乐尔脉对脑缺血再灌注损伤后期大鼠海马神经细胞凋亡的作用

目的:探讨乐尔脉胶囊(LEM)对脑缺血再灌注损伤后期大鼠海马神经细胞凋亡的作用与机制。方法:采用大鼠左侧大脑中动脉内栓线阻断法(MCAO)造成局灶性脑缺血再灌注模型。缺血2h再灌注30d后,应用原位末端标记法(TUNEL)检测海马神经细胞凋亡,免疫组化、RT-PCR法检测海马神经细胞Fas、Bax、caspase-3、caspase-9蛋白及mRNA的表达,并进行阳性细胞计数及Mias图像程序分析结果。结果:大鼠缺血再灌注30d后,模型组缺血侧海马CA1、CA2区凋亡细胞显著高于假手术组(P<0.05),Fas、Bax、caspase-3、caspase-9蛋白表达明显增加,fas、bax、caspase-3、caspase-9mRNA的表达上调(P<0.05)。LEM2.00g/kg、0.87g/kg和氟桂利嗪可显著减少海马神经细胞凋亡数,降低Fas、Bax、caspase-3、caspase-9蛋白表达,fas、bax、caspase-3、caspase-9mRNA的表达下调,LEM0.87g/kg作用次于2.00g/kg。LEM对baxmRNA有显著抑制作用。结论:LEM抑制海马神经细胞的凋亡,明显地减轻缺血再灌注后期大鼠海马神经细胞的损伤,其作用机制与调节细胞凋亡信号转导通路及相关蛋白有关。

乐尔脉对脑缺血再灌注损伤大鼠海马组织炎性反应的影响

目的研究乐尔脉对大鼠脑缺血再灌注损伤海马组织炎性反应的作用。方法采用大鼠大脑中动脉阻断(middle cerebral artery occlusion,MCAO)造成局灶性脑缺血2h再灌注3d模型,采用干燥法测定脑含水量和TTC染色法测定脑梗死面积,化学法与I-125放免法测定海马组织中MDA、LD、TNF-α、IL-6含量,RT-PCR测定海马组织中COX-2、MCP-1、MMP-2、9、13mRNA的表达,Western blot检测海马组织P38与NF-κB信号通路蛋白的表达。结果乐而脉与氟桂利嗪可明显减轻脑水肿和梗死面积,降低海马组织中IL-6、TNF-α、MDA和LD含量(P<0.05),海马组织中MCP-1、COX-2、MMP-2、13mRNA的表达下调(P<0.05)。Western blot测定结果显示乐尔脉和氟桂利嗪组明显降低海马组织P38MAPK和P-P38MAPK表达(P<0.05),同时也降低NF-κB65、P-NF-κB65、C-fos表达,增加C-jun与IκB表达(P<0.05),氟桂利嗪降低NF-κB65但不降低p-NF-κB65表达。结论脑缺血再灌注诱导海马组织细胞释放的细胞因子和介质活化P38MAPK与NF-κB/IκB信号转导通路级联反应,MCP-1、COX-2mRNA和MMP-2、9、13mRNA转录增加,IL-6、TNF-α、MDA、LD生成增多,导致脑水肿和脑梗死面积扩大,乐尔脉抑制脑缺血再灌注诱导海马组织细胞释放炎症介质的作用可能与降低p38MAPK和NF-κB/IκB信号通路活化作用有关。