转番茄铁载体基因(LeIRT2)八棱海棠株系的鉴定

【目的】选育具有抗缺铁能力的苹果属植物新种质。【方法】通过半定量式RT-PCR检测、印迹杂交、营养液pH的变化和低铁(铁浓度为10-6mol·L-1)水培条件下,根系和叶片的金属元素含量分析。【结果】在通过Southern杂交获得的9个转番茄铁载体蛋白基因八棱海棠(Malus robusta Rehd.)株系中,有6个转基因株系成功转录,目的基因在叶片和根系中都有表达。其中2个在缺铁情况下显著提高了根系总铁的含量和叶片中活性铁的含量,同时也大幅度提高了根系和叶片中锌的含量。【结论】转番茄铁载体蛋白基因八棱海棠株系表现出较强的抗缺铁胁迫能力。

缺铁胁迫下转番茄铁载体蛋白基因八棱海棠对矿质元素吸收的影响

在不同浓度缺铁水培条件下,采用电感耦合等离子体原子发射光谱仪(ICP-AES)测定转基因和非转基因植株叶片和根系Ca2+、Mg2+、Ni2+的含量。研究结果表明:在Fe2+浓度为1μmol.L-1时,转番茄铁载体蛋白基因(LeIRT2)八棱海棠株系叶片中Mg2+的含量显著低于非转基因株系,而根系Mg2+的含量显著高于非转基因株系;该浓度下转基因株系根部Ni2+含量显著高于非转基因株系,叶片中Ni2+含量与非转基因株系无显著差异。Fe2+浓度为10μmol.L-1时,转基因株系叶片和根系Mg2+、Ca2+的含量与非转基因株系无显著差异。Fe2+浓度为1μmol.L-1时,转基因株系叶片和根系Ca2+的含量与非转基因株系无显著差异。无铁条件下在叶片和根系中Ca2+、Mg2+含量无显著差异。

农杆菌介导番茄铁载体蛋白基因LeIRT_2转化烟草的研究

构建了含有目的基因 L e- IRT2 的双元载体 p YF84 0 ,并成功地将植物性内含子构建到筛选标记基因新霉素磷酸转移酶基因 npt 和 gus报告基因中 .利用农杆菌介导法 ,将铁载体蛋白 L e- IRT2 基因导入革新一号烟草 ,PCR、PCR- Southern blotting及 Southern blotting检测结果显示 ,有 3个烟草株系的基因组中整合了完整的铁载体基因 L e- IRT2 .水培试验结果显示转基因株系 1、3不但提高了植株的铁吸收能力 ,而且还促进了植株的生长 ,但转基因株系 2却与对照无明显区别 .

转番茄铁载体基因(LeIRT_2)八棱海棠对缺铁胁迫的响应

在低铁(铁浓度为10-6mol·L-1)水培条件下,2个转番茄铁载体蛋白基因八棱海棠(MalusrobustaRehd.)株系表现出较强的抗缺铁胁迫能力。叶片叶绿素含量和净光合速率显著高于对照;叶片细胞间隙CO2浓度显著低于对照;根系的质子分泌和三价铁螯合物还原酶(FCR)活性均升高,明显强于同样条件下的非转基因植株。根系扫描电镜结果显示,转基因株系根系的吸收区和根毛的表面结构皱折增多,表面积增大。

通过农杆菌介导将番茄铁转运蛋白基因导入八棱海棠(英文)

用农杆菌介导法,成功地将番茄铁转运蛋白基因导入了苹果砧木八棱海棠。获得了19个卡那霉素抗性株系,其中有11个株系经PCR鉴定为阳性。Southern杂交结果显示:有9个转基因株系基因组中整合了完整的目的基因。选择其中含有单拷贝和3个拷贝目的基因的各一个株系进行水培试验,结果表明整合了单拷贝目的基因的转基因株系表现出较强的抗缺铁胁迫能力,5周后其植株的鲜重比对照高21%￣34%。

外源基因对八棱海棠株系组培苗生根的影响

以南京农业大学生物技术实验室获得的两个转番茄铁载体蛋白基因八棱海棠株系B4、B5组培苗的茎段为试材,以非转基因八棱海棠为对照,研究转基因对生根情况的影响。结果表明:在相同IBA或者IAA浓度下,转基因八棱海棠生根率明显低于对照植株;而从根长来看,在IBA的条件下,转基因株系明显低于对照,而在IAA的条件下则不明显;在IAA条件下平均根数也少于对照。