Real-time PCR法检测水产品中异鳞蛇鲭、棘鳞蛇鲭源性成分

目的:建立异鳞蛇鲭、棘鳞蛇鲭实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测方法。方法:对比异鳞蛇鲭、棘鳞蛇鲭、大西洋鳕等18种鳕鱼及易掺假品种的线粒体细胞色素C氧化酶I(cytochrome C oxidase subunit I,COI)基因,设计异鳞蛇鲭、棘鳞蛇鲭物种特异性引物/探针,建立两种鱼的real-time PCR检测方法,评估其特异性、绝对灵敏度和相对灵敏度;用该方法对50份市售标称“鳕鱼”制品进行检测,评估其实际使用效果。结果:两种检测方法特异性强,绝对灵敏度为0.002 ng/μL(异鳞蛇鲭)和0.0002 ng/μL(棘鳞蛇鲭),相对灵敏度均达0.01%,满足实际检测需求。在50份市售样品中检出1份含异鳞蛇鲭成分,1份含棘鳞蛇鲭成分,与测序比对结果一致。结论:本研究建立的异鳞蛇鲭和棘鳞蛇鲭源性成分的检测方法特异性强、灵敏度高,为保护消费者权益和水产品掺杂使假的检测提供技术支持。

双重实时荧光聚合酶链式反应检测棘鳞蛇鲭和异鳞蛇鲭

目的建立检测棘鳞蛇鲭(Ruvettus pretiosus, RP)和异鳞蛇鲭(Lepidocybium flavobrunneum, LF)两种油鱼的双重实时荧光聚合酶链式反应(PCR)方法。方法基于棘鳞蛇鲭和异鳞蛇鲭线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因分别设计特异性引物和探针,并对方法进行灵敏度、特异性和重复性分析,建立双重实时荧光PCR方法。结果模板量在8.4×10^5~8.4×10^0 copies/μl范围内,方法具有良好的线性关系,棘鳞蛇鲭和异鳞蛇鲭的线性回归方程分别为y=-3.18x+41.0(R^2=0.998 8)和y=-3.37x+44.5(R^2=0.998 6),方法组内相对标准偏差(RSD)为0.29%~0.84%。其中,检测棘鳞蛇鲭的组内RSD为0.29%~0.84%,检测异鳞蛇鲭的组内RSD为0.29%~0.62%。方法最低检测限为16.8 copies/反应,并且从随机购买的50份鳕鱼样品中鉴定出油鱼成分棘鳞蛇鲭。结论本试验建立的双重实时荧光PCR方法能够特异性地鉴定出棘鳞蛇鲭和异鳞蛇鲭,具有实际应用潜力。