滤白机采血小板消除白细胞干扰血小板RNA实验的研究

目的探讨滤白机采血小板中混入的少量白细胞对血小板RNA相关检测的影响及进一步去白细胞的方案。方法将滤白机采血小板进行分组处理。1)对照组:直接离心收集血小板细胞;2)离心纯化组:将血小板分别以不同离心力进行离心,收集沉淀细胞组分、回收悬浮细胞组分;3)磁珠纯化组:用磁珠法去除血小板中的CD45阳性白细胞,回收CD45阴性血小板细胞。分别提取以上细胞的总RNA,并逆转录合成cDNA。以cDNA为模板PCR扩增管家基因β-actin、血小板标志物ITGA2B、白细胞标志物PTPRC基因片段。根据扩增产物电泳结果判断血小板中的白细胞对血小板mRNA检测的影响,以及离心纯化法和磁珠纯化法去白细胞的效果。结果滤白机采血小板直接离心所得细胞、滤白机采血小板以不同条件离心后收集的沉淀细胞和悬浮细胞,其cDNA中白细胞标志物PTPRC cDNA检测均呈阳性;磁珠法纯化后血小板cDNA中PTPRC cDNA检测呈阴性。结论滤白机采血小板中混入的少量白细胞可干扰血小板RNA相关检测。简单离心法不能去除血小板中的白细胞污染,但磁珠法可有效进一步去除白细胞。

去白细胞单采血小板保存期外泌体形态及蛋白质组学分析

目的探讨去白细胞单采血小板(leukocyte-free apheresis platelet,LFA-Plt)保存期内所释放的外泌体(exosome,EXO)形态及蛋白组学变化,评价血小板保存质量,预测不同保存期血小板EXO功能。方法超速离心法提取EXO,并对其进行电镜、粒径、WB鉴定;4D Label-free定量蛋白质组学技术对EXO进行蛋白定量分析,并对所有鉴定到的蛋白质进行生物信息学分析;对保存d3、d5两组LFA-Plt EXO进行蛋白差异分析并对差异蛋白进行GO功能和KEGG通路显著性富集分析。结果成功获取杯托状、CD9/TSG101富集、Calnexin(-)的EXO;保存d3、d5的LFA-Plt EXO粒径分别为(82.2±19.6)nm、(83.4±19.4)nm;蛋白浓度分别为(0.55±0.13)μg/μL、(0.51±0.08)μg/μL,差异无统计学意义(P>0.05);两组样品中共鉴定到1504个蛋白质,GO功能富集分析显示,LFA-Plt所分泌的EXO蛋白主要集中在细胞膜、胞外区以及蛋白酶体核心复合体,与蛋白、ATP、钙离子及GTP结合能力相关,主要参与氧化还原、蛋白质水解、信号转导等过程;KEGG功能注释显示,EXO蛋白主要参与物质运输、分解代谢及遗传信息的处理,与人类肿瘤及病毒细菌感染密切相关,影响人类免疫系统的代谢;与d3相比,d5 EXO有16个蛋白显著上调;GO富集分析显示16种上调蛋白主要与腺苷同型半胱氨酸活性、6-磷酸果糖激酶活性相关,主要参与有机氮化合物代谢过程;KEGG富集通路分析显示保存末期LFA-Plt EXO上调的蛋白最主要功能是参与孕酮介导的卵母细胞成熟的信号通路。结论本中心LFA-Plt制备、保存条件下血小板质量能够保持相对稳定;不同保存期EXO蛋白质功能有一定差别,可能影响血小板输注效果。

冰冻和常规保存机采血小板在血液病患者中的应用评价

目的 研究冰冻和常规保存的机采血小板在血液病患者中的临床疗效。方法 16 0例患者使用常规保存血小板 171个治疗量 ,4 90例患者使用冰冻保存血小板 5 91个治疗量 ,比较血小板输注有效率 (CCI)和临床症状改善情况。结果 常规和冰冻保存机采血小板的输注有效率分别为 5 7.3%和 5 2 .5 % ;临床症状改善率分别为 93.6 %和 85 .1%。未发生严重的输血反应。结论 输注机采血小板可有效地预防和治疗出血和血小板减少 ,常规保存机采血小板较冰冻保存机采血小板对血液病患者具有更好的疗效。

