miR-let-7d-HMGA2通路调控缺氧诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞增殖

目的 研究缺氧在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜成纤维样细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)增殖中的作用及机制。方法 采用HE染色法检测RA和对照骨关节炎(osteoarthritis,OA)滑膜组织FLS增生情况。分离原代RA-FLS并采用流式细胞术鉴定;将RA-FLS置于常氧(21%O_(2))或缺氧环境(3%O_(2))中培养,CCK-8法检测细胞增殖水平的变化,RT-PCR检测miR-let-7d表达的变化。通过类似物或抑制物改变miR-let-7d的表达,观察其对RA-FLS增殖、凋亡的影响;探究miR-let-7d靶基因在缺氧诱导的RA-FLS增殖中的作用。结果 FLS在RA滑膜中增生明显,在缺氧环境下RA-FLS增殖加快,miR-let-7d表达水平降低;过表达miR-let-7d抑制RA-FLS增殖,但对细胞凋亡水平无明显影响;进一步的研究证实miR-let-7d靶基因HMGA2参与缺氧诱导的RA-FLS增殖。结论 miR-let-7d-HMGA2通路调控缺氧诱导的RA-FLS增殖。

S1PR2、ApoH、Let-7d在主动脉夹层中的表达及临床意义分析

目的分析S1PR2、ApoH、Let-7d在主动脉夹层中的表达及临床意义。方法选择2021年1月~2023年9月在南阳市中心医院利用胸腹主动脉CTA确诊主动脉夹层患者60例作为研究组,另选取同时期50例健康体检者作为对照组,以数字减影血管造影检查结果为金标准,将研究组患者按照病情严重程度分为轻度组(n=21)、中度组(n=19)、重度组(n=20)。比较2组人群S1PR2、ApoH、Let-7d表达、不同程度下各组人群S1PR2、ApoH、Let-7d表达、各种检测方式与三者联合检测检测对比、ROC曲线分析S1PR2、ApoH、Let-7d及三者联合诊断价值、S1PR2、ApoH、Let-7d水平与主动脉夹层疾病中的相关性。结果与对照组相比,研究组人群S1PR2、Let-7d表达较低、ApoH表达较高(P<0.05);重度组人群S1PR2、Let-7d表达均低于轻度、中度人群,重度组人群ApoH表达高于轻度、中度人群;本次研究中使用S1PR2阳性为5例、ApoH阳性为6例、Let-7d阳性为4例均低于联合检测阳性例数;三者联合AUC值(0.743)均高于S1PR2(0.552)、ApoH(0.343)、Let-7d(0.493);且三项联合灵敏度、特异度、准确度较高(P<0.05);以S1PR2、ApoH、Let-7d与主动脉夹层疾病中的相关性分析,S1PR2与主动脉夹层疾病的相关性呈现出负相关(r=-5.137,P=0.027)、ApoH与主动脉夹层疾病的相关性呈现出正相关(r=4.211,P=0.044)、Let-7d与主动脉夹层疾病的相关性呈现出负相关(r=-6.291,P=0.016)。结论S1PR2、ApoH、Let-7d在主动脉夹层疾病中的表达水平存在一定的相关性,将这三种指标结合起来,能够指导主动脉夹层疾病治疗及预后评估判断提供一定的理论基础。

