乌苏里瓦韦(Lepisorus ussuriensis(Regel et Maack)Ching)孢子诱导再生植株的研究

乌苏里瓦韦是一种民间常用的药用蕨类植物,本研究首次建立一种以乌苏里瓦韦孢子为外植体形成完整植株的体系,得到了乌苏里瓦韦体外扩增的方法。为了探究最佳的孢子萌发条件,设计使用6种NAA和6-BA激素组合探究孢子的最佳萌发条件,然后取孢子萌发得到的乌苏里瓦韦叶片,分别接种到不同浓度的NAA和活性炭的组合培养基中,探究乌苏里瓦韦生根的最佳条件。结果表明,乌苏里瓦韦孢子的最佳萌发条件是:1/2MS培养基为基本培养基,附加NAA 0.2 mg/L,6-BA 0.5 mg/L蔗糖30 g/L,琼脂7 g/L;生根的最佳条件为:1/2MS培养基为基本培养基,附加NAA 0.4 mg/L,蔗糖30 g/L,琼脂7 g/L,活性炭1.5 g/L。本研究首次报道了乌苏里瓦韦的体外繁殖形成完整再生植株的方法,为乌苏里瓦韦的人工繁殖,同时为乌苏里瓦韦的可持续开发利用打下坚实基础。

乌苏里瓦韦总黄酮的提取工艺优化的研究实验

通过超声波辅助法提取乌苏里瓦韦总黄酮;NaNO_(2)-Al(NO_(3))_(3)-NaOH法显色以及紫外分光光度法检测总黄酮含量;单因素法考察超声温度、超声功率、超声时间和料液比;Box-Behnken法优化最佳提取工艺;Design-Expert 10.0.7软件进行数据分析。结果显示:单因素实验考查最佳超声功率为364.41 W,超声温度为58.47℃,超声时间为50 min,液料比为19.99∶1(mL/g)。最佳工艺为超声温度58℃,超声功率360 W,液料比20∶1(mL/g)。乌苏里瓦韦总黄酮的提取率为17.944%。表明该方法可以有效提取乌苏里瓦韦中的总黄酮。

乌苏里瓦韦抑菌作用研究

[目的]探讨乌苏里瓦韦的抑菌作用。[方法]以乌苏里瓦韦为研究对象,在单因素的基础上,选用Na+浓度、蔗糖浓度、不同的有机溶剂萃取物,采用正交试验的原理,研究乌苏里瓦韦提取液对抑菌作用的影响。[结果]乌苏里瓦韦乙醇提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、粪球菌、枯草杆菌、沙门氏杆菌均有抑制作用,但对枯草杆菌的抑制作用最强。最佳抑菌作用的条件为蔗糖浓度20%、Na+浓度为30%、乌苏里瓦韦乙醇提取液的石油醚萃取物,测定对枯草杆菌的抑菌环直径为8.932 mm。[结论]乌苏里瓦韦提取液具有抑菌作用。

响应面法优化乌苏里瓦韦热水提取绿原酸工艺

旨在对乌苏里瓦韦中绿原酸的工艺条件进行优化。采用热水提取乌苏里瓦韦中绿原酸,根据Box-Benhnken中心组合设计原理,设计了3因素3水平响应面分析试验,来确定乌苏里瓦韦中绿原酸的最佳工艺条件。结果表明乌苏里瓦韦绿原酸最佳提取工艺条件为:液料比25:1,提取时间4 min,提取温度96℃,在这种条件下绿原酸得率可达5.11%,与理论值相接近,表明响应面分析法优化乌苏里瓦韦中绿原酸热水提取工艺具有良好的效果。水提法具有能耗少、时间短和低成本等特点,为乌苏里瓦韦提取绿原酸的工业化生产提供了理论依据。

乌苏里瓦韦抗炎活性部位筛选及抗炎机制探讨

目的筛选乌苏里瓦韦抗炎作用的活性部位,并探讨其作用机制。方法将小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7经脂多糖(LPS)诱导培养,建立炎症模型后,经不同浓度(25、50、100μg·mL^-1)的乌苏里瓦韦不同极性部位(石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位及水部位)处理,用试剂盒检测RAW 264.7细胞中炎症因子NO与PGE2的分泌水平。结果质量浓度为50、100μg·mL^-1的乙酸乙酯萃取部位、正丁醇萃取与水萃取部位均可显著抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症因子PGE2、NO的释放水平,且具有较好的量效关系。结论乌苏里瓦韦的乙酸乙醇、正丁醇与水萃取部位均为抗炎活性部位,其抗炎机制可能与影响炎症因子释放有关。

乌苏里瓦韦及其再生植株的利尿作用研究

目的探讨乌苏里瓦韦利尿作用的机制,对比乌苏里瓦韦及其再生植株的利尿作用。方法运用网络药理学探讨乌苏里瓦韦的利尿作用机制;利用AutoDock Vina1.1.2软件进行活性成分和核心靶点的分子对接,采用Pymol2.5.0软件对最优结果进行可视化;通过体内试验测量小鼠口服药物后4 h内尿量,评价乌苏里瓦韦及其再生植株的利尿作用。结果从乌苏里瓦韦中的41个候选化合物中筛选得到共1791个药物靶点,将删除重复靶点后的327个药物靶点与从GeneCards数据库中以“Diuretic”为关键词检索得到的1324个疾病靶点作Venn图,共得到119个交集基因。PPI网络节点度值排名前6的核心蛋白为MAPK3、VEGFA、AKT1、IL6、ALB、TNF,通过拓扑分析得到度值排名前3的候选化合物分子黄芩素、香叶木素、山柰酚。GO功能分析与KEGG通路富集分析结果表明,乌苏里瓦韦活性成分利尿作用机制主要与response to toxic substance、membrane raft等生物过程有关,参与的主要信号通路有神经活性配体-受体相互作用、HIF-1信号通路、氮代谢等。分子对接结果显示黄芩素、香叶木素及山柰酚均可与核心靶点进行较好的自发结合。体内试验中乌苏里瓦韦组(9.5 g·kg^(−1))尿量增加了1.26倍,k^(+)增加了1.31倍,Cl^(-)增加了1.24倍。乌苏里瓦韦再生植株组(9.5 g·kg^(−1))尿量增加了1.26倍,k^(+)增加了1.29倍,Cl^(-)增加了1.26倍。结论网络药理学结果表明,乌苏里瓦韦利尿作用可能是多组分、多靶点、多途径作用的结果;通过体内药理试验验证了乌苏里瓦韦及乌苏里瓦韦再生植株具有相似的利尿作用。