胚泡表面Le^Y寡糖对小鼠胚泡纤维粘连蛋白、层粘连蛋白表达及分泌的影响

目的 体外观察 L e Y 寡糖对着床前小鼠胚泡细胞外基质 ( ECM)主要成分纤维粘连蛋白 ( FN)、层粘连蛋白 ( LN)的表达和分泌的影响。 方法 采用特异性单克隆抗体 AH6阻断胚泡表面 L e Y寡糖 ,运用半定量逆转录 -聚合酶链反应 ( RT-PCR)及免疫印迹法检测 L e Y寡糖对着床前小鼠胚泡 FN及 LN的表达和分泌的影响。 结果 在体外培养中 ,经 AH6封闭胚泡表面 L e Y 寡糖抗原后仅 1 .5h,胚泡 FN及 L N的分泌有明显升高 ( P<0 .0 1 ) ,并且持续 6 h以上 ,而胚泡 FN及 L N的基因转录表达变化不明显 ( P>0 .0 5)。 结论 胚泡表面的 L e Y寡糖抗原对着床前胚泡的 FN及 L

不同条件下小鼠围着床期子宫内膜整合素α_v和Le^y寡糖的表达

目的:探讨促排卵药、胚胎本身及孕后激素等条件对小鼠子宫内膜整合素av和Ley寡糖的表达及对着床窗开放的影响。方法:将成年雌鼠分为对照和实验两大组。对照组为自然受孕;实验组为用促排卵药后受孕,其中一部分为假孕,另一部分为事先行一侧输卵管结扎。各组分别于孕2-7 d取子宫标本2份,一份石蜡包埋行HE染色和免疫组化染色测定Ley寡糖,另一份于-80℃保存,冰冻切片行免疫组化染色测定整合素av。结果:①对照组于孕7 d,大部分小鼠子宫外观即见明显胚胎着床,显微镜下从孕5 d起出现子宫内膜间质的蜕膜反应,但实验组无1例有此变化。②整合素av在小鼠子宫内膜腺上皮细胞胞浆内表达。对照组的表达于孕4 d达高峰,而各实验组的表达高峰均推迟1-2 d,且表达水平较对照组明显减弱(P <0.05)。结扎侧和未结扎侧子宫内膜整合素av的表达高峰无明显差异。③Ley寡糖在小鼠着床期表达于子宫内膜腔上皮和腺上皮表面,其表达两组间无明显差异,不同妊娠天数之间的表达亦无明显差异。在对照组,于孕4 d开始Ley寡糖在子宫内膜间质有表达,孕6 d达高峰,而实验组未见一定的规律。结论:①小鼠子宫内膜腺上皮细胞胞浆内整合素av的表达与子宫内膜着床窗的开放一致。②促排卵药能抑制小鼠子宫内膜着床窗期整合素av的表达,延迟着床窗的开放;

单克隆抗体阻断Le^Y寡糖对小鼠胚泡细胞外基质与基质金属蛋白酶的影响

目的:探讨着床前阶段表达的LeY寡糖对小鼠胚泡细胞外基质(ECM)与基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响。方法:应用半定量RT-PCR及免疫印迹法观察体外培养的着床前表面LeY寡糖被封闭的胚泡ECM主要成分纤维粘连蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)和其水解酶类MMP-2,MMP-9的表达和分泌水平的变化。结果:体外培养表面被封闭胚泡6 h,其FN及LN的分泌明显升高(P<0.01),但随着培养时间延长,其增高水平有下降趋势,而其基因的转录变化不明显。在同一时期内,胚泡MMP-2、MMP-9的分泌明显被抑制,其抑制程度随培养时间延长减弱,其基因表达也被抑制,与其分泌水平的变化趋势一致。结论:LeY寡糖抗原被封闭使MMPs的分泌和基因表达被抑制的同时,FN、LN的分泌增加,提示可能与LeY寡糖封闭引起MMPs的活性下降,使其底物FN、LN分解减少,从而引起含量增加有关。

人子宫内膜LewisY寡糖抗原的表达和调控

目的 :探讨雌、孕激素对月经周期中 Ley寡糖抗原表达的影响。方法 :取 32例子宫肌瘤术后患者的内膜 ,经病理检测 ,分为四组 :增生期、分泌期、分泌期服用米非司酮 ( Mifepristone)及增生期服用妇康片 (炔诺酮 ) ,每组 8例 ,每例均重复实验。应用免疫组化及 Westhern免疫印迹法 ,观察了Ley寡糖抗原的表达。结果 :( 1 )各组样品的 Ley寡糖抗原均分布于宫腔上皮细胞和腺腔上皮细胞表面 ;( 2 )每组样品中 Ley糖蛋白均有四种分子量 :68k D、60 k D、5 2 k D、2 7k D表达 ;( 3)两种分析方法结果均显示 :Ley糖蛋白在分泌期高表达 ,增生期低表达 ,两组间差异显著 ( P<0 .0 0 1 ) ;分泌期服用孕激素拮抗剂米非司酮则表达明显减少 ( P<0 .0 0 1 ) ;增生期服用妇康片 (主要含孕激素 )的表达较增生期明显增多 ( P<0 .0 0 1 ) ,其中以 68k D组分的变化最为显著。结论 :人子宫内膜 Ley寡糖抗原的表达受孕激素上调 ,其中以 68k

在共培养体系中单克隆抗体AH_6对小鼠胚泡着床的影响

以单克隆抗体ＡＨ６［特异结合ＬｅＹ寡糖，Ｆｕｃα１２Ｇａｌβ１４（Ｆｕｃα１３）ＧｌｃＮＡｃ］以及其它３种与ＬｅＹ寡糖结构近似的寡糖特异结合的单克隆抗体αＬｅａ、αＬｅｂ和ＦＥＡ５为工具，采用小鼠体外着床模型，研究细胞表面ＬｅＹ寡糖抗原与着床的关系及其在着床过程中的具体作用环节。结果显示：不论子宫上皮细胞表面还是胚胎滋养层细胞表面的ＬｅＹ寡糖抗原被封闭后，都能导致胚胎在单层子宫上皮细胞表面粘附和扩展生长的延迟，但对胚胎最终的扩展程度并无影响，而其它３种单克隆抗体对胚胎的粘附则均无影响。说明这种作用具有明确的寡糖结构特异性。另外，运用免疫荧光方法观察到，胚胎在单层子宫上皮细胞表面的粘附与ＬｅＹ寡糖在细胞表面的消长密切相关。因而认为ＬｅＹ寡糖抗原在胚胎着床中可能是作为一种中介分子参与着床始发阶段的胚胎与母体间的识别和粘着。实验中经单克隆抗体处理后胚胎和单层子宫上皮细胞与对照组比较，其形态与发育未见不同。