Let-7d、α-SMA在主动脉夹层患者中的表达及其临床意义

目的探究主动脉夹层(AD)患者血清中Let-7d及α-平滑肌蛋白(α-SMA)的表达水平及其临床意义。方法选取2017年5月至2022年5月西安医学院第一附属医院收治的108例AD患者(AD组)为研究对象,另选取同时期108例健康体检者作为对照组。两组受试者均采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清Let-7d表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清α-SMA水平;比较两组受试者的Let-7d、α-SM水平,分析血清Let-7d、α-SMA水平与一般临床资料的关系;采用Pearson相关分析探讨AD患者血清中Let-7d与α-SMA的相关性;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清Let-7d、α-SMA对AD的诊断价值;采用Logistic回归分析影响AD发生的危险因素。结果AD组患者的血清Let-7d、α-SMA水平分别为0.64±0.17、(49.83±8.77)ng/mL,明显低于对照组的1.03±0.21、(70.61±21.44)ng/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);血清中Let-7d、α-SMA水平与性别、年龄、吸烟、高血压、Standford分型有关(P<0.05);经Pearson相关分析结果显示,AD患者血清中Let-7d与α-SMA呈正相关(r=0.663,P<0.05);经ROC分析结果显示,血清Let-7d水平诊断AD的曲线下面积(AUC)为0.860,敏感度为80.6%,特异性为82.4%,95%置信区间(CI)为0.807~0.912;血清α-SMA表达水平诊断AD的AUC为0.807,敏感度为83.3%,特异性为75.0%,95%CI为0.745~0.868;经Logistic回归分析结果显示,Let-7d、α-SMA均是AD发生的影响因素(P<0.05)。结论AD患者血清Let-7d、α-SMA表达水平降低,Let-7d、α-SMA是AD发生的影响因素,可作为评估AD发生的血清学指标。

血浆hsa-let-7d-3p在阿尔茨海默病中的诊断价值及功能

目的探索hsa-let-7d-3p在阿尔茨海默病(AD)中的诊断价值和功能。方法收集2018年4月至2022年3月于徐州市第一人民医院就诊的80例AD患者作为AD组,同期招募60名健康者作为健康对照组。筛选GSE46579和GSE120584数据集中AD患者血浆中显著变化的微RNA(miRNA),采集两个数据集中上调及下调的miRNA进行生物标志物的筛选。通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测所筛选的差异miRNA的表达水平。应用受试者工作特征曲线(ROC曲线)、简易智力状态检查量表(MMSE)和蒙特利尔认知评估基础量表(MoCA_B)评分评价hsa-let-7d-3p对AD的诊断价值。此外,建立Aβ25~35损伤SH-SY5Y的细胞模型,采用RT-qPCR检测hsa-let-7d-3p水平。通过转染使细胞表达hsa-let-7d-3p,使用四唑盐法验证其是否影响Aβ25~35对细胞活力的作用。结果AD组MMSE评分、MoCA_B评分低于健康对照组(P<0.01)。在GSE120584与GSE46579中均上调的miRNA为hsa-miR-5001-3p、hsa-let-7d-3p、hsa-miR-589-5p、hsa-miR-4435、hsa-miR-3605-3p,均下调的miRNA为hsa-miR-548h-5p、hsa-miR-29c-3p。AD组血浆hsa-miR-5001-3p、hsa-let-7d-3p、hsa-miR-589-5p水平明显高于健康对照组(1.43±0.37比1.00±0.32,1.60±0.35比1.00±0.30,1.34±0.38比1.00±0.26)(P<0.01),血浆hsa-miR-29c-3p水平明显低于健康对照组(0.58±0.35比1.00±0.29)(P<0.01),两组hsa-miR-4435、hsa-miR-3605-3p、hsa-miR-548h-5p比较差异无统计学意义(P>0.05)。在AD患者血浆中变化最为显著的上调miRNA为hsa-let-7d-3p,hsa-let-7d-3p的ROC曲线下面积为0.910;AD患者血浆hsa-let-7d-3p与MMSE评分呈负相关(r=-0.536,P<0.01),与MoCA_B评分呈负相关(r=-0.617,P<0.01)。与控制组相比,Aβ25~35处理可显著降低SH-SY5Y细胞的活力(P<0.01);与Aβ+mimics NC组相比,Aβ+mimics组SH-SY5Y细胞活力下降(P<0.01),与Aβ+inhibitor NC组相比,Aβ+inhibitor组SH-SY5Y细胞活力升高(P<0.01)。结论AD患者和AD细胞模型中的hsa-let-7d-3p表达均上调,hsa-let-7d-3p在AD中参与病理作用机制,并可作为AD诊断的生物标志物。

