浙江省台州市区中央空调冷却水军团菌污染调查分析

目的:初步了解台州市区中央空调冷却塔水中军团菌污染状况和血清型别,为制定控制措施提供依据。方法:采集台州市区25家公共场所集中式中央空调冷却塔水30份,经酸处理,以GVPC、BCYE、血平板进行菌落筛选,并应用生化反应、PCR鉴定,最后进行血清学分型。结果:30份冷却塔水军团菌检出率达56.67%(17/30),其中酒店、办公楼、医院、商场的阳性率分别为68.75%、50.00%、42.86%、33.33%。17份水样中分离到25株军团菌,嗜肺军团菌占80.00%(20/25),博杰曼军团菌占20.00%(5/25),血清型别多样化,但以LP1为主,同一份水样同时检出2个或3个型别的占总检出水样的41.18%(7/17)。结论:台州市区公共场所中央空调冷却水中军团菌污染严重,血清型别多样化,对人群健康构成潜在威胁。

军团菌与同一空调水环境中分离的自由生活阿米巴的共培养观察

目的:通过从同一环境的同一份水样中分别分离出自由生活阿米巴和军团菌,然后将两者在实验室条件下共培养,观察两者的形态,从而推测两者在自然环境下的相互关系。方法:用微孔滤膜过滤,盐酸处理和抗生素抑制杂菌的方法分别从同一份水样中分离军团菌和自由生活阿米巴,然后将两者在实验室条件下进行共培养;取片后G im enes染色,普通光学显微镜下观察,72 h后收集共培养物做超薄切片电镜下观察,研究两者的形态。结果:分别分离到1株I型嗜肺军团菌和一株棘阿米巴。两者进行共培养发现军团菌可以感染阿米巴,光镜下观察,8 h后阿米巴体内即可发现军团菌,24 h后开始增多,72 h后阿米巴滋养体呈高度寄生状态,玻片上可见被裂解的滋养体遗骸。电镜照片显示被吞食的军团菌被多层膜结构缠绕。结论:阿米巴吞噬细菌是一种缠绕吞噬的方式,水样中分离到的军团菌能在同样本中分离到的自由生活阿米巴内生长繁殖,从侧面证实环境水体中自由生活阿米巴是嗜肺军团菌的自然宿主。

大连市宾馆酒店空调通风系统卫生状况调查

目的掌握宾馆酒店业空调系统卫生状况本底资料。方法随机抽取大连市5星级宾馆和酒店运行2年以上的空调系统,测定每套空调系统送风PM10、送风管内表面、冷却水,检测空调送风和风管内表面卫生指标及嗜肺军团菌的含量。结果在9家宾馆酒店9套空调系统中,卫生指标均合格的1套,合格率2.22%;45份空调送风的PM10、细菌总数、真菌总数合格率分别为100%、80.0%、81.11%;200份风管内表面的细菌总数、真菌总数合格率分别为93.33%、83.22%;5份冷却水嗜肺军团菌检出率为0%;空调送风未检出溶血性链球菌。结论空调系统的风管内表面和空调送风系统检出致病菌,污染严重,必须加强清洗消毒和卫生管理。

嗜肺军团菌ip基因的克隆及其原核表达

目的克隆嗜肺军团菌主要免疫原蛋白ip基因,构建重组质粒pET-ip,并在原核系统中表达。方法采用聚合酶链反应(PCR),从嗜肺军团菌基因组DNA中扩增军团菌主要免疫原蛋白ip基因,并将其定向克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建原核表达重组质粒pET-ip,经限制性内切酶鉴定、PCR及测序分析后,转化宿主菌大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹分析鉴定。结果扩增出了792 bp完整的ip基因,构建的原核表达重组质粒pET-ip表达出49 kDa Trx-IP的融合蛋白质,Western-blot证实获得蛋白为所需要的目的蛋白。结论成功构建了军团菌ip基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中得到了高效表达。

