响应面法优化火绒草中总黄酮与总酚酸的提取工艺研究

为探究野生火绒草(Leontopodium leontopodioides(Wild.)Beauv)总黄酮与总酚酸最佳提取工艺及抗氧化活性,本试验采用快速溶剂萃取法探索萃取温度、循环次数、加热时间及萃取压力对火绒草总黄酮、总酚酸提取含量的影响,通过单因素试验和响应面设计法确定了活性物质的最佳提取工艺。结果表明:当使用70%乙醇提取火绒草中总黄酮时最佳提取工艺为:萃取温度93℃,循环次数3次,加热时间20 min,萃取压力102 bar,提取含量为(45.45±0.36)mg·g^(-1);总酚酸最佳提取工艺为:萃取温度90℃,循环次数3次,加热时间19 min,萃取压力97 bar,提取含量为(23.52±0.34)mg·g^(-1)。火绒草总黄酮提取液对DPPH自由基和ABTS自由基的IC_(50)为0.012 mg·mL^(-1)和0.356 mg·mL^(-1),具有一定的还原力。本研究可为火绒草活性物质的提取工艺及加工利用提供可靠的理论依据和详实的科学参考。

火绒草黄酮类成分的分离与结构鉴定

目的对火绒草的化学成分进行研究,为进一步开发利用该植物资源提供依据。方法采用反复正相硅胶、反相ODS、Sephadex LH-20等柱色谱以及高效液相色谱法等手段进行分离纯化,并通过理化性质与光谱分析鉴定化合物的结构。结果从火绒草体积分数为70%的乙醇溶液提取物中分离鉴定了9个黄酮类化合物,分别为槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(quercetin-3'-O-β-D-gluco-pyranoside,1)、槲皮素-3'-O-β-D-葡萄糖苷(quercetin-3'-O-β-D-glucopyranoside,2)、5,7,3',4'-tetra-hydroxy-3-methoxyflavone(3)、5,7,3',4'-tetrahydroxy-3-methoxyflavonol-3'-O-β-D-glucopyranoside(4)、山柰酚(kaempferol5,)、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside6,)、3-甲基-山柰酚(3-methyl-kaempferol,7)、3-甲醚-山柰黄素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3-methylether-kaempferol-7-O-β-D-glucoside,8)、木犀草素-3'-O-β-D-葡萄糖苷(luteolin-3'-O-β-D-glucoside9,)。结论化合物2-57、8、为首次从火绒草属植物中分离得到。

火绒草黄酮类成分的分离与鉴定(Ⅱ)

目的对火绒草的化学成分进行研究,为进一步开发利用该植物资源提供依据。方法采用反复正相硅胶、反相ODS、Sephadex LH-20等柱色谱以及高效液相色谱法等手段进行分离纯化,并通过理化性质与光谱分析鉴定化合物的结构。结果从火绒草体积分数为70%的乙醇溶液提取物中又分离鉴定了7个黄酮类化合物,分别为芹菜素(apigenin,1)、山柰酚-3-O-(6″-O-乙酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷[kaempferol-3-O-(6″-O-acetyl)-β-D-glucopyranoside,2]、山柰酚-3-O-(6″-O-反式对香豆酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷[kaempferol-3-O-(6″-O-trans-p-coumaroyl)-β-D-glucopyranoside,3]、山柰酚-3-O-(6″-O-顺式对香豆酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷[kaempferol-3-O-(6″-O-cis-p-coumaroyl)-β-D-glucopyranoside,4]、槲皮素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(quercetin-7-O-β-D-glucopyranoside,5)、槲皮素-3-甲氧基-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(quercetin-3-me-thoxy-7-O-β-D-glucopyranoside,6)、槲皮万寿菊素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(quercetagetin-7-O-β-D-glucopyranoside,7)。结论化合物1为首次从火绒草植物中分离得到,化合物2～7为首次从火绒草属植物中分离得到。