Lin28B/let-7d环路调控成纤维细胞功能参与肺纤维化发生

目的研究Lin28B/let-7d环路诱导肺成纤维细胞增殖、分化的作用及分子机制,为临床肺纤维化的治疗提供新的策略。方法气管注射博来霉素(bleomycin,BLM)造成小鼠肺纤维化模型;血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)纤维性变;qRT-PCR检测组织及细胞中Lin28B、collagen 1α1、collagen 3α1变化;Western blot检测Lin28B蛋白表达;MTT、Edu染色和免疫荧光实验分别检测细胞活力、增殖及成纤维细胞向肌成纤维细胞的转变。结果 Lin28B在肺纤维化小鼠和细胞中表达明显升高。Lin28B可诱导MRC-5细胞胶原合成增加,而过表达let-7d则减轻Lin28B的这一作用。进一步研究发现,Lin28B可诱导成纤维细胞增殖,并促进成纤维细胞向肌成纤维细胞转变,这一作用是通过抑制let-7d来实现的。结论 Lin-28B通过抑制let-7d进而促进成纤维细胞增殖、分化,最终增加成纤维细胞胶原合成,诱发肺纤维化的发生,Lin28B可能作为肺纤维化的治疗新靶点。

结核性脑膜炎患者脑脊液外泌体中let-7d表达的研究

目的探讨结核性脑膜炎(tuberculoulous meningitis,TBM)患者脑脊液外泌体的分离及外泌体中let-7d的表达水平及其意义。方法收集我院15例结核性脑膜炎患者(结脑组,TBM组),20例病毒性脑膜炎患者(病脑组,VM组),10例化脓性脑膜炎患者(化脑组,PM组)及20例正常脑脊液患者(对照组)的脑脊液,采取ExoQuick Precipitation提取法分离并纯化外泌体,通过透射电镜观察其形态,采用实时荧光定量PCR法检测其let-7d表达水平。结果 (1)脑脊液中的外泌体,电镜下呈圆形或茶托状外形,直径40~100nm,实时定量PCR法检测发现其内含有不同程度表达水平的let-7d;(2)结核性脑膜炎患者脑脊液外泌体中let-7d的表达水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);(3)let-7d表达水平结脑组、化脑组与对照组相比均明显下调,差异有统计学意义(P<0.05);病脑组与对照组相比也下调,但差异无统计学意义(P>0.05);(4)let-7d表达水平在化脑组与结脑组相比明显下调,差异有统计学意义(P<0.05);(5)let-7d表达水平在结脑组与病脑组相比明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论中枢神经系统感染性疾病的脑脊液中可分离出外泌体,通过比较3种脑炎外泌体中let-7d的表达水平,发现在TBM患者中let-7d的表达水平显著下调,为其诊断提供潜在的生物学标志物。

miR-let-7d通过调控核受体PPARγ促进肺癌细胞的增殖和侵袭

目的:探讨miR-let-7d对肺癌细胞核受体过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的调控及对肺癌细胞增殖和侵袭的影响。方法:用生物信息学分析与PPARγ相关的microRNA,通过质粒报告基因验证miR-let-7d的作用靶点;利用Western blot法筛选出PPARγ表达水平低的肺癌细胞株;通过双萤光素酶标记和Western blot法验证miR-let-7d对肺癌细胞中PPARγ表达的调控作用;通过集落形成实验检测miR-let-7d对肺癌细胞增殖能力的调控作用;通过Transwell侵袭实验检测miR-let-7d对肺癌细胞侵袭能力的作用。结果:生物信息学的分析结果证明miR-let-7d可以调控核受体PPARγ的蛋白表达;在核受体PPARγ的3’UTR包含2个功能性的miR-let-7d结合位点;PPARγ是miR-let-7d的直接靶点,miR-let-7d可在蛋白和mRNA水平直接调控PPARγ的表达;miR-let-7d inhibitor通过升高PPARγ的表达促进肺癌细胞的增殖和侵袭能力。结论:miR-let-7d能够通过靶向增加具有抑癌作用的核受体PPARγ的表达水平,抑制肺癌细胞的增殖和侵袭能力。

