转TERF1和LeERF2双价基因旱稻及其逆境光合特性研究

为了提高旱稻对干旱、盐及低温综合胁迫的抗性,构建了含有抗旱抗盐功能的TERF1和抗盐抗冷功能的LeERF2转录因子的双价植株表达载体;以秦爱、旱65和旱297三种旱稻品种为材料,通过农杆菌介导法将以上两转录因子转入受体材料中,获得了经PCR及Southern检测证实同时整合双价基因的T0及T1转基因植株。T1代转基因植株经不同程度NaCl、PEG、冷单一逆境处理和冷盐综合逆境处理后,仍保持着较高的净光合速率(Pn)和PSⅡ最大光化学效率(Fv/Fm),能量转换机构不易受损,有较强的光保护机制。3个品种的转基因株系对这三种胁迫的抗性均比对照有明显提高。

农杆菌介导的反义LeERF2基因转化番茄

利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的叶盘法将LeERF2反义基因导入中蔬四号番茄(Lycopersicon esculentumcv.No.4 Zhongshu)进行遗传转化研究。在卡那霉素选择压力下获得的再生植株,经过PCR、点杂交和Southern杂交鉴定,证实了该反义基因已导入番茄基因组中,共获得了25棵转基因植株,并建立了一个高效的番茄转化体系。Northern杂交结果表明,转反义LeERF2基因番茄果实外果皮LeERF2基因表达水平比野生型番茄低。

番茄乙烯信号转录因子LeERF2在大肠杆菌中的表达和纯化

从破色期番茄果实中提取了总RNA,用RT-PCR方法从中克隆到了627bp全长LeERF2基因。测序结果分析表明,该LeERF2基因序列与已发表序列的同源性为100%。将LeERF2基因亚克隆至载体pET-30a上,构建了原核表达载体pET-LeERF2,将其转化到大肠杆菌BL21中。蛋白质诱导表达的温度为37℃,诱导剂IPTG浓度为1mmol/L,诱导时间为3h,LeERF2表达蛋白在细菌沉淀中约占菌体总蛋白的58%。应用Ni-NTA亲和层纯化回收的LeERF2表达蛋白的纯度为99%。银染凝胶阻滞实验表明,LeERF2蛋白能与含有GCC盒的逆境相关的几丁质酶启动子基因TLBP1结合。

番茄乙烯信号转录因子LeERF2多克隆抗体的制备

目的:作为番茄乙烯信号转录因子,LeERF2是在蛋白水平单独或同其他蛋白质协同与启动子或增强子相结合发挥其调控功能的,蛋白质的调控机制是信号转导领域中的关键研究内容。本研究目的是制备LeERF2抗体用于探讨番茄乙烯信号转录因子LeERF2在蛋白水平的生物活性及其生物学功能。方法:通过免疫新西兰大耳白雄兔和DEAE-52离子交换柱纯化分离制备了抗LeERF2多克隆抗体。结果与结论:抗体的效价大于10000,纯度达到了99%,Western印迹检测纯化后抗LeERF2多克隆抗体具有免疫特异性。

LeERF2基因对旱稻耐盐性的影响

采用T2代转LeERF2基因旱稻(旱297)为材料,研究分蘖期盐胁迫下植株光合性能和生理反应。结果表明,50mM NaCl胁迫条件下,转基因植株(T)和野生型对照(WT)的各项光合参数差异不明显,但在100 mM NaCl胁迫条件下,转基因植株仍能维持较高的光合速率和气孔导度。随着NaCl胁迫浓度增加,野生型旱稻和转基因旱稻植株叶片SOD活性增加幅度加大,但都表现为转基因植株增幅更明显,而MDA含量则表现为野生型植株增幅更明显,表明LeERF2基因增强了旱稻盐胁迫下抗氧化能力,提高了耐盐性,能维持较高光合速率。