火绒草正丁醇层化学成分的分离与鉴定

目的研究中药火绒草正丁醇层的化学成分。方法采用反复硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20柱色谱法和反复重结晶等进行分离纯化,并通过波谱分析技术鉴定其化学结构。结果从火绒草中分离得到5个化合物,分别鉴定为：木犀草素-3′-O-β-D-葡萄糖苷（luteolin-3′-O-β-D-glucoside,1）、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷（kaempferol-3-O-β-D-glucoside,2）、金圣草素-4′-O-β-D-葡萄糖苷（chrysoeri-ol-4′-O-β-D-glucoside,3）、甘草苷（liquiritin,4）、腺苷（adenosine,5）。结论化合物2-5为首次从火绒草属植物中分离得到,化合物1为首次从火绒草中分离得到。

火绒草中的黄酮苷类成分

目的研究火绒草[Leontopodium leontopodioides(Wild.)Beauv.]中黄酮苷类化学成分。方法采用反复硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20柱色谱法、ODS柱色谱法和反复重结晶等方法进行分离纯化,并通过理化常数测定和波谱分析鉴定了其化学结构。结果从体积分数为60%的火绒草乙醇溶液提取物中分离得到5个化合物,并鉴定其结构为:芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(apigenin-7-O-β-D-glu-copyranoside1)、木犀草素-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(luteolin-4′-O-β-D-glucopyranoside2)、6-羟基-木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(6-hydroxyluteolin-7-O-β-D-glucopyranoside3)、6-羟基-芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(6-hydroxyapigenin-7-O-β-D-glucopyranoside4)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside5)。结论化合物4,5为首次从火绒草属植物中分离得到,化合物2,3为首次从本植物火绒草中分离得到。

火绒草的咖啡酰类成分研究

目的:研究火绒草的化学成分。方法:采用硅胶、葡聚糖凝胶、大孔树脂、制备液相等色谱技术进行化学成分分离,依据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构。结果:从火绒草正丁醇萃取部位分离出11个化合物,分别鉴定为:绿原酸甲酯(1)、4-O-咖啡酰奎宁酸甲酯(2)、5-O-咖啡酰奎宁酸甲酯(3)、绿原酸(4)、4-O-咖啡酰奎宁酸(5)、1,3-O-二-咖啡酰奎宁酸(6)、3,4-O-二-咖啡酰奎宁酸甲酯(7)、4,5-O-二-咖啡酰奎宁酸甲酯(8)、3,5-O-二-咖啡酰奎宁酸(9)、3,4-O-二-咖啡酰奎宁酸(10)、4,5-O-二-咖啡酰奎宁酸(11)。结论:其中,化合物1~9为首次从该植物中分离得到。

火绒草化学成分的分离与鉴定(Ⅲ)

目的对火绒草的化学成分进行研究,为进一步开发利用该植物资源提供依据。方法采用正相硅胶、反相ODS、Sephadex LH 20等柱色谱以及高效液相色谱法等手段进行分离纯化,并通过理化性质与光谱分析鉴定化合物的结构。结果从火绒草体积分数为70%的乙醇溶液提取物中又分离鉴定了8个单体成分,分别为木犀草素(luteolin,1)、山柰酚3 O(4″O乙酰基6″O反式对香豆酰基)βD吡喃葡萄糖苷(kaempferol-3-O-(4″-O-acetyl-6″-O-trans-p-coumaroyl)-β-D-glucopyranoside,2)、槲皮素(quercetin,3)、槲皮素3 O(6″O反式对香豆酰基)βD吡喃葡萄糖苷(quercetin-3-O-(6″-O-trans-p-coumaroyl)-β-D-glucopyranoside,4)、(7R,8S)-dihydrodehydrodi-coniferyl alcohol 4-O-β-D-glucopyranoside(5)、(7S,8R)-dihydrodehydrodiconiferyl alcohol 4-O-β-D-glucopyranoside(6)、everiastoside L(7)及松柏苷(coniferin,8)。结论化合物1和3为首次该种中分离得到,2、4 8为首次从火绒草属植物中分离得到。