let-7d抑制剂对海马神经元离体氧糖剥夺/复氧细胞损伤的凋亡抑制作用

目的探讨let-7d microRNAs(miRNAs)抑制剂对海马神经元离体氧糖剥夺/复氧(OGD/R)细胞损伤中的凋亡抑制作用及机制。方法培养小鼠海马神经元HT22细胞系,利用三气缺氧细胞培养箱及培养基缺糖方式建立OGD/R细胞损伤模型,实时荧光定量PCR检测海马神经元OGD/R细胞损伤后6,12,24 h let-7d mRNA表达。将细胞分为正常组、OGD/R+miRNA-NC组、OGD/R+let-7d mimics组和OGD/R+let-7d inhibitor组,实时荧光定量PCR检测各组细胞let-7d和NGF mRNA表达,CCK-8法检测各组细胞活性,Hoechst33342/PI双染法检测各组细胞凋亡率。结果与正常组比较,海马神经元OGD/R细胞损伤后6,12,24 h let-7d表达显著降低(P<0.001)。与正常组比较,OGD/R+miRNA-NC组NGF mRNA表达和细胞凋亡率显著增高(P<0.001),let-7d mRNA表达和细胞活性显著降低(P<0.001)。与OGD/R+miRNA-NC组比较,OGD/R+let-7d inhibitor组let-7d mRNA表达和细胞凋亡率显著降低,NGF mRNA表达和细胞活性显著增高。而OGD/R+let-7d mimics组作用与之相反(P<0.001)。结论let-7d inhibitor能够抑制OGD/R诱导的海马神经元细胞凋亡,其机制可能与上调内源性保护因子NGF表达有关。

微RNAlet-7d抑制胶质瘤生长和侵袭

背景与目的:let-7d与胶质瘤的关系尚不清楚,本研究探讨let-7d在人脑胶质瘤组织中表达及其对人脑胶质瘤U87细胞生物学特征的影响。方法:原位杂交法检测let-7d在人脑胶质瘤组织和正常脑组织中的表达,利用脂质体将let-7d寡核苷酸转入U87细胞,观察各组细胞生长、凋亡、侵袭情况。结果:人脑胶质瘤组织中let-7d较正常人脑组织低表达,转入let-7d寡核苷酸的U87细胞,生长减缓,凋亡增加,侵袭力减低。结论:微RNAlet-7d在胶质瘤的发生发展中可能起抑制作用。

Let-7d通过靶向调控Rhotekin基因抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨let-7d在骨肉瘤组织中的表达,并研究let-7d及其靶基因对人骨肉瘤细胞U2OS增殖、迁移和侵袭的影响。方法收集2010年至2015年于我科行手术切除的25例骨肉瘤患者的肿瘤组织和癌旁组织(距肿瘤组织边缘>5 cm),并用q PCR检测let-7d的表达情况。构建稳定过表达let-7d的U2OS细胞,用q PCR验证let-7d过表达情况,以转染p CDH空病毒载体的U2OS细胞作为对照组细胞,并分别采用CCK-8实验、划痕实验和Transwell实验检测过表达let-7d对U2OS细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。通过微RNA靶基因预测软件和双荧光素酶实验明确let-7d的下游靶基因,检测过表达let-7d的U2OS细胞中靶基因的表达水平,并通过小干扰RNA技术研究抑制靶基因表达对U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果骨肉瘤组织中let-7d表达水平低于癌旁组织(P<0.01)。与人成骨细胞h FOB1.19相比,U2OS细胞中let-7d表达水平下调(P<0.01)。与对照组相比,过表达let-7d能抑制U2OS细胞的增殖、迁移和侵袭(P均<0.05)。微RNA靶基因预测软件和双荧光素酶实验结果显示,Rhotekin(RTKN)基因是let-7d的直接靶基因,且过表达let-7d导致U2OS细胞中RTKN m RNA表达水平较对照组降低(P<0.01)。干扰RTKN表达能抑制U2OS细胞增殖、迁移和侵袭(P均<0.05)。结论 Let-7d通过靶向调控RTKN抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,可作为骨肉瘤治疗一个新的靶点。