白细胞滤除对机采血小板质量的影响研究

本研究旨在评价白细胞滤除对机采血小板整体质量的影响。随机选取20单位单供者机采血小板在(22±2)℃条件下振荡保存24-96小时后使用血小板型白细胞过滤器进行过滤,分别检测机采血小板过滤前后的血小板浓度、平均血小板体积(MPV)、血小板单位容量、白细胞量、pH值、乳酸脱氢酶(LDH)浓度、K+浓度、血小板膜表面CD62p表达率、血小板凝血指数MA值,并计算白细胞去除率和血小板损失率。结果表明:机采血小板经白细胞过滤器过滤后,残留白细胞计数明显低于滤前白细胞计数(p<0.001),白细胞去除率达到了99.97%;血小板损失率为(8.1±4.2)%,明显低于20%的国家标准规定(p<0.001);与过滤前相比,过滤后MVP、机采血小板保存介质中的LDH浓度、K+浓度和pH值无明显变化(p>0.05),过滤后的血小板膜表面CD62p表达率出现轻度下降(p>0.05),但滤盘灌注液内血小板膜表面CD62p表达率却明显高于滤前(p<0.05);过滤后血小板MA值出现轻度下降,但无明显统计学差异(p>0.05)。结论:使用白细胞过滤器可以有效去除机采血小板中混杂的白细胞及部分活化血小板,使血小板损失率控制在较低水平,且对于血小板凝血活性没有产生明显影响。过滤后的机采血小板达到预防巨细胞病毒感染及HLA同种免疫的质量要求。

白细胞过滤对血小板保存期间炎性细胞因子水平的影响及临床效果的评估

目的 考察浓缩血小板悬液 (plateletconcentratesuspend ,PCs)在保存期内IL 1β、IL 6、IL 8和TNF α的浓度变化和过滤对其的影响 ,了解在保存前滤除PCs中的白细胞是否能有效地减少这些细胞因子的积累和降低受血者非溶血性发热性输血反应 (febrilenonhemolytictransfusionreactions,FNHTR)发生率。 方法 将 1单位PCs分成两等份 ,分别给予血小板专用白细胞滤器过滤处理和不滤除白细胞处理 ,保存 5d。在 0、3、5d测定IL 1β、IL 6、IL 8和TNF α含量及白细胞计数 ,采用配对t检验进行统计分析 ;临床观察未滤组和过滤组PCs输后FNHTR发生率。结果 PCs中的白细胞计数与保存 5d时IL 1β、IL 6、IL 8和TNF α水平之间呈正相关。未滤组PCs中有较多白细胞混入 [(35 1± 81)× 10 6/袋 ],在保存期间IL 1β、IL 6、IL 8和TNF α水平明显升高 ;过滤组的PCs残余白细胞 <1× 10 6/袋在保存期间诸细胞因子均保持在 0d水平 ;临床观察显示 ,末滤PCs与过滤PCs输注后FNHTR发生率分别为 2 0 .83%和 5 .83% ,P <0 .0 1。结论 保存前用血小板专用去白细胞滤器去除PCs中残留的白细胞能有效地防止细胞因子的积累 ,同时保留 95 %以上的血小板。

四种血小板制品滤除白细胞效果的实验研究

目的观察过滤对血小板的影响,遴选适于过滤的血小板制品。方法对机采血小板、手工浓缩血小板和相应的两种冰冻血小板进行过滤,观察血小板回收率、白细胞去除率和血小板聚集率等多项血小板功能指标。结果机采血小板回收率为86.81%,手工浓缩血小板回收率仅为73.08%;两种冰冻血小板制品损失量达60%～70%;过滤后机采血小板达到去白细胞标准,而手工血小板未达到去白细胞标准;过滤对液态保存血小板制品的功能无明显影响,但手工浓缩血小板功能低于机采血小板。结论冰冻保存的血小板制品不适于去白细胞过滤;手工浓缩血小板制备工艺尚需进一步改进和提高,并研制与之相适应的去白细胞滤器;机采血小板质量较好,国产滤器可达到去白细胞标准,是当前适于滤除白细胞的血小板制品。