不同产地火绒草HPLC指纹图谱的建立及化学模式识别

目的建立不同产地火绒草Leontopodium leontopodioides(Willd.)Beauv.HPLC指纹图谱,并进行化学模式识别。方法火绒草50%乙醇提取物的分析采用Phenomenex C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相0.1%磷酸-乙腈,梯度洗脱;柱温25℃;体积流量1.0 mL/min;检测波长290 nm。结果 35批样品指纹图谱中有19个共有峰,相似度0.819～0.982。29批样品分为2大类,生态环境相似或地理位置相近的样本被归类一起。主成分分析中铁岭昌图泉头镇产地(S4)综合得分最高,表明其成分含有量较其他产地高。主成分分析结果与聚类分析所得结果相吻合。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于火绒草的质量控制。

火绒草抑菌作用的物质基础研究

目的:探讨中药材火绒草抑菌作用的药效物质基础。方法:采用SPSS统计分析方法,以36个色谱峰的相对峰面积为自变量,提取物的抑菌圈直径为因变量进行相关性分析和回归分析。结果:得到36个色谱峰的相关系数。结论:初步确定火绒草中与16个色谱峰对应的化学组分具有抑菌活性,其中色谱峰X10为原儿茶酸,X13为原儿茶醛,X14为绿原酸,X16为咖啡酸。

基于ITS2序列的火绒草药材分子鉴定研究

目的 应用内转录间隔区2(ITS2)序列鉴定不同分布区、不同居群火绒草药材,明确火绒草种间、不同居群间和居群内火绒草样品遗传关系。方法 采用DNA提取试剂盒提取20个居群共220个火绒草药材基因组DNA。利用植物药DNA条形码通用引物ITS2序列对提取的DNA进行扩增并测序。将所得序列使用MEGA6.0软件进行序列对比分析,用NJ TREE法构建系统聚类树。结果 火绒草样本ITS2序列长度为222 bp, GC含量为52.25%。居群内火绒草样品ITS2序列一致,无变异位点。不同居群火绒草样品可利用72 bp处“T”碱基来区分河南产地样本。ITS2序列构建NJ系统聚类树分析显示,辽宁分布区及河北分布区火绒草聚类在一起,河南分布区火绒草与辽宁及河北分布区样本有一定的遗传距离。结论 ITS2序列可以准确、有效地鉴定不同分布区、不同居群火绒草药材,为火绒草种质资源多样性研究提供分子依据。

火绒草乙醇提取物的化学成分研究

对中药火绒草乙醇提取物的正丁醇层的化学成分进行分离与鉴定。采用硅胶柱色谱法、葡聚糖凝胶LH-20柱色谱法和制备高效液相等方法进行分离纯化,并通过理化常数和谱学方法鉴定了其化学结构。从火绒草中分离得到了4个化合物,并鉴定了其结构(1-{3-(β-D-glucopyranosyloxy)-2,3-di-hydro-2-[1-(hydroxymethyl)vinyl]-1-benzofuan-5-yl}-ethanone 1),小檗碱(berberin 2),胡萝卜苷(daucosterol 3),β-谷甾醇(β-sitosterol 4)。四个化合物分别为苯并呋喃类化合物1个,生物碱类化合物1个,甾体类化合物2个,其中化合物1首次从植物火绒草中分离得到。

火绒草的抗菌活性研究

采用试管稀释法,分别测定了火绒草水煎液、水提醇沉液、醇提物、醇提石油醚部分、醇提乙酸乙酯部分、醇提正丁醇部分、醇提水溶部分等7种提取物对大肠杆菌C83882、大肠杆菌C83903、大肠杆菌C83914、沙门氏菌C79-20、金黄色葡萄球菌Newbou ld S-305、金黄色葡萄球菌临床分离株等6株病原菌的最低抑菌浓度(M IC)和最低杀菌浓度(MBC)。试验结果表明,火绒草醇提物及其石油醚部分和乙酸乙酯部分对两种金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用,其M IC为0.14 mg/m l生药浓度,MBC为0.27 mg/m l生药浓度,而其它部分对金黄色葡萄球菌的抑制作用较弱。火绒草醇提正丁醇部分和水溶部分对3株大肠杆菌和1株沙门氏菌具有较强的抑制作用,其M IC为2.70 mg/m l生药浓度,MBC为2.70 mg/m l生药浓度,显示了较强的抗菌活性。