高危型HPV阳性宫颈癌中miR-let-7d-5p、HMGA1表达的相关性及临床意义

目的高危型人乳头瘤病毒(HPV)阳性宫颈癌中微小RNA(miR)-let-7d-5p、高迁移率族蛋白A1(HMGA1)表达的相关性及临床意义。方法选择2020年4月至2021年4月期间在山西省肿瘤医院接受根治性手术的104例宫颈癌患者作为研究对象,检测宫颈癌组织中高危型HPV(HPV16和HPV18)的感染情况,宫颈癌组织及癌旁组织中miR-let-7d-5p、HMGA1的表达水平,随访宫颈癌患者的无进展生存率和总生存率。结果宫颈癌组织中miR-let-7d-5p的表达水平低于癌旁组织,HMGA1的表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(t=11.627/10.278,P<0.05)。高危型HPV阳性的宫颈癌组织中miR-let-7d-5p的表达水平低于高危型HPV阴性的宫颈癌组织,HMGA1的表达水平高于高危型HPV阴性的宫颈癌组织,差异有统计学意义(t=2.543、3.189,P<0.05)。高危型HPV阳性宫颈癌中miR-let-7d-5p的表达水平与HMGA1的mRNA相对表达水平呈负相关(P<0.05)。FIGO分期ⅡA期高危型HPV阳性宫颈癌中miR-let-7d-5p的表达水平低于FIGO分期Ⅰ期高危型HPV阳性宫颈癌,HMGA1的mRNA相对表达水平高于FIGO分期Ⅰ期高危型HPV阳性宫颈癌,差异有统计学意义(P<0.05)。高危型HPV阳性宫颈癌中miR-let-7d-5p表达≥中位数的患者累积无进展生存率高于miR-let-7d-5p表达<中位数的患者,高危型HPV阳性宫颈癌中HMGA1表达≥中位数的患者累积无进展生存率低于HMGA1表达<中位数的患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高危型HPV感染的宫颈癌中miR-let-7d-5p表达降低、HMGA1表达增加,上述表达变化与FIGO分期进展、无进展生存率降低有关。

Let-7d靶向LOX-1逆转ox-LDL诱导血管内皮细胞凋亡观察

目的 :研究Let-7d对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡以及凝集素样氧化低密度脂蛋白清除受体1(LOX-1)表达的影响。方法:用50 mg/L的ox-LDL处理HUVECs 24 h和48 h,分别采用Western blot和RT-q PCR法检测LOX-1和Let-7d表达的变化。Target Scan和双荧光素酶报告基因实验预测LOX-1与Let-7d之间的靶向调控关系。将miRNA模拟物对照(NC)和Let-7d单独或联合50 mg/L的ox-LDL处理HUVECs 48 h,分别记为NC组、Let-7d组、NC+ox-LDL组和Let-7d+ox-LDL组,采用Western blot和RT-q PCR法检测各组中LOX-1、Caspase 3、Bax和Bcl-2蛋白表达及LOX-1 mRNA表达,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果:用50 mg/L的ox-LDL处理HUVECs 0 h、24 h和48 h后,各组HUVECs中LOX-1蛋白表达增加,Let-7d表达降低(P<0.05)。Target Scan和双荧光素酶报告基因实验表明LOX-1可能是Let-7d的靶基因。NC组、Let-7d组、NC+ox-LDL组和Let-7d+ox-LDL组HUVECs中LOX-1的表达、细胞凋亡率及Caspase 3、Bax、Bcl-2蛋白表达比较,差异均有统计学意义(P <0. 001)。ox-LDL可诱导HUVECs中LOX-1、细胞凋亡率和促凋亡蛋白Caspase 3、Bax表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低;Let-7d能够显著抑制ox-LDL对HUVECs中LOX-1表达、细胞凋亡率及促凋亡蛋白Caspase 3、Bax表达的诱导作用和抗凋亡蛋白Bcl-2表达的抑制作用(P <0. 05)。结论:Let-7d能够逆转ox-LDL诱导的HUVECs凋亡,其机制可能与Let-7d靶向抑制LOX-1表达有关。

