钩端螺旋体脂多糖诱导J774A.1细胞凋亡及相关信号通路调控作用的研究

目的 了解问号钩端螺旋体脂多糖（L-LPS）体外诱导小鼠单核-巨噬样细胞株（J774A.1）凋亡及Toll样受体（TLR）和相关信号通路调控细胞凋亡的作用.方法 酚水法从问号钩体黄疸出血群赖型赖株中提取L-LPS.流式细胞术测定L-LPS诱导J774A.1细胞凋亡及FasL中和抗体阻断细胞凋亡的作用.实时荧光定量RT-PCR（qPCR）及流式细胞术检测L-LPS作用前后J774A.1细胞Fas/FasLmRNAs和蛋白表达水平变化.TLR2或TLR4抗体封闭试验、信号通路阻断试验及流式细胞术,检测TLR2、TLR4及p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和胞外信号调节激酶（ERK）通路对L-LPS诱导细胞凋亡的调控作用.结果 100 ng/ml L-LPS作用J774A.1细胞4、12和24 h的凋亡率分别为56.50%、69.28%和24.35%,FasL中和抗体封闭后,细胞凋亡率分别下降至11.21%、21.58%和12.70%（P＜0.05）.L-LPS作用4、12和24 h的J774A.1细胞FasL和Fas mRNAs水平分别为正常细胞的1.34、2.12、2.10及2.45、3.87、3.12倍（P＜0.05）,FasL和Fas蛋白表达率分别从L-LPS作用前的4.82%和15.32%上调至18.61%、60.13%、42.75%（P＜0.05）和76.34%、85.70%和77.92%（P＜0.05）.TLR2抗体封闭后L-LPS诱导J774A.1细胞的凋亡率（11.54%）明显低于未封闭细胞（66.56%,P＜0.05）,但TLR4抗体封闭细胞的凋亡率仍高达55.27%（P＞0.05）.p38MAPK与JNK通路阻断后L-LPS诱导J774A.1细胞凋亡率（20.54%和47.98%）明显低于未阻断细胞（62.17%,P＜0.05）,ERK通路阻断后细胞凋亡率仍高达61.72%（P＞0.05）.结论 L-LPS经TLR2识别后通过p38MAPK和JNK通路上调J774A.1细胞Fas和FasL表达,从而参与L-LPS诱导细胞凋亡过程.