浓缩血小板制剂中滤除白细胞输血器的临床应用

目的 :测试PL型滤器对浓缩血小板制剂 (PCs)中白细胞的滤除作用。 方法 :对 40例次血液病伴血小板减少的患者输注滤除白细胞的PCs,测定滤除前、后PCs中的血小板数、白细胞数和GMP 140。 结果 :血小板回收率为 (91.5± 7.8) % ,白细胞滤除率为 99.9% ,输注无效率分别为 16 .2 5 % (Donna标准 )和 8.75 % (Eernise标准 )。未增加血小板激活 ,临床出血征象消失和好转率 93%。 结论 :PL型白细胞滤器具有高血小板回收、高白细胞去除、体外不激活血小板的高质量特点 ,是滤除PCs中白细胞的理想滤器。

冰冻血小板与新鲜血小板的疗效比较

目的比较冰冻血小板和新制备的血小板的在临床上的应用效果。方法选268例新制备的血小板与296例冰冻的血小板输注病例,观察两组输注血小板前后的临床表现并进行血小板的计数。结果在564例病案中,输注新制备血小板后的患者外周血血小板上升的程度和总有效率明显高于输注冰冻血小板的患者,两者之间差异有显著性(P<0.05)。结论输注新鲜血小板或冰冻血小板均能达到控制及预防出血的治疗作用,并且提升机体血小板数值,虽然新鲜血小板的疗效优于冰冻血小板,但冰冻血小板可以在抢救危重患者时代替机采新鲜血小板。

混合浓缩血小板在1种国产一次性滤除白细胞血小板贮存袋中保存质量研究

目的考察浓缩血小板混合后在一次性滤除白细胞血小板贮存袋保存过程中的质量变化。方法采用富血小板血浆法(PRP法)从400 mL新鲜全血制备浓缩血小板,将10-12 U(1 U约30 mL)ABO血型同型的浓缩血小板混合并滤除白细胞后,注入一次性滤除白细胞血小板贮存袋振荡保存,共完成10例(袋);分别于滤除白细胞前、后以及保存d1、d3、d5、d7观察涡流现象,检测pH值、血细胞计数、血小板聚集、血小板低渗休克(HSR)、血小板形变能力(ESC),CD62p阳性表达率、血小板ATP含量、葡萄糖和乳酸含量等指标。结果 1个成人治疗剂量的混合浓缩血小板滤除白细胞后血小板回收率(86.7±1.6)%,HSR(3.87±12.75)%,剩余白细胞数(0.15±0.15)×106个,滤除白血病前、后血小板pH值、HSR(%)和CD62p阳性率(%)分别为7.00±0.17 vs 7.06±0.16、66.96±12.35 vs 63.22±8.26、28.94±14.25 vs 31.60±16.77,花生四烯酸诱导时的聚集率(%)106.2±23.5 vs 106.5±20.1,ADP+肾上腺素诱导时的聚集率(%)104.8±19.0 vs 106.5±18.6(P>0.05)。随着保存时间的延长,混合浓缩血小板的各项指标绝对值发生变化:保存d1及d5(有效保存期末)的pH值、HSR(%)、CD62p(%)及ESC(%)分别为7.27±0.12 vs 7.13±0.21、62.28±6.93 vs 65.53±8.23、30.27±9.06 vs 34.45±14.23、14.28±2.01 vs 8.55±4.12,花生四烯酸诱导时的聚集率(%)92.2±6.1 vs 86.3±23.1,ADP+肾上腺素诱导时的聚集率(%)为93.2±6.7 vs 44.5±41.6。ATP(μmol/1011个血小板)、乳酸(mmol/L)、葡萄糖(mmol/L)分别为5.40±1.66 vs 4.97±1.01、8.35±2.94 vs 13.87±2.97、24.55±1.53vs 20.75±2.04。结论浓缩血小板经混合、滤除白细胞后放入一次性滤除白细胞血小板贮存袋中保存,保存过程中其质量符合国家标准,可以作为临床单采血小板的补充。

