达,其表达具有时空特异性,推测其在精子成熟和维持正常生理功能方面发挥重要作用,其生物学功能需要进一步深入研究。

脱落毛发及毛干DNA的STR分型研究

目的探讨脱落毛发及毛干细胞核DNA提取、含量和STR分型问题。方法对脱落毛发或毛干进行DNA提取和定量,使用低扩增体系、增加循环次数和多次平行扩增等方法扩增DNA样本,采用叠加比较的方法分析STR分型。结果 15cm脱落毛发样品DNA含量大于0.3ng的样品占52.8%,STR分型成功率为55.6%;15cm毛干样品DNA含量大于0.3ng的样品占30.6%,STR分型成功率为25%。结论采用增加循环次数、多次平行扩增等LCN-STR分型方法和Mini-STR试剂盒有助于脱落毛发及毛干的STR基因座分型获得。

脑出血后星形胶质细胞表达运铁蛋白LCN2

目的探讨脑出血时脑内LCN2表达情况。方法雄性SD大鼠基底节区注射自体动脉血(100μl)。对照组大鼠术式相同注射等量生理盐水。Western blot(以β-actin比值矫正)和免疫组化方法分析脑LCN2表达。结果 LCN2阳性细胞只在脑出血同侧基底节区表达(对侧不表达),对照组出血同侧LCN2表达极微弱。Western blotting定量发现在出血侧基底节区,出血后1、3、7d LCN2蛋白水平显著升高,14d后下降。脑出血3d时出血侧LCN2蛋白水平较对侧高71倍(2.70±0.46 vs 0.04±0.01,P<0.001),较对照组高84倍(0.92±0.14 vs0.01±0.01,P<0.001)。LCN2阳性细胞形态似为星形胶质细胞,免疫组化双染证实LCN2与胶质细胞标志物GFAP共定位。结论本研究提示脑出血后释放的铁离子诱导载铁蛋白LCN2表达。LCN2在血肿清除铁转运过程中可能起重要作用。

Protective effect of resveratrol on lens epithelial cell apoptosis in diabetic cataract rat

Objective:To study the protective effect of resveratrol on lens epithelial cell apoptosis in diabetic cataract rat.Methods:A total of 84 Wistar rats were divided into 4 groups:12 in Group A(control group).24 in Group B(diabetic cataract group),24 in Group C(therapeutic-dose of resveratrol group) and 24 in Group D(low-dose of resveratrol group).Rats in Group B-D were given with60 mg/kg streptozotocin through intraperitoneal injection.Rats in Group C were given with 100mg/kg resveratrol and rats in Group D were given with 20 mg/kg resveratrol.The caspase-3expression levels and apoptosis ratios of LEC among each group were observed:the degrees of lens opacity in Group B-D after 12 weeks were compared.Results:There were significant differences in caspase-3 expression levels,apoptosis ratios of T.F.C among groups at 4 w,8 w and12 w(P<0.05).After 12 weeks,in Group B the degree of lens opacity was as follow:0(0.00%) in grade Ⅰ,3(37.50%) in grade Ⅱ,2(25.00%)in grade Ⅲ,2(25.00%)grade Ⅳ,and 1(12.50%) in gradeⅤ:in Group C:2(25.00%)in grade Ⅰ,4(50.00%) in grade Ⅱ.2(25.00%)in grade Ⅲ,0(0.00%)gradeⅣ,and 0(0.00%) in grade Ⅴ;in Group D:1(12.50%)in grade Ⅰ,4(50.00%) in grade Ⅱ,2(25.00%)in grade Ⅲ,1(12.50%) grade Ⅳ,and 0(0.00%) in grade Ⅴ.The.difference among Group B-D was statistically significant(P<0.05).Conclusions:Resveratrol has protective effect on lens epithelial cell apoptosis in diabetic cataract rat,and the effect is relative to its dose.

PCR扩增循环数增加对低拷贝模板STR分型的影响

低拷贝模板(low copy number,LCN)最初由Gill等[1]定义为低于100pg的DNA模板量.但Budowle等人[2]认为LCN定义为"正常分析随机阈值以下的任何结果的分析和解释"更为合适.应用低于试剂盒规定的最小DNA模板量进行STR扩增检验,并对结果加以分析解释,被定义为低拷贝模板STR分型[3].……

辛算法在LCN计算中的应用

本文将辛算法应用于LCN的计算,发现辛算法与非辛算法相比有着明显的优点.