层次分析法(AHP)在军团菌杀灭方法评判中的应用

该文利用层次分析法(AHP)对军团菌杀灭方法进行综合评判。以中央空调循环冷却水系统为例,建立评价指标系统,对军团菌控制效果以及化学杀生剂进行综合评价,由此得到化学法是最适于中央空调循环冷却水系统的杀菌方法。其中军团菌特效杀菌剂的杀菌性能最佳,可作为应急处理药剂,二氧化氯、2,5-二溴海因、二氯异氰尿酸可作为日常处理药剂。在条件允许的情况下,可使用臭氧作为处理药剂。

集中空调系统嗜肺军团菌扩散传播途径研究

目的探讨集中空调系统嗜肺军团菌扩散传播途径。方法 2009年8和9月选取江苏省南京市4家公共场所,采集集中空调冷却塔底泥、冷却水上清液、风管内壁积尘及塔旁和室内送风气溶胶,采用巢式PCR方法检测嗜肺军团菌并进行核酸序列系统发育分析。结果共检测177件环境样品,冷却塔底泥、冷却水上清液、塔旁气溶胶、风管内壁积尘和室内送风气溶胶中嗜肺军团菌阳性率分别为100%(9/9),78.6%(11/14),25.4%(17/67),16.7%(2/12)和17.3%(13/75),系统发育分析显示气溶胶与冷却水中嗜肺军团菌核酸序列相似性大于92%,具有不同集中空调系统特征的场所环境样品嗜肺军团菌的总阳性率差异没有统计学意义。结论冷却水是嗜肺军团菌的主要污染源,可通过集中空调系统传播至室内空气中,且这一结果具有一定代表性。

土壤中的军团菌和嗜肺军团菌PCR检测研究

目的调查土壤中军团菌的污染状况并探讨土壤中军团菌的污染来源。方法于2009年7—9月,在江苏省南京市冷却塔水军团菌培养法阳性的公共场所集中空调冷却塔0～2m处及距离冷却塔>2km的居民区分别采集20件和10件土壤样品。普通聚合酶链反应(PCR)方法扩增军团菌属5SrRNA基因,巢式PCR方法扩增嗜肺军团菌种Mip基因,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。结果冷却塔旁土壤和居民区土壤中军团菌阳性率分别是80%(16/20)和70%(7/10);嗜肺军团菌阳性率分别是55%(11/20)和0。冷却塔旁土壤中军团菌的阳性率与居民区土壤比较,差异无统计学意义(χ2=0.373,P=0.542)。结论环境土壤中存在军团菌,受集中空调冷却塔水污染的土壤中可检出嗜肺军团菌。

呼吸系统疾病就诊患者嗜肺军团菌感染的流行病学调查

目的了解呼吸系统疾病就诊患者嗜肺军团菌(Legionella pneumonia,Lp)的感染情况并研究其影响因素。方法于2008年3—6月,以北京4家大型综合性医院的呼吸系统疾病就诊患者为研究对象,进行问卷调查和血清嗜肺军团菌抗体的测定。结果 493名呼吸系统疾病就诊患者中,共22例Lp1～7IgG抗体阳性,抗体总阳性率为4.5%;多元Logistic回归分析显示,年龄、是否曾使用集中空调、免疫抑制剂应用史为嗜肺军团菌感染的影响因素。结论呼吸系统疾病就诊患者存在嗜肺军团菌的隐性感染,老年人(≥60岁)、接触集中空调及应用免疫抑制剂是人群嗜肺军团菌感染的危险因素。

北京市丰台区集中空调公共场所嗜肺军团菌污染状况及从业人员感染水平

目的了解北京市丰台区使用集中空调的公共场所嗜肺军团菌污染状况及从业人员嗜肺军团菌感染水平。方法于2012年7—9月采集北京市丰台区20家使用集中空调的公共场所环境样品进行嗜肺军团菌的巢氏PCR检测，于2012年12月-2013年1月对集中空调公共场所701名暴露人群和非集中空调场所440名对照人群进行血清嗜肺军团菌1～7IgG抗体检测。结果空气、景观水、室外景观土、室内花卉土及作为对照的土壤样品中均未检出嗜肺军团菌。冷却水、自来水、积尘、淋浴水中均检出嗜肺军团菌，阳性率分别为84．2％，10．9％，8．7％，3．6％。暴露组和对照组血清嗜肺军团菌1-7IgG抗体活力中位数分别为13、11 U／ml，血清嗜肺军团菌抗体阳性率均为14％，差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论本次调查的公共场所集中空调系统存在嗜肺军团菌污染，需采取防治措施。