Let-7d*在增生性血管疾病中的表达及其作用机制

目的探究Let-7d*在增生性血管疾病中的表达及其相关作用机制。方法分别构建球囊损伤模型与平滑肌细胞增殖模型,研究Let-7d*在这两种模型中的表达趋势,并调控Let-7d*的表达,研究其相关生物学功能。结果在球囊损伤诱导新生内膜生长的模型中,Let-7d*的表达水平较在正常颈动脉中明显降低,同时在增殖的血管平滑肌细胞中的表达也明显下调。在体内动物模型中Let-7d*对球囊损伤大鼠颈动脉血管内膜的增殖具有抑制作用,在体外细胞模型中Let-7d*是血管平滑肌细胞生长的一个强有力的负性调控因子。结论Let-7d*在增殖的血管平滑肌细胞和内膜增生的血管壁中的表达下调,且Let-7d*对血管平滑肌细胞生长及大鼠颈动脉新生内膜增生均有明显的抑制作用。

糖尿病肾脏病患者血清let-7d mRNA的相对表达量与肾功能进展的相关性研究

目的探讨血清let-7d与糖尿病肾脏病(diabetic kidney disease,DKD)患者肾功能进展的关系。方法选取2017年4月~2018年10月期间在赤峰市医院治疗的DKD患者164例,所有患者在入组后均进行2年的随访,共有154例患者有完整的随访资料,根据肾功能进展情况将其分为进展组(52例)和未进展组(102例)。采用实时荧光定量PCR技术检测let-7d mRNA的相对表达量,分析DKD患者的肾功能进展的影响因素,分析DKD患者血清let-7d mRNA相对表达量与相关指标的相关性,采用接受者工作特征曲线(ROC)分析血清let-7d mRNA的相对表达量对DKD患者肾功能进展的预测价值。结果进展组的病程长于未进展组,血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、胱抑素C(Cys C)、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平均高于未进展组,肾小球滤过率(eGFR)、let-7d mRNA相对表达量均低于未进展组,差异均有统计学意义(t=2.403~7.436,均P<0.05)。多因素非条件Logistic回归分析显示,Cys C和TGF-β1水平过高均是DKD患者肾功能进展的危险因素,而eGFR和let-7d mRNA相对表达量水平过高则是DKD患者肾功能进展的保护因素(P<0.05)。Pearson分析显示,DKD患者血清let-7d mRNA相对表达量与SCr,BUN,Cys C和TGF-β1均呈负相关(r=-0.491~-0.302,均P<0.05),与eGFR呈正相关(r=0.405,P<0.05)。ROC分析结果显示,血清let-7d mRNA的相对表达量对DKD患者肾功能进展的预测价值较高,曲线下面积为0.874。结论let-7d与DKD患者肾功能进展情况密切相关,其可能是通过调控肾纤维化参与疾病的发生、发展。

let-7d-5p调控HPV16阳性宫颈癌细胞侵袭、迁移及凋亡的分子机制

目的研究let-7d-5p对人乳头瘤病毒相关宫颈癌细胞迁移侵袭和凋亡的影响机制.方法运用RT-qPCR法检测人正常子宫颈上皮细胞HcerEpic、人乳头瘤病毒相关宫颈鳞癌细胞Caski中let-7d-5p、IL-10的表达;将miR-NC组(转染miR-NC)、let-7d-5p组(转染let-7d-5p mimics)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-let-7d-5p组(转染anti-let-7d-5p)、si-NC组(转染si-NC)、si-IL-10组(转染si-IL-10)、let-7d-5p+pc DNA组(共转染let-7d-5p mimics和pc DNA)、let-7d-5p+pc DNA-IL-10组(共转染let-7d-5p mimics和pc DNA-IL-10),均用脂质体法转染至Caski细胞;通过Western blot、Transwell小室、流式细胞术检测细胞中IL-10蛋白表达、细胞迁移侵袭及凋亡;双荧光素酶报告基因检测细胞let-7d-5p、IL-10的结合力.结果与人正常子宫颈上皮细胞HcerEpic相比,人乳头瘤病毒相关宫颈鳞癌细胞Cas-ki中let-7d-5p表达显著降低,IL-10的表达显著升高(P<0.05);过表达let-7d-5p、敲减IL-10均可抑制Caski细胞迁移侵袭,促进凋亡;let-7d-5p可抑制野生型IL-10细胞的荧光活性,并抑制IL-10的蛋白表达(P<0.05).过表达IL-10可逆转let-7d-5p对Caski细胞的迁移侵袭抑制和凋亡促进作用(P<0.05).结论let-7d-5p可抑制人乳头瘤病毒相关宫颈鳞癌细胞的迁移侵袭,促进凋亡,其机制与靶向IL-10有相关性.