LCN总线技术及在楼宇防盗系统中的应用

文章对LCN总线进行了介绍,讨论了在智能楼宇中,由LCN总线实现楼宇防盗系统的设计方法,包括系统的网络结构、LCN智能节点、可视对讲系统结构、家庭控制器以及系统软件流程的设计等。由LCN总线实现的楼宇防盗系统结构简单、可靠性高和可扩展性强,说明LCN总线在智能建筑领域的应用前景非常广阔。

淋巴囊肿病毒锌指蛋白基因lcn140的原核表达与结构分析

应用生物信息学分析方法,预测到中国牙鲆淋巴囊肿病毒分离株(LCDV-cn)的lcn140基因编码锌指蛋白。为了进一步研究lcn140基因的功能,本文对lcn140基因进行了原核表达与结构分析。首先将lcn140基因克隆到pET24a(+)原核载体,再以E.coliBL21(DE3)为宿主菌表达目的蛋白;通过生物信息学软件分析,了解其结构与序列特征。结果表明,lcn140基因在原核载体中得到成功表达,表达的his标签融合蛋白主要以包涵体形式存在;在结构和序列方面,lcn140基因编码C3H1型锌指蛋白,其含有4个C3H1锌指结构和4段简单重复序列。该结果为LCDV-cn的发生、发展提供了分子基础。

全基因组扩增技术及其在法医遗传学中的应用前景

全基因组扩增技术是近年来发展起来的新型PCR技术,它提供了一种从微量基因组DNA获取大量遗传信息的途径,为法医处理微量检材提供了一个有用的工具。本文综述了全基因组技术及其种类和原理和其在法医遗传学方面的应用前景。

氟西汀在实验性自身免疫性脑脊髓炎中的保护作用研究

目的：探讨载脂蛋白2（Lipocalin2，LCN2）、CXCL10与实验性自身免疫性脑脊髓炎（Experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）的关系及氟西汀在EAE中的作用。方法：通过随机数字表将实验C57BL/6小鼠随机分为对照组、EAE组、干预组及氟西汀组，每组各20只。建模前经紫外线（280～320 nm）照射，干预组及氟西汀组建立EAE动物模型。于小鼠免疫第一天起氟西汀组小鼠连续给予氟西汀（10 mg/kg）灌胃；对照组、干预组和EAE组小鼠连续给予等量生理盐水灌胃，持续至实验结束。比较各组小鼠平均发病时间、神经功能评分、发病率；采用HE染色、免疫组织化学染色法观察各组小鼠脑组织病理变化；采用酶联免疫吸附法检测血清中CXCL10含量的变化并进行比较。结果：氟西汀组小鼠平均发病时间、神经功能评分、发病率均低于干预组、EAE组（ P＜0.05）。干预组低于EAE组（ P＜0.05）。氟西汀组小鼠脑组织中炎性反应较EAE组轻；LCN2免疫组化染色显示阳性细胞秩次明显低于EAE组（ P＜0.05）。血清中CXCL10含量氟西汀组较EAE组降低（ P＜0.05）。 EAE组LCN2水平与CXCL10含量相关。结论：LCN2、CXCL10与EAE存在重要联系，氟西汀可改善EAE临床症状，缓解EAE的发病情况。

基于LCN的医疗知识问答模型

中文医疗领域分词比较困难,导致现有算法对于医疗问题特征提取不充分,针对中文分词的特点,提出基于LCN(Lattice CNN,格子卷积神经网络)的医疗知识问答模型.首先,利用某三甲医院提供的15000份电子住院记录,基于电子住院记录利用Glove模型训练医学词向量.其次,通过各大医疗网站获得大量医学名词及名词间的关系,构建医学知识图谱,并提取知识图谱中的关系词,结合已训练的词向量获取关系向量.最终,以医学词向量作为模型输入端并利用LCN神经网络提取医疗问题特征,计算问题特征与关系向量的相似度,进而训练医疗知识问答模型.实验表明,LCN模型准确率可达89.0%,与同类问答模型比较,提高了2%.

肺癌骨转移患者血清和转移灶中LCN2和PDGF-BB的检测及意义

目的探讨脂质运载蛋白2(lipocalin-2,LCN2)和血小板衍生生长因子BB(platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)在肺癌患者血清、癌组织和骨转移灶中的表达。方法应用蛋白芯片筛选19例(9例仅发生骨转移和10例无远处转移)肺癌患者血清中差异表达的细胞因子;采用免疫组化法检测12例无远处转移的肺癌原发灶和12例仅发生骨转移的骨转移灶中LCN2和PDGF-BB因子的表达。结果非小细胞肺癌患者血清中LCN2和PDGF-BB在骨转移组中的表达明显高于无远处转移组(P <0. 05);小细胞肺癌患者血清中未检测到差异表达的细胞因子(P> 0. 05)。免疫组化结果显示LCN2和PDGF-BB在非小细胞肺癌患者骨转移灶中呈高表达,高于肺癌原发灶组织(P <0. 05)。结论 LCN2、PDGF-BB在非小细胞肺癌骨转移患者血清及骨转移灶中高表达,可能在骨髓微环境中参与肺癌骨转移的发生、发展,有望成为肺癌骨转移的重要检测指标和潜在治疗靶点。