广州市亚运接待宾馆酒店淋浴热水军团菌污染状况分析

目的对广州市亚运接待宾馆酒店淋浴热水的军团菌污染状况进行调查分析,提出相应的对策。方法采集广州市48间亚运接待宾馆酒店淋浴热水108份,按照卫生部《公共场所集中空调通风系统卫生规范》2006年附录A进行军团菌的检测。结果 108份淋浴热水中,10份淋浴热水共检出11株嗜肺军团菌,阳性率为9.3%;其中LP1、LP3、LP6血清型分别占45.5%、18.2%、36.4%;三星级、四星级和五星级宾馆酒店淋浴热水军团菌的阳性率分别为15.2%、11.1%和2.6%。结论广州市亚运接待宾馆酒店的淋浴热水存在嗜肺军团菌的污染,建议定期清洗消毒淋浴设施,并加强对淋浴热水中军团菌的监测,以防范军团菌病的发生。

我国九省（市、区）82株嗜肺军团菌血清1型菌株的序列分型

目的了解我国环境水中嗜肺军团菌血清1型（Lp1）菌株的序列分型特征，并初步建伊我国军团菌序列分型数据库。方法采用序列分型（SBT）方法，对我国9个省（市、自治区）2005--2008年问环境水中分离的82株如1菌株进行分型，同时采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型方法对这些菌株进行分型，并采用BioNumerics5．1软件对2种方法的分型结果进行聚类分析和比较。结果82株Lp1菌株分为22种序列（sT）型，其中17种ST型是新序列型，新发现1个等位基因；ST-1型为主要的序列型，在8个省（市、自治区）均有发现，该型菌株占所有菌株的46．3％（38／82）；ST．1、ST．150、ST-154、ST-159、ST-160和ST-630出现于2个以上的分离地点，5个分离位点（B4、B5、B6、S3和S8）发现2种以上ST型；通过聚类分析，15种ST型被分为3个序列群（ST-1序列群、ST-154序列群和ST-149序列群），其余7种ST型没有序列群归类。采用PFGE分型方法，这些菌株可被分为46种带型。SBT和PFGE两种方法结合可将82株菌株分为54种分子型别。两种方法的聚类分析结果具有良好的-致性。结论我国环境水中Lp1菌株具有独特的SBT分布；通过研究，初步建立了我国军团菌序列分型数据库。

无锡市不同场所冷却水中军团菌污染状况和菌株分子生物学特性研究

目的了解无锡市不同场所冷却水中军团菌污染状况和菌株分子生物学特性。方法于2009-2010年对无锡市城区56家场所的冷却水采集平行水样各500ml，共112份，进行军团菌检测和定量培养，对分离到的菌株进行血清分型、PFGE分型、基因序列分型（SBT），并测定菌株在细胞内的生长能力。结果56家场所的冷却水水样中，军团菌阳性率为39．3％（22／56），总计分离到29株军团菌，血清型包括LP1、LP3、LP5、LP6，以LP1为主，占65．5％（19／29）。29株军团菌PFGE分型得到17个不同带型，其中PFGE带型各异的10株军团菌SBT分型亦不相同。以LPl菌株（ATCC33152）为参照，WX2011062（LP6）、WX2011067（LP5）细胞内繁殖能力较强[感染当天细胞内菌量分别为（5．5±1．32）×10^5、（3．9±0．60）×10^5、（7．8±0．76）×10^5CFU／ml，感染第3天细胞内菌量分另1为（58．3±1．61）×10^5、（2700．0±655．74）×10^5、（3066．7±208．17）×10^5CFU／ml]。结论无锡市不同场所冷却水普遍存在军团菌污染，菌型呈现基因多态性，存在巨噬细胞内生长能力较强的菌株。