Let-7d慢病毒载体体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经细胞

背景:微小RNA在生命体生长、衰老的过程中起着重要的作用,了解微小RNA let-7d家族成员对骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的影响可以对干细胞移植起促进作用。目的:探讨let-7d慢病毒载体在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化中的作用。方法:1构建大鼠慢病毒载体并感染大鼠骨髓间充质干细胞;实验分为未转染组、阴性对照组(感染空白慢病毒)、转染上调组(感染let-7d-LV)、转染下调组(感染let-7d-inhibition-LV)。2采用法舒地尔诱导转染后大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经细胞,以免疫细胞化学染色检测NSE、MAP-2的表达变化;RT-PCR检测MAP-2mRNA的表达变化;MTT法检测细胞存活率。结果与结论:倒置荧光显微镜下观察let-7d慢病毒载体转染成功。法舒地尔可以诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化,其中转染上调组的诱导效率与阴性对照组相比升高,NSE、MAP-2表达率上升(P<0.05);转染下调组的诱导效率与阴性对照组相比下降,NSE、MAP-2表达率下降(P<0.05)。结果表明let-7d慢病毒载体可以促进骨髓间充质干细胞向神经细胞的分化,通过控制let-7d的表达可以影响骨髓间充质干细胞向神经细胞的分化效率。

非小细胞肺癌患者血清细胞外囊泡测let-7d-3p水平检的临床价值

目的 检测非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma, NSCLC)患者血清细胞外囊泡(extracellular vesicles, EVs)中let-7d-3p水平的变化,评估其作为NSCLC患者辅助筛查液体活检分子标志物的临床应用价值。方法 选取2020年9月至2021年5月于东部战区总医院确诊的NSCLC患者102例及同期年龄、性别匹配的体检健康者70例,收集患者组及健康人对照组血清标本并分离EVs,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术检测各组血清EVs中let-7d-3p表达水平变化,ROC曲线分析血清EVs let-7d-3p测定对于NSCLC患者的辅助筛查价值。结果 与健康人对照组相比,NSCLC患者血清EVs中let-7d-3p水平显著降低[69.75(25.64,154.70)fmol/L vs 26.09(13.74,45.56)fmol/L],差异有统计学意义(U=1 830,P<0.001);同时,NSCLCⅠ期患者[26.07(11.15,45.30)fmol/L]血清EVs let-7d-3p水平亦显著降低(U=1 201,P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,血清EVs let-7d-3p水平用于筛查NSCLC患者及Ⅰ期患者的ROC曲线下面积(the area under the ROC curve, AUC^(ROC))分别为0.744(95%CI:0.667~0.821)和0.736(95%CI:0.653~0.819);当cut-off值为45.07 fmol/L时,血清EVs let-7d-3p筛查NSCLC及NSCLCⅠ期患者的敏感性和特异性分别为74.5%和60%,75.4%和60%。此外,NSCLC患者血清EVs let-7d-3p水平不受年龄、性别、吸烟史及病理类型的影响,差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 NSCLC患者尤其是早期患者血清EVs中let-7d-3p水平与健康人对照相比显著降低,具备作为NSCLC辅助筛查液体活检分子标志物的潜能。

