甘蓝型油菜和Lesquerella fendleri fad2基因片段克隆及hpRNA植物表达载体的构建

首先利用PCR从甘蓝型油菜(Brassica napus L.)和Lesquerella fendleri基因组DNA中分别扩增出Δ12-脂肪酸去饱和酶fad2基因片段,再以扩增出的片段为模板设计引物从一端扩增出相应的小片段,然后将同一基因的大小片段反向连接,插入到种子特异表达载体2300-nap多克隆位点的napin启动子和nos终止子之间,构建成可以在种子中转录表达发夹RNA(Hairpin RNA,hpRNA)结构的植物表达载体.

特种工业用油料作物Lesquerella fendleri的愈伤组织诱导和植株再生

以Lesquerellafendleri下胚轴和子叶作为外植体,研究了不同的激素浓度和组合对于愈伤组织诱导和植株再生的影响.研究表明,L.fendleri下胚轴和子叶在许多激素组合的培养基上都能诱导出愈伤组织.当6-BA的浓度从0提高到1.0mg.L-1,下胚轴的愈伤组织诱导频率也从35.14%提高到97.30%,进一步提高6-BA浓度会降低下胚轴的愈伤组织诱导频率;将NAA浓度从0提高到0.2mg.L-1,下胚轴的愈伤组织诱导频率从70%提高到76.76%,进一步提高NAA浓度则降低下胚轴的愈伤组织诱导频率;将2,4-D的浓度从0提高到0.5mg.L-1,下胚轴的愈伤组织诱导频率从64.29%提高到85.00%,进一步提高2,4-D浓度会降低下胚轴的愈伤组织诱导频率.当6-BA的浓度为0.5mg.L-1时子叶的愈伤组织诱导频率最高,达到80.00%;提高NAA浓度可以提高子叶愈伤组织诱导频率,提高2,4-D浓度则会降低子叶的愈伤组织诱导频率.绝大多数愈伤组织在含有6-BA和NAA的MS培养基上都能够分化出许多不定芽.不定芽在MS基本培养基能够诱导生根,生根率在80%以上.

根癌农杆菌介导转化Lesquerella fendleri L．的研究

以Lesquerella fendleri L.叶片和叶柄为外植体,研究了根癌农杆菌介导的β-葡萄糖醛酸苷酶基因(β-glucuronidase,Gus)的遗传转化技术,将再生植株叶片进行PCR分子鉴定和Gus组织染色,证实外源基因已稳定整合到植物基因组中,并得到表达。