番茄LeNHX3基因的生物信息学分析

应用生物信息学的方法和工具对番茄LeNHX3蛋白质的理化性质、跨膜区域、疏水性/亲水性、二级结构、结构功能域、功能分类和同源性进行了分析,结果表明,番茄LeNHX3蛋白为疏水性稳定蛋白,包含一个高度保守的具有氨氯吡嗪咪结合位点的LFFIYLLPPI结构功能域,相对分子量为59.4kD,等电点为8.54,可能存在10个跨膜区域,蛋白质二级结构中的主要构成元件是α-螺旋和不规则卷曲;蛋白质同源性分析后,发现番茄LeNHX3蛋白和紫高杯花、矮牵牛花2种植物的Na+/H+反转运蛋白高度同源,序列相似性为90%。

番茄LeNHX3基因的克隆与植物过量表达载体的构建

从番茄幼苗中提取RNA,根据TIGR基因索引数据库中番茄LeNHX3基因序列设计引物,通过RT-PCR获得了番茄LeNHX3基因的cDNA序列,包含一个1 614 bp的开放阅读框,编码537个氨基酸。将cDNA序列连接到植物过量表达载体PBI121上,对所获得的重组质粒进行双酶切鉴定,结果表明植物过量表达载体PBI121-LeNHX3已构建成功。