宫颈癌患者HPV感染现状及miR-let-7d-5p、miR-3607-3p、CIP2A的诊断效能

目的研究宫颈癌患者人乳头瘤病毒(HPV)感染情况及微小核糖核酸(miR)-let-7d-5p、miR-3607-3p、蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子(CIP2A)的诊断效能。方法选取2021年1月-2022年12月十堰市人民医院收治的124例宫颈病变患者作为研究对象,其中宫颈癌患者36例、宫颈鳞状上皮内病变(SIL)患者41例和宫颈炎患者47例,分别纳入A组、B组和C组,比较三组HPV表达情况,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-let-7d-5p、miR-3607-3p、CIP2A对宫颈癌的诊断效能。结果A组HPV阳性表达率、HPV E6/E7信使核糖核酸(mRNA)高载量率及宫颈组织CIP2A表达水平均高于B组、C组,且B组高于C组(P<0.05),A组宫颈组织miR-let-7d-5p、miR-3607-3p表达水平均低于B组、C组,且B组低于C组(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,miR-let-7d-5p、miR-3607-3p、CIP2A联合检测诊断宫颈癌的曲线下面积(AUC)、敏感度和特异度分别0.937、94.44%和85.23%。结论宫颈癌患者HPV阳性表达率、HPV E6/E7 mRNA高载量率较高,宫颈组织miRlet-7d-5p、miR-3607-3p、CIP2A表达异常,三者联合检测诊断宫颈癌的诊断效能较高。

Let-7d在牙鲆变态发育期间的表达及靶基因预测

MicroRNAs(miRNAs)通过抑制编码基因的转录调控关键的生物学进程。研究发现,let-7是时序发育过程中的重要调控因子,在促进幼体向成体转变的发育过程中起着极其重要的作用。利用Solexa测序技术从牙鲆中成功鉴定出let-7家族的10个成员((let-7a,let-7b,let-7c,let-7d,let-7e,let-7f,let-7g,let-7h,let-7i,let-7j)。相对于let-7家族其他成员,let-7d的拷贝数最多,推测其在牙鲆发育过程中扮演着更重要的角色。运用实时荧光定量PCR方法分析let-7d在牙鲆变态发育不同时期的表达,结果发现,在对照组和甲状腺激素处理组,let-7d的表达模式类似:前5个时期(孵化后17 d,17dph;变态Ⅰ期,20 dph;变态Ⅱ期,23 dph;变态Ⅲ期,29 dph;变态Ⅳ期,36dph)表达量逐渐上升;变态晚期(36 dph)达到高峰;变态结束(41 dph)表达量呈现下降的趋势。定量结果显示,甲状腺激素下调let-7d的表达,与对照组呈显著性差异(P<0.05)。对牙鲆不同组织中let-7d的表达情况分析表明,let-7d主要存在于牙鲆的头部(脑,鳃,心脏)。靶基因预测发现,在目前已公布的482条牙鲆mRNA序列中,其中有30条mRNA的3'非翻译区(3'-UTRs)存在let-7d结合位点。这些预测的靶基因涉及到发育过程的许多方面:蛋白折叠,细胞分化,信号转导,病毒免疫反应和信号通路等。这些结果说明,let-7d在调控牙鲆从仔鱼向稚鱼转变的变态发育过程中起着极其重要的作用。

MiRNA Let-7和Lin28在散发性听神经瘤中的表达及意义

目的研究微小RNA Let-7与Lin28在散发性听神经瘤中的表达及二者之间的关系,探讨其对肿瘤进展可能的影响。方法收集18例经过术后病理证实的散发性听神经瘤组织作为实验组,7例正常胃迷走神经为对照组。采用RT-PCR、免疫组织化学染色方法,检测Let-7d和Lin28A/B mRNA的表达,以及Lin28蛋白的表达。结果 RT-PCR检测显示,Let-7dmRNA表达量在听神经瘤组织显著高于对照神经组织(P<0.001),Lin28A/B mRNA表达量在听神经瘤组织显著低于对照组织(PLin 28A=0.004,PLin28B=0.001)。在听神经瘤组织中,Let-7d与Lin28A/B mRNA的表达存在负相关关系(r=-0.671,P=0.002;r=-0.662,P=0.003)。免疫组织化学检测显示在听神经瘤与正常神经组织中均未发现Lin28蛋白阳性染色。结论在听神经瘤的生长及恶性转化抑制机制中,以微小RNA为主导的Let-7d/Lin28双向负反馈调节可能起重要作用。