机采新鲜血小板与新鲜冰冻血小板的临床疗效分析

目的分析机采新鲜冰冻血小板的临床应用效果,缓解抢救患者时新鲜血小板供不应求的现象。方法将患者随机分为两组,分别采用机采新鲜血小板与机采新鲜冰冻血小板进行临床输注,观察输注前后患者的临床体征及血小板计数。结果机采新鲜血小板组疗效显著优于新鲜冰冻血小板组(P<0.05)。结论机采新鲜冰冻血小板可用于抢救因血小板减少导致的出血性疾病患者。

机采血小板低温冰冻保存与常规液态保存的主要参数比较

目的对照常规液态保存条件下,实际观察血小板计数（PLT）血小板平均体积（MPV）、血小板分布宽度（PDW）、p H值、低渗休克反应（HSR）和CD62p参数,作为血小板冰冻保存的主要质量监控数据。方法采用Trima5.0血细胞分离机采集血小板32个治疗单位（血小板数≥2.5×1011/L,容量250~300 ml）,22℃振荡保存96 h后,采用无菌导管接口机留样10 ml为新鲜组,保存袋中加入终浓度5%的二甲亚砜（DMSO）低温保护剂,采用无菌导管接口机留样10 ml。冰冻样管置-80℃冰冻保存10个月,使用时42℃水浴溶解。结果相比较96 h常规保存条件下,-80℃冰冻保存10个月后解冻血小板计数的差异无统计学意义（P〉0.05）,MPV、PDW的差异有统计学意义（P〈0.05）,p H值的差异无统计学意义（P〉0.05）,HSR、CD62p的差异有统计学意义（P〈0.05）。结论相对于机采新鲜血小板,冰冻血小板的活力有所下降,但活化程度有所提高。

白细胞过滤在预防血小板输注无效中的作用

目的探讨白细胞过滤在预防血小板输注无效(PTR)中的作用。方法患者于输注机采血小板前1h和输注后24h检查静脉血小板数量,计算血小板计数纠正增加指数(CCI),以输注后24h CCI<4.5×109/L为PTR;部分发生PTR的患者,于再次输注血小板前,采用白细胞滤器进行白细胞过滤。结果机采血小板输注次数、累积剂量与输注效果比较,差异有统计学意义(P<0.005);白细胞过滤与未过滤组比较,差异有统计学意义(P<0.005)。结论 PTR的发生与患者血小板输注剂量和次数有关,输注剂量越大,次数越多,发生PTR的机率越高;白细胞过滤可有效预防PTR。

机采新鲜血小板与新鲜冰冻血小板的临床应用疗效分析

目的探讨机采新鲜冰冻血小板的临床应用效果,以弥补抢救病人时新鲜血小板难以供应。方法采用机采新鲜血小板与机采新鲜冰冻血小板临床输注疗效分析,随机分为两组对照,观察血小板输注前后的临床体征及血小板计数。结果两组疗效分析,机采新鲜血小板组疗效优于新鲜冰冻血小板组疗效。结论机采新鲜冰冻血小板可以用于抢救由于血小板减少导致的出血性疾病。

白细胞过滤及γ射线照射在预防血小板输注无效中的作用研究

目的观察血液病患者输注机采血小板的治疗效果,探讨白细胞过滤及γ射线照射在预防血小板输注无效(PTR)中的作用。方法 759例患者每次输注机采血小板前1 h和输注后24 h检查靜脉血小板数量,计算血小板计数纠正增加指数(CCI),以输注后24 h CCI<4.5×109·L-1为PTR;发生PTR的患者,在再次输注血小板前,分别进行67例次的白细胞过滤和81例次的γ射线照射,其中,有26例次的血小板联合应用了这2项技术。结果 3 467例次输注新鲜机采血小板,无效率1 222/3 467,35.25%。免疫性血小板减少症(ITP)组的PTR发生率最高49.35%;机采血小板输注次数、累积剂量与输注效果比较,血小板量10 U,无效率26.2%;20 U,无效率51.72%;≥30 U,无效率73.58。20 U与10 U,≥30 U与10 U、20 U与≥30 U比较,χ2分别为38.56、106.46、14.29,P均<0.05。白细胞过滤、γ射线照射及γ射线照射联合白细胞过滤后的PTR发生率分别是19.51%(8/41)、20.00%(11/55)和3.85%(1/26),P均>0.05,但三者与未经治疗前患者的PTR发生率比较有显著差异(P<0.05)。结论 PTR的发生随患者疾病的不同而不同,ITP患者的PTR发生率最高;PTR的发生与患者血小板输注剂量有关,输注剂量越大,发生PTR的机率越大;白细胞过滤、γ射线照射等对预防PTR有明显效果。