火绒草资源调查研究

目的:深入调查研究辽宁地区药用植物火绒草的分布、资源及使用概况,为火绒草的合理开发利用提供依据。方法:采用文献查阅方法、野外样线调查和样地、样方调查相结合的方法,对以昌图县为代表性地区及辽宁其他地区火绒草的分布区域、生长情况及生态环境等进行调查分析。结果:辽宁为火绒草主要分布区,主要生长在干旱、向阳环境,多分布在沈阳、鞍山、大连等地区。野生资源丰富,但人为破坏日趋严重。结论:辽宁地区火绒草资源丰富,应对火绒草进行资源保护性利用并提倡和推进火绒草药材的规范化种植,以实现种质资源可持续发展。

火绒草化学成分的分离与鉴定

目的对火绒草中的化学成分进行研究,以明确其药理作用的物质基础,为该植物的药用资源开发利用提供依据。方法联合应用大孔吸附树脂、硅胶、Sephadex LH-20、ODS以及高效液相色谱法等多种色谱方法对火绒草的化学成分进行分离纯化,并利用其理化性质与核磁共振波谱数据鉴定所分离出的化合物的化学结构。结果从火绒草体积分数70%乙醇提取物中分离鉴定了9个化合物,分别为麦芽酚-3-O-β-D-葡萄糖甙(2-methyl-3-O-β-D-glucopyranosyl-pyran-4-one,1),maltol6'-O-β-D-apiofuranosyl-β-D-glucopyranoside(2),licoagroside B(3),3,5-双咖啡酰基奎宁酸(3,5-dicaffeoylquinic acid,4),3,4-双咖啡酰基奎宁酸(3,4-dicaffeoylquinic acid,5),4-羟基-苯甲醛-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4-hydroxy-benzaldehyde-3-O-β-D-glucopyranoside,6),对羟基苯甲酸(p-hydroxyl benzoic acid,7),adenosine(8)和1H-吲哚-3-羧酸(1H-indole-3-carboxylic acid,9)。结论化合物1~3、6和9为首次从火绒草属植物中分离得到;化合物4为首次从火绒草植物中分离得到。

火绒草对大鼠系膜增生性肾小球肾炎的影响

目的:探索火绒草乙醇提取物对实验性系膜增生性肾小球肾炎模型(MsPGN)的治疗作用,并对其作用机制进行初探。方法:采用慢性血清病肾炎法复制大鼠MsPGN模型,随机分为正常组、模型组、火绒草70%乙醇总提物高(800 mg/kg)、低(400mg/kg)剂量组,雷公藤多苷片组(15 mg/kg)。电镜及光镜下观察肾脏病理变化,并测定肾重指数、24 h尿蛋白、尿肌酐、血清肌酐、肌酐清除率、血清尿素氮和血清总蛋白等指标。结果:火绒草高(800 mg/kg)、低(400 mg/kg)剂量组MsPGN大鼠的24 h尿蛋白和血清尿素氮水平显著降低,尿肌酐和血清总蛋白水平显著升高;火绒草高(800 mg/kg)剂量组肾重指数和血清肌酐水平显著降低,肌酐清除率水平显著升高。电镜及光镜下病理形态学观察显示火绒草高(800 mg/kg)剂量组肾组织损伤明显改善。结论:火绒草70%乙醇总提物对MsPGN具有较好的治疗作用,其作用机制可能与抑制肾小球系膜细胞的增殖、改善肾小球滤过功能及减轻炎性细胞浸润等作用相关。