波兰、英国油菜种子样本的健康测试及黑胫病病原菌感染分析(英文)

对来自波兰及英国的2个相同品种的油菜种子样品进行了健康测试,并重点观察了油菜黑胫病病原菌(Letosphaeriamac ulans/Phomalingam)感染的程度及菌系类型.结果表明来自2个国家的种子都一定程度受微生物感染,品种间差异不大,所检测到的较多的菌属为Alternaria,Fusarium及Penicillium.黑胫病病原菌感染的百分率波兰种子样品平均为0.5%,英国种子样品平均为0.6%,菌系鉴定表明,7.1%的波兰株系及12.3%的英国株系为强致病的Tox+类型.此外,还发现健康测试前种子表面消毒可提高黑胫病病原菌的检出率.

油菜黑胫病菌和茎基溃疡病菌的LAMP检测方法的建立

油菜黑胫病和油菜茎基溃疡病分别由子囊菌Leptosphaeria biglobosa和L.maculans引起。我国油菜产区仅发现L.biglobosa,未发现L.maculans。因而,L.maculans是我国的对外检疫性对象。这两种真菌形态相似,引起的病害症状相似,给田间快速准确鉴定带来难度。本研究基于环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification, LAMP),建立了快速检测L.biglobosa和L.maculans的方法。根据ITS-rDNA序列设计了5条检测L.biglobosa的LAMP引物和6条检测L.maculans的LAMP引物,检测L.biglobosa和L.maculans的最适温度为65℃,反应时间分别为40 min和50 min。两组引物检测特异性高,检测的模板DNA极限达到fg级,与常规PCR检测相比,LAMP检测L.biglobosa和L.maculans灵敏度分别提高了100倍和1000倍。在病害样品实际检测中,采用两种LAMP体系,分别检测了9株罹病油菜茎秆中的病原菌。结果表明:所有茎秆中的病原菌均为L.biglobosa,没有检测到L.maculans,与特异性PCR检测结果一致。本研究建立的LAMP检测方法为快速高通量检测L.biglobosa和L.maculans奠定了基础。