不同贮存时间的单采少白细胞血小板中精氨酸酶水平的研究

目的:探讨不同贮存时间对单采少白细胞血小板(apheresis leukocyte-reduced platelet,ALR-Plt)中精氨酸酶水平的影响及精氨酸酶的可能来源。方法:应用ELISA法检测不同贮存时间ALR-Plt和对照血浆中精氨酸酶水平及髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)水平;应用相关性分析分析不同贮存时间的ALR-Plt中精氨酸酶水平与MPO水平的相关性。结果:贮存3 d内的ALR-Plt与对照血浆中精氨酸酶水平差异无统计学意义,但是贮存超过3d的ALR-Plt中精氨酸酶水平显著高于贮存3 d内的ALR-Plt和对照血浆中的水平(P<0.05)。不同贮存时间的ALR-Plt之间MPO水平差异无统计学意义,但均显著低于对照血浆中的水平(P<0.05)。相关性分析显示:ALRPlt中精氨酸酶水平与MPO水平呈正相关(r=0.58)。结论:贮存时间超过3 d的ALR-Plt中精氨酸酶水平显著升高,其可能来源于残留的少量白细胞,特别是中性粒细胞。

接枝不同官能团的聚酯材料对血小板黏附及其功能的影响研究

目的考察接枝不同官能团(-COOH、-OH、两性基团)的聚对苯二甲酸丁二醇酯(PBT)膜对血小板黏附及血小板功能的影响,选择适用于过滤去除浓缩血小板中白细胞的材料。方法利用紫外改性的方法,将不同单体包括丙烯酸(AA)、丙烯酸羟乙酯(HEA)和N-(3-磺丙基)-N-甲基丙烯酸基氧乙基-N,N-二甲基铵内铵盐(SMDB)接枝到PBT表面,得到接枝不同官能团的PBT膜,包括PBT-AA(-COOH)、PBT-HEA(-OH)、PBT-SMDB(两性基团);通过傅里叶红外光谱、水接触角及表面粗糙度等指标对改性PBT的理化性能做表征,采用扫描电镜观察改性PBT对血小板的黏附,并通过检测PBT改性前后的血小板聚集率、低渗休克相对变化、CD62p表达率等指标,考察改性PBT对血小板功能的影响。结果在红外光谱的1 047和1 043 cm-1处出现了C-O-C的弯曲振动峰和O=S=O的对称伸缩振动峰,提示HEA和SMDB接枝到了PBT膜表面。扫描电镜显示:未改性的PBT膜表面黏附的血小板数明显多于改性PBT膜表面,且可以观察到明显的伪足。血小板黏附数在接枝不同官能团的PBT膜表面顺序为:-COOH>两性基团>-OH。未改性PBT组(n=6)与对照组(未接触材料的血小板)(n=6)比较:血小板最大聚集率(%)为87.22±2.10 vs 82.36±2.11,低渗休克相对变化率(%)为79.33±1.27 vs 77.12±1.09,CD62p表达率增加(%)为9.78±0.58 vs 17.45±1.25(P<0.05)。在接枝不同官能团的改性PBT膜中,PBT-HEA(n=6)对血小板聚集和血小板活化等功能影响最小[血小板最大聚集率(93.34±1.45)%、血小板低渗休克相对变化率(81.26±1.48)%、CD62p表达率(12.51±0.85)%]。结论表面接枝HEA的聚酯对血小板的黏附及功能影响明显小于接枝其他官能团的材料,或可作为用于浓缩血小板过滤去除白细胞的新材料。

