转反义LeETR1基因番茄采后生理特性的研究

转反义LeETR1乙烯受体基因番茄的采后生理性状与普通番茄不同。转基因番茄的呼吸作用受到抑制 ,呼吸高峰只有对照的 5 2 % ,乙烯释放高峰的出现比对照果实推迟 10d。转基因番茄的叶绿素降解和番茄红素的合成受到显著抑制 ,果实不能形成正常的红色。在成熟过程中 ,转基因番茄的纤维素酶、多聚半乳糖醛酸酶活性显著低于对照 ,延缓了果肉的软化。

LeETR1反义基因对番茄的遗传转化

从番茄果实中提取总RNA,根据GeneBank中LeETR1序列,设计合成特异性引物,利用RT-PCR技术克隆了LeETR1基因3’端非编码区313 bp的cDNA,经酶切图谱和序列分析鉴定无误后,反向插入到植物表达载体pPZP111A中,构建了表达LeETR1反义RNA的双元载体。经农杆菌途径转化番茄品种B1后,通过PCR检测从抗卡那霉素再生植株中筛选到13株阳性植株,Southem blot杂交确证反义基因已经整合到番茄染色体中。对果实乙烯释放的测定结果表明,转基因番茄乙烯释放高峰的出现比对照果实推迟10天,番茄红素的合成受到显著抑制,果实不能形成正常的红色。推测LeETR1和番茄的成熟有着密切的关系。

乙烯受体基因LeETR1在番茄突变体Epi及其野生型中的表达

采用核酸酶保护分析 (RPA)方法对番茄乙烯过表达单基因突变体Epi和野生型VFN8中LeETR1mRNA的表达特征进行了研究。结果表明 ,在正常番茄中LeETR1mRNA不受内源乙烯含量的影响 ,呈组成性表达。LeETR1mRNA在Epi部分组织中的表达强度发生了改变 ,并与Epi的形态特征变化相吻合 ,提示LeETR1在叶片的形态建成。

反义LeETR1转基因番茄的生殖发育毒性及外源基因转移试验

目的评价反义LeETR1转基因番茄(ETR1)向动物肠道菌群和子代动物转移外源基因的能力及对小鼠生殖发育的影响。方法SD大鼠和ICR小鼠连续饲喂ETR1、非转基因番茄(B1)和蒸馏水30 d后,分别进行大鼠盲肠菌群培养物的抗生素耐药性试验及小鼠生殖毒性试验,提取耐药阳性菌、亲代和子代小鼠的基因组进行外源基因特异性聚合酶链式反应法(PCR)。结果肠道菌的耐药性和小鼠生殖发育情况无明显改变,在耐药菌和两代小鼠体内均未发现由受试物引入的外源基因。结论ETR1对小鼠无生殖毒性,其携带的外源基因不能向动物体细胞、肠道菌及子代动物转移。