2012年10月-2013年10月深圳市公共场所水系统嗜肺军团菌污染现状

目的了解深圳市公共场所水系统嗜肺军团菌污染情况。方法 2012年10月-2013年10月随机采集本市41家公共场所冷却水、冷凝水、淋浴水、自来水、泳池水共194份水样按照《公共场所集中空调通风系统卫生规范》附录B方法进行检测嗜肺军团菌及其菌型。结果嗜肺军团菌阳性率冷却水为46.2%(32/69)、自来水为42.3%(22/52)、淋浴水为34.6%(18/52),冷凝水、泳池水未检出嗜肺军团菌;嗜肺军团菌冷却水阳性率在酒店宾馆为54.2%(13/24)、商场为36%(9/25)、候诊室为62.5%(5/8)、地铁站为41.7%(5/12),场所间差异无统计学意义(χ2=2.611,P=0.455);分离出79株嗜肺军团菌菌型以Lp1型为主,占68.1%(47/79),Lp3型占24.1%(19/79)、其他菌型占16.5%(13/79)。结论本市公共场所空调冷却水、生活用水中自来水、淋浴水均存在嗜肺军团菌污染,应加强空调系统和生活用水的清洗消毒。

武汉市2007年公共场所中央空调冷却塔水军团菌污染调查

目的了解武汉市公共场所大型中央空调冷却水中军团菌的污染情况及主要血清型。方法于2007年9～1O月,采集武汉市八个城区23家宾馆、8家大型商场和6家医疗机构中央空调冷却塔冷却水,应用GVPC、BCYE培养基进行嗜肺军团菌分离培养,进行血清分型及鉴定。结果冷却塔冷却水中嗜肺军团菌的污染率达到29.73%(11/37),共分离到军团菌11株。血清型以LP1为主,达45.50%(6/16)。结论武汉市公共场所大型中央空调冷却水中军团菌检出率较高,对市民健康构成了威胁,特别是医疗机构的军团菌的污染率高达33.3%,需要我们加强控制。

北京市顺义区涉奥场所淋浴热水及中央空调冷却塔水嗜肺军团菌污染调查

目的为了保障北京奥运会和谐、顺利举办,向中外运动员及宾客提供安全卫生的公共场所,为顺义区奥运卫生保障提供技术指导。方法顺义区疾病预防控制中心于2008年7月11日—8月12日对顺义区8家涉奥公共场所的淋浴热水及中央空调冷却水水样进行调查。依据北京市地方标准BD 11/485-2007《公共场所集中空调通风系统卫生管理规范》附录A.1空调系统冷却(凝)水中嗜肺军团菌检验方法,对水样中的军团菌进行检测。结果共采集淋浴热水6件,2件检出嗜肺军团菌,检出率为33.3%;采集冷却水18件,2件检出嗜肺军团菌,检出率为11.1%。结论顺义区中央空调冷却塔水及生活热水中存在军团菌污染,建议加强对环境水中军团菌的监测。

秦皇岛市首次军团菌横向分布调查

目的了解秦皇岛市水体环境中军团菌的污染现状,为控制军团菌病的爆发流行建立预防预警机制提供依据。方法对秦皇岛市部分水源地以及高层建筑物的中央空调循环水系统、二次供水及管网水采取随机方式抽取500ml,根据ISO11731:1998(E)等标准,采用3种方法处理样品,利用生长培养基BCYE和选择性培养基GVPC进行军团菌的分离培养,采用胶乳凝集试验进行军团菌的鉴定分析。结果共采集水样117份,检出军团菌26份,检出率为22.22%,其中冷却水的检出率最高,为55.56%。结论秦皇岛市中央空调冷却循环水系统军团菌污染严重,要密切监测其动态变化,建立预防预警机制。

嗜肺军团菌荧光定量PCR法的建立和初步应用

目的建立嗜肺军团菌特异、快速检测方法,探讨南京地区公共场所环境水样嗜肺军团菌污染状况。方法根据嗜肺军团菌的mip基因保守序列设计引物和探针,通过对嗜肺军团菌标准株ATCC33152、嗜肺军团菌南京分离株及大肠埃希菌ATCC25922、鼠伤寒沙门菌ATCC14028、福氏2a志贺菌ATCC12022进行检测,验证该方法的特异性。并应用该法对南京地区某商场、宾馆、办公楼、医院共计13家的中央空调系统的冷却水、淋浴水和景观水共计88份环境水样进行了PCR检测及军团菌的分离培养。结果该法对嗜肺军团菌有特异性扩增曲线,而对其他细菌无阳性扩增曲线。88份水样中荧光定量PCR方法检测出28份阳性,阳性率为31.8%;传统培养方法分离出17株军团菌,分离率为19.3%。结论本文建立的荧光定量PCR检测方法具有良好的特异性,可用于环境水中军团菌污染状况调查。南京地区中央空调冷却水中检出率最高,存在发生军团菌病的可能,应引起足够重视。