3种白细胞滤器对机采血小板白细胞去除效果的对比研究

目的评价3种去白细胞滤器对机采血小板的滤白效果及过滤前后机采血小板质量的变化。方法随机选取60U机采血小板在(22±2)℃条件下振荡保存24～96h。分别用3种不同滤器对血小板进行过滤,检测机采血小板过滤前后的血小板计数(PLT)、血小板单位容量、白细胞量、pH值、乳酸脱氢酶(LDH)浓度、K+浓度、血小板膜表面CD62p表达率,计算白细胞残留量和血小板回收率。结果与过滤前相比,各组过滤后机采血小板pH值、LDH浓度、K+浓度和CD62p表达率均无显著差异(P>0.05);白细胞残留量达到了医药行业标准;过滤后3组间血小板膜表面CD62p表达率(均数差为2.8%、5.4%、2.6%)和血小板回收率[(92.6±6.3)%、(82.6±4.4)%、(87.4±2.7)%]有显著差异(P<0.01)。结论 3种白细胞滤器均可有效去除机采血小板中的白细胞,过滤后的机采血小板符合血液质量要求。A组滤器过滤后能保持较高的血小板回收率并有效避免血小板激活。

少白混合血小板的制备及临床应用

目的:观察少白混合血小板的血小板数量、红细胞混入量、白细胞残留量、无菌试验等指标及临床输注效果,评价少白混合血小板输注有效性。方法:应用富含血浆法制备浓缩血小板,通过无菌接驳混合在一起,进行白细胞过滤,并测定86例少白混合血小板的几项特定指标;观察158例少白混合血小板输注后24H的血小板校正计数增加指数(CCI)的变化。结果:91.8%(79/86)的少白混合血小板的几项特定指标与单采血小板的质量要求相符;142例患者输注少白混合血小板后止血或出血改善,CCI>10000。结论:少白混合血小板应用于临床能达到较好的止血效果,并且能节约血源,弥补单采血小板的不足,满足临床用血需要。

应用滤除白细胞输血器输注血小板的临床护理分析

目的 为测试PL型滤器对浓缩血小板制剂(PCs)中白细胞的滤除作用。方法 在临床进行40例次伴血小板减少的血液病患者输注滤除白细胞的PCs。测定滤前、后PCs的血小板数、白细胞数。结果 血小板回收率为(91.5±7.8)％,白细胞滤除率为99.9％,输注无效率分别为16.25％(Donna标准)和8.75％(Eernise标准)。临床出血征象消失和好转率为93％。结论 PL型白细胞滤器具有高血小板回收、高白细胞去除的特点,是PCs滤除白细胞的理想滤器。

少白细胞混合血小板的制备及临床观察

目的:探讨少白细胞混合血小板(LDPPCs)的制备方法及临床应用的安全性。方法:利用富血小板血浆法制备出浓缩血小板(PCs)后,将7人份PCs混合,离心洗涤清除袋底的白细胞、红细胞以及血浆,然后加入其中1人份的新鲜血浆200ml悬浮即为LDPPCs。用血小板的MPV、P-LCR、计数、pH和白细胞、红细胞残余量、血小板活化试验、黏附试验等指标来评价血小板洗涤前后的质量变化。随机选择临床内科需要输注血小板的32名患者,分为两组。观察组每次输注1个治疗量(血小板数≥2.5×1011)少白细胞混合血小板,对照组每次输注1个治疗量(血小板数≥2.5×1011)单采血小板,检测输前、输后患者24h血小板计数,并计算血小板校正增加值(CCI)及血小板回收率。结果:洗涤混合前、后及保存72h的MPV、P-LCR、白细胞、红细胞残余量、pH值分别为(8.10±0.12)、(7.20±0.18)、(7.30±0.21)fl,(0.158±0.011)%、(0.146±0.031)%、(0.148±0.024)%,(598.76±803.24)×106、(46.69±60.17)×106、(46.69±60.17)×106,(69.64±49.34)×109、(1.25±1.16)×109、(1.25±1.16)×109,(7.08±0.23)、(6.93±0.39)、(6.93±0.17)。PCs和LDPPCs的PAC-1、黏附率分别为(2.85±0.42)%、(7.65±0.73)%,(4.65±0.34)%、(4.68±0.51)%。LDPPCs、单采血小板临床输注24h后CCI分别为(10.56±5.09)、(12.13±8.82)。洗涤前后P-LCR、pH值相比差异无统计学意义,MPV、白细胞、红细胞残余量相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:利用此方法制备的LDPPCs的各项质量指标符合国家标准,临床输注是安全的,疗效是确切的,未观察不良反应,可以作为单采血小板的有益补充。