猴附睾特异性表达基因LCN6第5号内含子的克隆及分析

用PCR法扩增了猴LCN6基因第5号内含子区的基因组DNA片断,并将该片断克隆到T-载体中,用SouthernBlot的方法鉴定阳性克隆。经测序后与人LCN6基因的第5号内含子相比较,两者的同源性达到了87%。根据对已有小鼠,大鼠,猴及人LCN6基因第5号内含子DNA序列比较,可知在LCN6基因的进化中由于基因组DNA序列,特别是剪切位点的改变使得原本在小鼠中转录的一个转录子mLCN6β在大鼠、猴及人中不被转录。

携带Lipocalin 2基因重组减毒沙门菌的构建及其对分枝杆菌生长影响的研究

目的:探讨携带脂质运载蛋白2(lipocalin 2,Lcn2)的减毒沙门菌对分枝杆菌生长的影响。方法:以巨噬细胞RAW264.7提取RNA逆转录为c DNA为模版,采用PCR法扩增Lcn2基因,定向克隆到质粒pBudCE4.1-orim的多克隆位点中,构建重组质粒pBudCE4.1-orim-Lcn2;将重组质粒转染RAW264.7细胞,用RT-qPCR法检测Lcn2的mRNA相对表达量,并以空白载体为对照组;将重组质粒转入减毒沙门菌SL7207得到重组菌株SL7207-pBudCE4.1-orim-Lcn2;重组菌感染RAW264.7细胞,Western blot检测Lcn2的蛋白表达,RT-qPCR法检测Lcn2的mRNA的相对表达量,并以空载菌组为对照;7H10平板上通过菌落计数观察重组菌对感染RAW264.7细胞的卡介苗(Bacille calmette-guerin,BCG)生存的影响,以空载菌组为对照。用重组菌灌胃小鼠,检测脾组织Lcn2和血清IFN-γ水平,以空载菌和生理盐水为对照组。结果:PCR扩增出Lcn2基因;重组质粒经双酶切及基因测序鉴定正确。重组菌感染RAW264.7细胞Lcn2的蛋白表达量较对照组增加(P=0.000)。RT-qPCR法检测重组菌、重组质粒Lcn2 mRNA表达较对照组明显升高(P=0.000,F=5.281;P=0.000,F=22570)。7H10平板上重组菌组BCG数量与空载菌组相比明显减少(P=0.000,F=11.41)。重组菌组与空载对照菌组相比小鼠脾组织Lcn2表达升高(P=0.000,F=4.449),重组菌组与生理盐水组血清IFN-γ升高(P=0.004,F=15.27)。结论:成功构建了携带Lcn2基因的重组减毒沙门菌。重组菌感染RAW264.7细胞后Lcn2的表达增加,对感染RAW264.7的BCG存活起到一定的抑制作用。重组菌灌胃后小鼠脾组织Lcn2表达增加,血清IFN-γ含量增加,小鼠免疫状态有利于结核病转归。该研究为进一步研究脂质运载蛋白和结核分枝杆菌感染的关系及分子机制打下基础。

细菌素Lcn972A产生菌的鉴定及其基因的克隆与序列分析

目的:从杏鲍菇子实体与海带中分离的63株乳酸菌中鉴定出产细菌素Lcn972A的菌株,并对细菌素编码基因进行克隆与基因序列分析。方法:采用生物信息学手段对已报道的细菌素Lcn972A编码基因进行分析比较,设计引物,分别以各乳酸菌基因组DNA为模板,利用PCR克隆技术克隆出细菌素Lcn972A的基因,利用生物信息学工具对其核酸序列和预测的蛋白序列进行分析。结果:在63株乳酸菌的基因组样品中有15组被克隆出目的条带,其中杏鲍菇乳酸菌A15与海带乳酸菌CX2样品PCR产物条带清晰稳定性好,经鉴定两样品的乳酸菌株为乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)。对克隆的细菌素Lcn972A基因测序结果表明该基因序列全长276 bp。生物信息学分析显示该基因编码91个氨基酸,分子量大小22843.3 u,等电点5.33,氨基酸序列为亲水性,二级结构主要由α-螺旋、无规卷曲和延伸链组成。结论:从分离自杏鲍菇子实体乳酸乳球菌A15与海带乳酸乳球菌株CX2的细菌素编码基因及氨基酸序列与报道的有所不同,可能是新的细菌素,该细菌素的抗菌特点有待进一步的研究。