实时荧光PCR快速检测嗜肺军团菌的研究

目的建立TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速检测嗜肺军团菌技术，为临床和环境样品检测嗜肺军团菌提供可实用工具。方法在对嗜肺军团菌mip序列进行分析、比较基础上，设计一对特异性引物和TaqMan—MGB探针，通过实时荧光PCR反应条件和反应体系的优化，实现对嗜肺军团菌的快速检测；用克隆到pMD-19T载体上的嗜肺军团菌mip基因阳参片段和不同菌株验证方法的敏感性和特异性。结果当用热裂解法提取DNA，25μl的反应体系中包括上、下游引物（20μmoL／L）各0．6μl，探针（20μmol／L）0．4μl，模板DNA6．0μl，反应条件为预变95℃20s，变性95℃10s，退火50℃40s，40个循环时，TaqMan—MGB探针实时荧光PCR技术对嗜肺军团菌mip基因阳参片段最低检测浓度为0．71拷贝μl，其循环阈值（Ct值）与模板浓度具有极好的对应关系（r=0．999）；1株嗜肺军团菌标准株、12株嗜肺军团菌分离株的Ct值在13．23—16．04之间，而包括金黄葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌、副溶血性弧菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、痢疾志贺菌共计76株其他菌PCR Ct值均大于30；整个检测过程仅需1．5h。结论TaqMan-MGB探针的嗜肺军团菌实时荧光PCR检测方法具有特异性和敏感性、易操作、结果准确可靠等优点，可用于嗜肺军团菌检测。

泰州市2009年-2012年公共场所集中式中央空调冷却水中嗜肺军团菌污染状况调查

目的了解泰州市公共场所中央空调冷却水的军团菌污染状况,为预防和控制疾病传播提供依据。方法于2009年-2012年,在泰州市城区的公共场所采集集中式中央空调冷却塔水180份,分别进行传统细菌分离培养和嗜肺军团菌荧光PCR核酸检测。结果 180份空调冷却水中,传统细菌分离培养法检出嗜肺军团菌水样55份,检出率为30.56%(55/180);嗜肺军团菌荧光PCR核酸检测出阳性水样64份,阳性率为35.56%(64/180)。结论泰州市公共场所中央空调冷却水中嗜肺军团菌污染较为严重,应引起相关部门的足够重视,防止军团菌的暴发与流行。

重庆市公共场所水环境嗜肺军团菌污染研究

目的了解重庆市公共场所水系统嗜肺军团菌污染现状,监测公共场所水系统清洗消毒效果,为卫生监督管理提供依据。方法依照卫生部《公共场所集中空调通风系统卫生规范》(2006年)附录A方法(2013-04-01前)和《公共场所集中空调通风系统卫生规范》WS 394-2012附录B方法(2013-04-01实施),采集本市多家公共场所冷却水、冷凝水、冷冻水、温泉水、淋浴水、游泳池水、生活用水等共399件水样品,进行嗜肺军团菌检测以及菌型分布检测。结果在399件样品中检出44件阳性,阳性率为11.0%;空调系统水嗜肺军团菌阳性检出率逐渐下降(29.0%/15.6%/9.0%),差异有统计学意义(χ~2=8.53,P<0.05);空调系统水嗜肺军团菌检出率高于生活水嗜肺军团菌检出率(13.9%/7.1%),差异有统计学意义(χ~2=4.608,P<0.05);检出44株嗜肺军团菌,其中LP1型有32株(72.7%);LP2-14型有12株(27.3%)。结论本市公共场所水系统中存在嗜肺军团菌污染,应加强公共场所水系统的清洗消毒,严格监管。