一株水源分离军团菌的分子生物学鉴定和系统发育学及毒力分析

目的对我室2009年分离获得的一株疑似军团菌菌株(编号为CD-1)进行分子生物学鉴定、系统发育学及毒力分析。方法对CD-1株进行PCR扩增军团菌属特异性16SrRNA作为分子生物学鉴定,扩增其rpoB基因片段并测序进行系统发育学分析。对CD-1株进行PCR扩增以检测其毒力基因mip,并用CD-1株感染BABL/c小鼠以研究其毒力。结果 PCR扩增军团菌属特异性16SrRNA显示CD-1株在650bp处有特异条带,说明CD-1株为一株军团菌,系统发育学分析显示CD-1株与长滩军团菌(Legionella longbeachae)聚为一枝,其后验概率为1.00。对CD-1株进行军团菌毒力基因mip扩增,扩增产物在650bp处有特异条带,显示CD-1株携带有mip基因。动物实验结果显示当感染菌量浓度达到107 cfu/mL时,实验组小鼠全部死亡。结论 CD-1株为一株长滩军团菌,对BALB/c小鼠具有较强毒力,并且有可能对人体致病。这是四川地区分离获得的首株长滩军团菌,也是国内首次对水源分离军团菌毒力进行报道。

潍坊地区人工喷泉中一株军团菌的分子生物学鉴定

目的对潍坊地区喷泉水中检测出的1株军团菌进行分子生物学鉴定和系统发育分析,为潍坊市军团菌病的预防和控制提供有益信息。方法于2016年7~9月采集潍坊市不同水源的水样,采用抽滤浓缩法浓缩获得细菌浓缩液,用细菌基因组试剂盒提取浓缩菌液中的总细菌基因组DNA,使用针对军团菌属16SrRNA基因片段的特异性引物PCR特异性扩增军团菌属16SrRNA基因片段并测序,与从GenBank获得的另外31株军团菌的16SrRNA的基因序列进行对比分析,采用MrBayesv3.2软件对16SrRNA基因片段序列数据矩阵进行贝叶斯分析并绘制基因进化树。结果 PCR扩增潍坊市水样军团菌属特异性16SrRNA基因片段(386bp),其中一喷泉水样阳性。测序分析该菌株(命名为WF-S)的16SrRNA基因序列与最新发现的沙特军团菌16SrRNA基因序列的遗传距离较近,相似度达99.4%,在构建的贝叶斯基因进化树中与沙特军团菌以其后验概率0.89聚类为一枝。结论 WF-S为一株沙特军团菌,在潍坊地区首次发现,也是国内首次报道的沙特军团菌。

人工喷泉中一株军团菌的系统遗传学鉴定

目的检测喷泉水中的1株军团菌并进行分子生物学鉴定和系统发育分析。方法采集潍坊市一处人工喷泉水水样,用细菌基因组试剂盒提取水样中的总细菌基因组DNA,使用针对军团菌属16S rRNA基因片段的特异性引物PCR扩增军团菌属16S rRNA基因片段并测序,与从GenBank获得的另外41株军团菌的16S rRNA的基因序列进行对比分析,采用PAUP*4.0b10软件对16S rRNA基因片段序列数据矩阵进行最大简约法分析并绘制基因进化树。结果PCR扩增喷泉水提取物中军团菌属特异性16S rRNA基因片段,片段碱基数654 bp。测序分析该菌株(命名为WF-B)的16S rRNA基因序列与Legionella beliardensis 16S rRNA基因序列的遗传距离较近,相似度达99.8%,在构建的最大简约进化树中该菌与L.beliardensis以自检值97%聚类为一枝。结论该喷泉水中检出的军团菌WF-B与L.beliardensis的亲缘关系较近,相关部门应加强监管力度,降低其感染风险。